Фибромиалгия и оливковое масло

Цель:

Целью настоящего исследования является изучение влияния двух оливковых масел с разным содержанием антиоксидантов на факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний (показатели свертывания крови, индексы тромбоцитов, количество эритроцитов, маркеры воспаления, профиль липидов, оксид азота и кортизол) у пациентов. диагностирована фибромиалгия. Исследователи определят параметры, связанные с тромбозом (уровни фибриногена, протромбиновое время, протромбиновая активность, кефалиновое время, количество тромбоцитов, ширина распределения тромбоцитов [PDW], средний объем тромбоцитов [MPV], тромбоцитрит, количество эритроцитов [RBC], нейтрофилы. отношение тромбоцитов к лимфоцитам [NLR] и отношение тромбоцитов к лимфоцитам [PLR]), маркеры воспаления (интерлейкин 6 [IL-6], IL-10, С-реактивный белок [CRP], скорость оседания эритроцитов (СОЭ)) , уровень оксида азота, липидный профиль и уровень кортизола.

Участники:

Это исследование будет проводиться в соответствии с положениями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации.

Исследовательская группа свяжется с испанской ассоциацией пациентов с фибромиалгией AFIXA (Ассоциация фибромиалгии Хаэна, Испания), чтобы найти пациентов для участия в исследовании. Исследователи созовут пациентов в лабораторию факультета медицинских наук Университета Хаэна (Испания) для получения нескольких представляющих интерес данных (возраст, ИМТ, другие хронические заболевания, беременность, период лактации и прием лекарств). На основании этих данных исследователи выберут группу фибромиалгии. При повторном посещении лаборатории все пациенты подписывают форму информированного согласия, у них берут образцы крови и заполняют несколько вопросников (опросник воздействия фибромиалгии, визуальная аналоговая шкала, краткая форма 12 обследования состояния здоровья).

У женщин с фибромиалгией профессиональный ревматолог предварительно диагностирует фибромиалгию, и они соответствуют критериям фибромиалгии Американского колледжа ревматологов (ACR). Критериями исключения будут наличие любого другого хронического заболевания (сахарный диабет, артериальная гипертензия, ревматоидный артрит, гепатит, рак или ишемическая болезнь сердца), дислипидемия, беременность, лактация или ожирение II степени (ИМТ ≥ 35 кг/м2). Ни один из участников не будет получать антикоагулянты, кортикостероиды, эстрогены, анальгетики или противовоспалительные препараты и будет включен только в том случае, если они прекратили их использование по крайней мере за 2 месяца до начала нашего исследования. Никто не будет употреблять алкоголь регулярно, и все будут некурящими. Все участники будут вести сидячий образ жизни.

Дизайн исследования: Будет проведено рандомизированное контролируемое двойное слепое исследование питания. Испытание будет состоять из потребления 50 мл/день одного из двух органических оливковых масел с разным содержанием антиоксидантов, EVOO или ROO, в течение 3 недель. Краткосрочное исследование питания, такое как настоящее, может иметь определенные преимущества по сравнению с долгосрочным исследованием, поскольку оно позволяет пациентам придерживаться более строгой и контролируемой диеты по отношению к приему других антиоксидантов. Таким образом можно ограничить возможное влияние других антиоксидантов, а также влияние возможных изменений в образе жизни пациентов, что также может повлиять на результаты.

Участники будут случайным образом распределены в одну из двух групп: EVOO и ROO. Перед началом 3-недельного диетического испытания участники проведут 2-недельный период вымывания, в течение которого они потребляли ROO (50 мл ежедневно в течение 2 недель), поскольку они являются частью населения, регулярно потребляющего оливковое масло. Биохимические маркеры и клинические параметры у каждого участника будут определяться до и после 3-недельного периода лечения.

Органические оливковые масла будут получены от Olifarma S.L. (Гранада, Испания). Оливковое масло будет упаковано аналогичным образом, и участники не будут знать, какое оливковое масло они будут потреблять. Участники будут потреблять сырое оливковое масло для лечения, но будут использовать ROO для приготовления пищи, чтобы поддерживать потребление антиоксидантов неизменными. Сыщики снабдят РОО для приготовления пищи в количестве, достаточном для всей семьи. Исследователи будут оценивать потребление участников с помощью 24-часового отзыва, который они будут выполнять в течение 3 дней (2 рабочих дня и один выходной) в начале испытания. Исследователи будут использовать средние значения, полученные за 3 дня, для расчета потребления энергии участниками (ккал/день) и потребления макронутриентов (углеводов [г/день], липидов [г/день] и белка [г/день]. ]) и микроэлементы, особенно те, которые могут оказывать антиоксидантное действие, включая витамин С, витамин А, медь, цинк и селен. На основе этого анализа исследователи предоставят всем участникам диетические рекомендации, сосредоточив внимание на аспектах, которые каждый должен улучшить. Данные о весе участников в начале и конце испытания будут записываться. Исследователи потребуют, чтобы участники вернули все контейнеры с лечебным оливковым маслом (израсходованные и неиспользованные контейнеры) в конце испытания для контроля потребления оливкового масла (т. е. количество пустых и полных контейнеров, которые вернет каждый участник).

