Fibromialgia e Azeite

Mirar:

O objetivo do presente estudo é investigar os efeitos de dois azeites com diferentes teores de antioxidantes nos fatores de risco cardiovascular (parâmetros de coagulação sanguínea, índices de plaquetas, contagem de glóbulos vermelhos, marcadores inflamatórios, perfil lipídico, óxido nítrico e cortisol) em pacientes diagnosticado com fibromialgia. Os investigadores determinarão os parâmetros relacionados à trombose (níveis de fibrinogênio, tempo de protrombina, atividade de protrombina, tempo de cefalina, contagem de plaquetas, largura de distribuição de plaquetas [PDW], volume médio de plaquetas [MPV], plaquetcrit, contagem de glóbulos vermelhos [RBC], contagem de neutrófilos razão para linfócitos [NLR] e razão plaqueta para linfócitos [PLR]), marcadores inflamatórios (interleucina 6 [IL-6], IL-10, proteína C-reativa [PCR], taxa de sedimentação de eritrócitos (ESR)) , níveis de óxido nítrico, perfil lipídico e níveis de cortisol.

Participantes:

Este estudo será realizado de acordo com as disposições da Declaração de Helsinque da Associação Médica Mundial.

O grupo de pesquisa entrará em contato com uma associação espanhola de pacientes com fibromialgia, AFIXA (Associação de Fibromialgia de Jaén, Espanha) para encontrar pacientes para participar do estudo. Os investigadores vão reunir doentes no laboratório da Faculdade de Ciências da Saúde da Universidade de Jaén (Espanha) para obter vários dados de interesse (idade, IMC, outras doenças crónicas, gravidez, lactação e medicação). Com base nesses dados, os investigadores selecionarão o grupo de fibromialgia. Em uma segunda visita ao laboratório, todos os pacientes assinarão um termo de consentimento informado, as amostras de sangue serão coletadas e eles preencherão vários questionários (Fibromyalgia Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

As mulheres com fibromialgia serão previamente diagnosticadas com fibromialgia por um reumatologista profissional e preencherão os critérios do American College of Rheumatology (ACR) para fibromialgia. Os critérios de exclusão serão a presença de qualquer outra doença crônica (diabetes mellitus, hipertensão, artrite reumatoide, hepatite, câncer ou cardiopatia isquêmica), dislipidemia, gravidez, lactação ou obesidade grau II (IMC ≥ 35 kg/m2). Nenhum dos participantes será tratado com anticoagulantes, corticosteróides, estrogênios, analgésicos ou anti-inflamatórios, e somente serão incluídos se tiverem parado de usá-los pelo menos 2 meses antes do início de nosso estudo. Nenhum consumirá álcool regularmente e todos serão não fumantes. Todos os participantes serão sedentários.

Desenho do estudo: Será realizado um ensaio nutricional randomizado, controlado e duplo-cego. O ensaio consistirá no consumo de 50 ml/dia de um dos dois azeites biológicos com diferentes teores antioxidantes, EVOO ou ROO, durante 3 semanas. Um ensaio nutricional de curta duração, como o presente, pode oferecer algumas vantagens em relação a um ensaio de longa duração, pois permite aos pacientes aderir a uma dieta mais rigorosa e controlada em relação à ingestão de outros antioxidantes. Dessa forma, pode-se limitar a possível interferência de outros antioxidantes, bem como a interferência de possíveis mudanças no estilo de vida dos pacientes, que também poderiam alterar os resultados.

Os participantes serão designados aleatoriamente para um dos dois grupos: EVOO e ROO. Antes de iniciar o teste dietético de 3 semanas, os participantes realizarão um período de washout de 2 semanas durante o qual consumiram ROO (50 ml diariamente por 2 semanas) porque fazem parte de uma população que consome azeite regularmente. Marcadores bioquímicos e parâmetros clínicos em cada participante serão determinados antes e após o período de tratamento de 3 semanas.

