Fibromyalgia ja oliiviöljy

Tavoite:

Tämän tutkimuksen tavoitteena on tutkia kahden eri antioksidanttipitoisuuden omaavan oliiviöljyn vaikutuksia kardiovaskulaarisiin riskitekijöihin (veren hyytymisparametrit, verihiutaleindeksit, punasolujen määrä, tulehdusmarkkerit, lipidiprofiili, typpioksidi ja kortisoli) potilailla. diagnosoitu fibromyalgia. Tutkijat määrittävät tromboosiin liittyvät parametrit (fibrinogeenitasot, protrombiiniaika, protrombiiniaktiivisuus, kefaliiniaika, verihiutaleiden määrä, verihiutaleiden jakautumisen leveys [PDW], keskimääräinen verihiutaleiden tilavuus [MPV], verihiutalekriitti, punasolujen [RBC] määrä, neutrofiilien määrä. lymfosyyttien välinen suhde [NLR] ja verihiutale-lymfosyyttisuhde [PLR]), tulehdusmerkkiaineet (interleukiini 6 [IL-6], IL-10, C-reaktiivinen proteiini [CRP], punasolujen sedimentaationopeus (ESR)) , typpioksiditasot, lipidiprofiili ja kortisolitasot.

Osallistujat:

Tämä tutkimus suoritetaan Maailman lääkäriliiton Helsingin julistuksen määräysten mukaisesti.

Tutkimusryhmä ottaa yhteyttä espanjalaiseen fibromyalgiapotilaiden yhdistykseen AFIXA (Association of Fibromyalgia of Jaén, Spain) löytääkseen potilaita osallistumaan tutkimukseen. Tutkijat kutsuvat potilaat koolle Jaénin yliopiston (Espanja) terveystieteiden tiedekunnan laboratorioon saadakseen useita kiinnostavia tietoja (ikä, BMI, muut krooniset sairaudet, raskaus, imetys ja lääkitys). Näiden tietojen perusteella tutkijat valitsevat fibromyalgiaryhmän. Toisella laboratoriokäynnillä kaikki potilaat allekirjoittavat tietoisen suostumuslomakkeen, verinäytteet otetaan ja he täyttävät useita kyselyitä (Fibromyalgia Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

Fibromyalgiaa sairastavilla naisilla on aiemmin diagnosoitu fibromyalgia ammattimaisen reumatologin toimesta ja he täyttävät American College of Rheumatologyn (ACR) fibromyalgian kriteerit. Poissulkemiskriteerinä ovat mikä tahansa muu krooninen sairaus (diabetes mellitus, verenpainetauti, nivelreuma, hepatiitti, syöpä tai iskeeminen sydänsairaus), dyslipidemia, raskaus, imetys tai asteen II liikalihavuus (BMI ≥ 35 kg/m2). Ketään osallistujista ei hoideta antikoagulanteilla, kortikosteroideilla, estrogeeneillä, kipulääkkeillä tai tulehduskipulääkkeillä, ja heidät otetaan mukaan vain, jos he ovat lopettaneet niiden käytön vähintään 2 kuukautta ennen tutkimuksemme alkamista. Kukaan ei käytä alkoholia säännöllisesti, ja kaikki ovat tupakoimattomia. Kaikki osallistujat ovat istuvia.

Tutkimuksen suunnittelu: Suoritetaan satunnaistettu, kontrolloitu, kaksoissokkoutettu ravitsemuskoe. Kokeessa nautitaan 50 ml/vrk yhtä kahdesta luomuoliiviöljystä, joilla on eri antioksidanttipitoisuus, EVOO tai ROO, 3 viikon ajan. Lyhytaikainen ravitsemuskoe, kuten nyt esillä oleva, voi tarjota tiettyjä etuja pitkän aikavälin tutkimukseen verrattuna, koska sen avulla potilaat voivat noudattaa tiukempaa ja kontrolloidumpaa ruokavaliota verrattuna muiden antioksidanttien saantiin. Tällä tavoin voidaan rajoittaa muiden antioksidanttien mahdollista häiriötä, kuten myös mahdollisia potilaiden elämäntapojen muutoksia, jotka voivat myös muuttaa tuloksia.