Os azeites orgânicos serão obtidos da Olifarma S.L. (Granada, Espanha). Os azeites serão embalados de forma semelhante e os participantes serão cegados quanto ao tipo de azeite que irão consumir. Os participantes consumirão o azeite de tratamento cru, mas usarão ROO para cozinhar, a fim de manter inalterada a ingestão de antioxidantes. Os investigadores fornecerão ROO para cozinhar em quantidade suficiente para toda a família. Os pesquisadores estimarão a ingestão dos participantes por meio de um recordatório de 24 horas que eles completarão por 3 dias (2 dias úteis e um dia de folga) no início do estudo. Os investigadores usarão a média dos valores obtidos ao longo dos 3 dias para calcular a ingestão de energia (kcals/dia) dos participantes e a ingestão de macronutrientes (carboidratos [g/dia], lipídios [g/dia] e proteína [g/dia ]) e micronutrientes, especialmente aqueles que podem ter efeito antioxidante, incluindo vitamina C, vitamina A, cobre, zinco e selênio. Com base nessa análise, os investigadores fornecerão a todos os participantes recomendações dietéticas, focando nos aspectos que cada um deve melhorar. Os dados do peso dos participantes no início e no final da tentativa serão registrados. Os investigadores solicitarão que os participantes devolvam todos os recipientes de azeite de tratamento (os recipientes consumidos e não consumidos) no final do ensaio para controle do consumo de azeite (ou seja, uma contagem dos recipientes vazios e cheios que cada participante retornará).

Coleta de sangue e preparação de amostras de sangue: Após o jejum noturno, o sangue venoso será coletado no início da manhã da veia antecubital em vários tubos com anticoagulante e tubos sem anticoagulante. O sangue dos tubos sem anticoagulante será deixado coagular por 30 min em temperatura ambiente. Os tubos com anticoagulante e sem anticoagulante serão então centrifugados a 3500 rpm por 5 min a 4°C para obtenção de amostras de plasma e soro, respectivamente. O sangue será coletado sempre no mesmo horário do dia para evitar variações circadianas. Parâmetros relacionados à trombose (níveis de fibrinogênio, tempo de protrombina, atividade de protrombina, tempo de cefalina, contagem de plaquetas, largura de distribuição de plaquetas [PDW], volume médio de plaquetas [MPV], plaquetcrit, contagem de glóbulos vermelhos [RBC], proporção de neutrófilos para linfócitos [NLR] e relação plaqueta-linfócito [PLR]) e velocidade de sedimentação de eritrócitos (ESR) foram determinados em amostras de plasma. Marcadores inflamatórios (interleucina 6 [IL-6], IL-10, proteína C reativa [PCR]), níveis de óxido nítrico, perfil lipídico e níveis de cortisol foram medidos em amostras de soro.

Características clínicas dos participantes: Os investigadores obterão dados demográficos e clínicos a partir de entrevistas e questionários dos participantes. O mesmo especialista realizará todas as medições e testes ao longo do estudo. Os questionários serão preenchidos imediatamente após a coleta de sangue. Os pesquisadores avaliarão a capacidade funcional nas atividades da vida diária em pacientes com fibromialgia usando a versão em espanhol do Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). A pontuação do FIQ, que é o instrumento mais utilizado pelos pesquisadores para estimar a gravidade da fibromialgia, varia de 0 a 100. A dor musculoesquelética autorreferida será avaliada em pacientes com fibromialgia por meio de uma Escala Visual Analógica (EVA; 10 cm). Para ambos os instrumentos, escores mais altos refletem pior sintomatologia. Os investigadores avaliarão o estado de saúde físico (Resumo do Componente Físico, PCS-12) e mental (Resumo do Componente Mental, MCS-12) dos pacientes e controles usando a versão em espanhol da Pesquisa de Saúde de Formulário Resumido de 12 Itens (SF-12 ). As pontuações variam de 0 a 100, com valores mais baixos refletindo pior estado de saúde.

Determinação de parâmetros bioquímicos

Medição de óxido nítrico (NO): a produção de NO foi indiretamente quantificada pela medição de compostos de nitrato/nitrito e S-nitrose (NOx) usando um método baseado em quimioluminescência de ozônio. As alíquotas de soro descongeladas foram desproteinizadas com soluções de NaOH 0,8 N e ZnSO4 16%. A quantidade total de NOx será determinada conforme descrito anteriormente (Rus et al., 2011) utilizando o sistema de purga da Sievers Instruments, modelo NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), EUA).

Determinação de Marcadores Inflamatórios: O nível de IL-6 será determinado por um imunoensaio quimioluminescente utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access (Beckman Coulter). Os níveis de IL-10 serão medidos por um ensaio imunoenzimático quimioluminescente usando um luminômetro MLX™ (Dynex Technologies, Chantilly, VA). A PCR será medida usando um analisador AU 5800 (Beckman Coulter).

Medição de cortisol: O nível de cortisol será determinado em amostras de soro por um imunoensaio de polarização de fluorescência usando um analisador AxSYM (Abbott Laboratories, Illinois (IL), EUA).

Determinação do Perfil Lipídico: O perfil lipídico sérico (colesterol total, lipoproteína de alta densidade [HDL]-colesterol, triglicerídeos, apolipoproteína A1 e apolipoproteína B) será medido por um procedimento espectrofotométrico usando um analisador OLYMPUS AU 5400 (Beckman Coulter). Os níveis de lipoproteína de baixa densidade (LDL)-colesterol serão estimados indiretamente com a equação de Friedewald. O nível de homocisteína será determinado por um imunoensaio de polarização de fluorescência usando um analisador AxSYM (Abbott Laboratories). Os pesquisadores determinarão a peroxidação lipídica medindo as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que são um bom indicador da peroxidação lipídica, um importante marcador de estresse oxidativo. TBARS será determinado espectrofotometricamente em amostras de plasma seguindo as recomendações do fabricante (TBARS Assay Kit, OXItek, Catálogo. 0801192).

Determinação de parâmetros relacionados à trombose: Os parâmetros de coagulação sanguínea (níveis de fibrinogênio, tempo de protrombina, atividade de protrombina e tempo de cefalina) serão determinados em amostras de plasma usando o analisador BCS XP (Siemens Healthineers, Erlangen, Alemanha). Os pesquisadores medirão os determinantes da função plaquetária (contagem de plaquetas, largura de distribuição de plaquetas [PDW] e volume médio de plaquetas [MPV]) e contagem de glóbulos vermelhos (RBC), neutrófilos e linfócitos em amostras de plasma por citometria de fluxo usando o ADVIA 2120 analisador (Siemens Healthineers, Erlangen, Alemanha).

Avaliação do tamanho da amostra: O tamanho da amostra foi estimado usando o software Ene 3.0 (GlaxoSmithKline). O tamanho da amostra foi estimado com base nos níveis de malondialdeído (Gassió et al., 2008). Com hipótese unilateral, assumindo uma probabilidade de erro tipo I de 5%, risco β de 0,10, com desvio padrão do efeito de 1,4, considera-se necessário 10 pacientes por ramo do estudo, ou seja, um total de 20 pacientes. Se for assumido 10% de perdas de pacientes, será necessário um tamanho amostral mínimo de 24 pacientes, 12 para cada ramo do estudo.

Análise estatística: A análise estatística dos dados será realizada utilizando o pacote estatístico IBM SPSS Statistics 24 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). O teste de Kolmogorov-Smirnov e o teste de Levenne serão realizados para testar a normalidade e homocedasticidade, respectivamente.

Para analisar o efeito de cada azeite entre as medidas pré e pós, os dados que seguiram uma distribuição normal e o princípio da homocedasticidade das variâncias foram testados por uma ANOVA de dois fatores. A significância estatística será estabelecida pela aplicação de um teste t de Student não pareado para comparar as diferenças entre as médias. Os dados que não seguirem uma distribuição normal ou o princípio da homocedasticidade serão testados pelo teste de Scheirer-Ray-Hare, equivalente não paramétrico da ANOVA two-way. A significância estatística será estabelecida pela aplicação do teste U de Mann-Whitney para comparar as diferenças entre as médias.

Para analisar o efeito do tipo de azeite, todos os valores serão convertidos em escores delta (ou seja, valores pós-pré) e, posteriormente, serão testados pelo teste t de Student não pareado ou pelo teste U de Mann-Whitney com base na normalidade e homocedasticidade De dados.

O tamanho do efeito será calculado usando o d de Cohen para testes paramétricos e o quadrado eta (η²) para testes não paramétricos. Valores de d de Cohen de 0,2, 0,5 e 0,8 correspondem às bandas clássicas de Cohen de interpretação do tamanho do efeito como pequeno, médio e grande, respectivamente. Valores de η² de 0,02, 0,13 e 0,26 correspondem a tamanho de efeito pequeno, médio e grande, respectivamente. Os investigadores definiram o nível de significância estatística em p < 0,05.