Osallistujat jaetaan satunnaisesti toiseen kahdesta ryhmästä: EVOO ja ROO. Ennen 3 viikon ruokavaliokokeen aloittamista osallistujat suorittavat 2 viikon pesujakson, jonka aikana he nauttivat ROO:ta (50 ml päivittäin 2 viikon ajan), koska he ovat osa väestöä, joka kuluttaa oliiviöljyä säännöllisesti. Jokaisen osallistujan biokemialliset markkerit ja kliiniset parametrit määritetään ennen 3 viikon hoitojaksoa ja sen jälkeen.

Orgaaniset oliiviöljyt hankitaan Olifarma S.L. (Granada, Espanja). Oliiviöljyt pakataan samalla tavalla, ja osallistujat sokeutuvat kuluttamansa oliiviöljyn tyypin suhteen. Osallistujat kuluttavat hoidon oliiviöljyä raakana, mutta käyttävät ROO:ta ruoanlaitossa, jotta antioksidanttien nauttiminen pysyy ennallaan. Tutkijat toimittavat ROO:ta ruoanlaittoon riittävän määrän koko perheelle. Tutkijat arvioivat osallistujien saannin 24 tunnin muistutuksella, jonka he suorittavat 3 päivän ajan (2 työpäivää ja vapaapäivä) kokeen alussa. Tutkijat käyttävät kolmen päivän aikana saatujen arvojen keskiarvoa laskeakseen osallistujien energiansaannin (kcal/vrk) ja makroravinteiden saannin (hiilihydraatit [g/vrk], lipidit [g/vrk] ja proteiinit [g/vrk) ]) ja hivenravinteet, erityisesti ne, joilla voi olla antioksidanttivaikutus, mukaan lukien C-vitamiini, A-vitamiini, kupari, sinkki ja seleeni. Tämän analyysin perusteella tutkijat antavat kaikille osallistujille ruokavaliosuosituksia, jotka keskittyvät niihin näkökohtiin, joita jokaisen tulisi parantaa. Tiedot osallistujien painosta kokeen alussa ja lopussa tallennetaan. Tutkijat pyytävät osallistujia palauttamaan kaikki hoitoon tarkoitetut oliiviöljysäiliöt (käytetyt ja käyttämättömät astiat) kokeen päätyttyä oliiviöljyn kulutuksen valvomiseksi (eli kunkin osallistujan palauttamien tyhjien ja täysien säiliöiden lukumäärä).

Verenotto ja verinäytteiden valmistus: Yön paaston jälkeen laskimoveri otetaan aikaisin aamulla kyynärpäälaskimosta useisiin putkiin antikoagulantti- ja antikoagulanttiputkilla. Antikoagulanttivapaiden putkien veren annetaan hyytyä 30 minuuttia huoneenlämmössä. Antikoagulantti- ja antikoagulanttivapaat putket sentrifugoidaan sitten nopeudella 3500 rpm 5 minuuttia 4 °C:ssa plasma- ja seeruminäytteiden saamiseksi. Veri otetaan aina samaan aikaan vuorokaudesta, jotta vältetään vuorokausivaihtelut. Tromboosiin liittyvät parametrit (fibrinogeenitasot, protrombiiniaika, protrombiiniaktiivisuus, kefaliiniaika, verihiutaleiden määrä, verihiutaleiden jakautumisen leveys [PDW], keskimääräinen verihiutaleiden tilavuus [MPV], verihiutalekriitti, punasolujen [RBC] määrä, neutrofiilien ja lymfosyyttien välinen suhde [NLR] ja verihiutale-lymfosyyttisuhde [PLR]) ja erytrosyyttien sedimentaationopeus (ESR) määritettiin plasmanäytteistä. Seeruminäytteistä mitattiin tulehdusmarkkerit (interleukiini 6 [IL-6], IL-10, C-reaktiivinen proteiini [CRP]), typpioksiditasot, lipidiprofiili ja kortisolitasot.

Osallistujien kliiniset ominaisuudet: Tutkijat saavat demografisia ja kliinisiä tietoja osallistujien haastatteluista ja kyselylomakkeista. Sama asiantuntija suorittaa kaikki mittaukset ja testit koko tutkimuksen ajan. Kyselylomakkeet täytetään heti veren oton jälkeen. Tutkijat arvioivat fibromyalgiapotilaiden päivittäisen elämän toiminnallista kapasiteettia käyttämällä Fibromyalgia Impact Questionnairen (FIQ) espanjankielistä versiota. FIQ-pistemäärä, joka on tutkijoiden useimmin käyttämä väline fibromyalgian vakavuuden arvioinnissa, vaihtelee välillä 0-100. Itse ilmoittama tuki- ja liikuntaelinkipu arvioidaan fibromyalgiapotilailla Visual Analogue Scale -asteikolla (VAS; 10 cm). Molempien näiden instrumenttien korkeammat pisteet heijastavat huonompaa oireyhtymää. Tutkijat arvioivat potilaiden ja kontrollien fyysisen (Physical Component Summary, PCS-12) ja henkisen (Mental Component Summary, MCS-12) terveydentilan käyttämällä espanjankielistä versiota 12-item Short-Form Health Surveysta (SF-12). ). Pisteet vaihtelevat 0–100, ja alhaisemmat arvot heijastavat huonompaa terveydentilaa.

Biokemiallisten parametrien määritys

Typpioksidin (NO) mittaus: NO:n tuotanto kvantifioitiin epäsuorasti mittaamalla nitraatti/nitriitti ja S-nitroosiyhdisteet (NOx) otsonikemiluminesenssiin perustuvalla menetelmällä. Sulatetut seerumierät poistettiin proteiinista 0,8 N NaOH- ja 16-prosenttisilla ZnS04-liuoksilla. NOx:n kokonaismäärä määritetään aiemmin kuvatulla tavalla (Rus et al., 2011) käyttämällä Sievers Instrumentsin, malli NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO, USA)) puhdistusjärjestelmää.

Tulehdusmarkkerien määritys: IL-6-taso määritetään kemiluminesenssi-immunomäärityksellä käyttäen Access Immunoassay Systems -järjestelmää (Beckman Coulter). IL-10:n tasot mitataan kemiluminesoivalla immunoentsymaattisella määrityksellä käyttäen MLX™-luminometriä (Dynex Technologies, Chantilly, VA). CRP mitataan käyttämällä AU 5800 -analysaattoria (Beckman Coulter).

Kortisolin mittaus: Kortisolitaso määritetään seeruminäytteistä fluoresenssipolarisaatioimmunomäärityksellä käyttäen AxSYM-analysaattoria (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA).

Lipidiprofiilin määritys: Seerumin lipidiprofiili (kokonaiskolesteroli, korkean tiheyden lipoproteiini [HDL]-kolesteroli, triglyseridit, apolipoproteiini A1 ja apolipoproteiini B) mitataan spektrofotometrisellä menetelmällä käyttäen OLYMPUS AU 5400 -analysaattoria (Beckman Coulter). Matalatiheyksisten lipoproteiinien (LDL)-kolesterolitasot arvioidaan epäsuorasti Friedewaldin yhtälön avulla. Homokysteiinitaso määritetään fluoresenssipolarisaatioimmunomäärityksellä käyttäen AxSYM-analysaattoria (Abbott Laboratories). Tutkijat määrittävät lipidiperoksidaatiota mittaamalla tiobarbituurihapporeaktiivisia aineita (TBARS), jotka ovat hyvä indikaattori lipidien peroksidaatiosta, joka on oksidatiivisen stressin päämerkki. TBARS määritetään spektrofotometrisesti plasmanäytteistä valmistajan suositusten mukaisesti (TBARS Assay Kit, OXItek, Catalog. 0801192).

Tromboosiin liittyvien parametrien määrittäminen: Veren hyytymisparametrit (fibrinogeenitasot, protrombiiniaika, protrombiiniaktiivisuus ja kefaliiniaika) määritetään plasmanäytteistä käyttämällä BCS XP -analysaattoria (Siemens Healthineers, Erlangen, Saksa). Tutkijat mittaavat verihiutaleiden toiminnan määrääviä tekijöitä (verihiutalemäärä, verihiutaleiden jakautumisleveys [PDW] ja keskimääräinen verihiutaleiden tilavuus [MPV]) sekä punasolujen (RBC), neutrofiilien ja lymfosyyttien määrä plasmanäytteistä virtaussytometrialla käyttämällä ADVIA 2120 -laitetta. analysaattori (Siemens Healthineers, Erlangen, Saksa).

Otoskoon arviointi: Otoskoko on arvioitu Ene 3.0 -ohjelmistolla (GlaxoSmithKline). Näytteen koko on arvioitu malondialdehydipitoisuuden perusteella (Gassió et al., 2008). Yksipuolisella hypoteesilla, oletetaan tyypin I virheen todennäköisyydeksi 5 %, β-riskiksi 0,10 ja vaikutuksen keskihajonnan ollessa 1,4, 10 potilasta katsotaan tarpeelliseksi tutkimuksen haaraa kohti, eli yhteensä 20 potilaita. Jos oletetaan, että potilastappiot ovat 10 %, tarvitaan vähimmäisotoskoko, joka on 24 potilasta, 12 kutakin tutkimuksen osa-aluetta kohti.

Tilastollinen analyysi: Tietojen tilastollinen analyysi suoritetaan käyttämällä tilastopakettia IBM SPSS Statistics 24 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). Kolmogorov-Smirnov-testi ja Levenne-testi suoritetaan vastaavasti normaaliuden ja homoskedastisuuden testaamiseksi.

Kunkin oliiviöljyn vaikutuksen analysoimiseksi esi- ja jälkimittausten välillä normaalijakaumaa ja varianssien homoskedastisuuden periaatetta seuranneet tiedot testattiin kaksisuuntaisella ANOVAlla. Tilastollinen merkitsevyys määritetään käyttämällä paritonta Studentin t-testiä vertaamaan keskiarvojen välisiä eroja. Tiedot, jotka eivät noudattaneet normaalijakaumaa tai homoskedastisuuden periaatetta, testataan käyttämällä Scheirer-Ray-Hare -testiä, ei-parametrista ekvivalenttia kaksisuuntaiselle ANOVA:lle. Tilastollinen merkitsevyys määritetään käyttämällä Mann-Whitneyn U-testiä vertaamaan keskiarvojen välisiä eroja.

Oliiviöljyn tyypin vaikutuksen analysoimiseksi kaikki arvot muunnetaan delta-pisteiksi (eli post-pre-arvoiksi) ja sen jälkeen testataan parittomalla Studentin t-testillä tai Mann-Whitneyn U-testillä, joka perustuu normaliteettiin ja homoskedastisuuteen. tiedoista.

Vaikutuskoko lasketaan käyttämällä Cohenin d:tä parametrisissä testeissä ja eta-neliötä (η²) ei-parametrisissa testeissä. Cohenin d:n arvot 0,2, 0,5 ja 0,8 vastaavat klassisia Cohenin tulkintoja tehostekoon pieneksi, keskikokoiseksi ja suureksi. η²:n arvot 0,02, 0,13 ja 0,26 vastaavat pientä, keskikokoista ja suurta efektikokoa. Tutkijat asettivat tilastollisen merkitsevyyden tasolle p < 0,05.