Сбор крови и подготовка образцов крови: после ночного голодания ранним утром будет взята венозная кровь из локтевой вены в несколько пробирок с антикоагулянтом и без антикоагулянта. Крови из пробирок без антикоагулянта дают свернуться в течение 30 минут при комнатной температуре. Затем пробирки с антикоагулянтом и без антикоагулянта центрифугируют при 3500 об/мин в течение 5 минут при 4°C для получения образцов плазмы и сыворотки соответственно. Кровь всегда будет браться в одно и то же время суток, чтобы избежать циркадных колебаний. Параметры, связанные с тромбозом (уровни фибриногена, протромбиновое время, протромбиновая активность, кефалиновое время, количество тромбоцитов, ширина распределения тромбоцитов [PDW], средний объем тромбоцитов [MPV], тромбоцитрит, количество эритроцитов [RBC], соотношение нейтрофилов и лимфоцитов В образцах плазмы определяли [NLR] и соотношение тромбоцитов к лимфоцитам [PLR]), а также скорость оседания эритроцитов (СОЭ). В образцах сыворотки измеряли маркеры воспаления (интерлейкин 6 [ИЛ-6], ИЛ-10, С-реактивный белок [СРБ]), уровни оксида азота, липидный профиль и уровни кортизола.

Клинические характеристики участников: Исследователи получат демографические и клинические данные из интервью участников и анкет. Все измерения и тесты на протяжении всего исследования будет проводить один и тот же специалист. Анкеты будут заполнены сразу после забора крови. Исследователи будут оценивать функциональные возможности в повседневной жизни у пациентов с фибромиалгией, используя испанскую версию Опросника воздействия фибромиалгии (FIQ). Шкала FIQ, которая чаще всего используется исследователями для оценки тяжести фибромиалгии, колеблется от 0 до 100. Скелетно-мышечная боль, о которой сообщают пациенты, будет оцениваться у пациентов с фибромиалгией по визуальной аналоговой шкале (ВАШ; 10 см). Для обоих этих инструментов более высокие баллы отражают худшую симптоматику. Исследователи будут оценивать физическое (Резюме физического компонента, PCS-12) и психическое (Резюме психического компонента, MCS-12) состояние здоровья пациентов и контрольной группы, используя испанскую версию Краткого опроса здоровья из 12 пунктов (SF-12). ). Баллы варьируются от 0 до 100, при этом более низкие значения отражают худшее состояние здоровья.

Определение биохимических показателей

Оксид азота (NO) Измерение: производство NO было косвенно количественно определено путем измерения соединений нитрата/нитрита и S-нитрозы (NOx) с использованием метода, основанного на хемилюминесценции озона. Аликвоты размороженной сыворотки депротеинизировали 0,8 н. NaOH и 16%-ным раствором ZnSO4. Общее количество NOx будет определяться, как описано ранее (Rus et al., 2011), с использованием системы продувки Sievers Instruments, модель NOA 280i (GE Analytical Instruments, Колорадо (Колорадо), США).

Определение маркеров воспаления: Уровень IL-6 будет определяться с помощью хемилюминесцентного иммуноанализа с использованием Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). Уровни IL-10 будут измеряться с помощью хемилюминесцентного иммуноферментного анализа с использованием люминометра MLX™ (Dynex Technologies, Chantilly, VA). СРБ будет измеряться с помощью анализатора AU 5800 (Beckman Coulter).

Измерение кортизола: Уровень кортизола будет определяться в образцах сыворотки с помощью иммуноанализа флуоресценции с поляризацией с использованием анализатора AxSYM (Abbott Laboratories, Иллинойс (Иллинойс), США).

Определение профиля липидов. Липидный профиль сыворотки (общий холестерин, холестерин липопротеинов высокой плотности [ЛПВП], триглицериды, аполипопротеин А1 и аполипопротеин В) будет измеряться спектрофотометрическим методом с использованием анализатора OLYMPUS AU 5400 (Beckman Coulter). Уровни холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) будут оцениваться косвенно с помощью уравнения Фридевальда. Уровень гомоцистеина будет определяться иммуноанализом с поляризацией флуоресценции с использованием анализатора AxSYM (Abbott Laboratories). Исследователи будут определять перекисное окисление липидов путем измерения веществ, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (TBARS), которые являются хорошим индикатором перекисного окисления липидов, основным маркером окислительного стресса. TBARS будут определять спектрофотометрически в образцах плазмы в соответствии с рекомендациями производителя (набор для анализа TBARS, OXItek, каталог. 0801192).

Определение параметров, связанных с тромбозом: параметры свертывания крови (уровни фибриногена, протромбиновое время, протромбиновая активность и кефалиновое время) будут определяться в образцах плазмы с использованием анализатора BCS XP (Siemens Healthineers, Эрланген, Германия). Исследователи будут измерять детерминанты функции тромбоцитов (количество тромбоцитов, ширина распределения тромбоцитов [PDW] и средний объем тромбоцитов [MPV]), а также количество эритроцитов (RBC), нейтрофилов и лимфоцитов в образцах плазмы с помощью проточной цитометрии с использованием ADVIA 2120. анализатор (Siemens Healthineers, Эрланген, Германия).

Оценка размера выборки. Размер выборки оценивали с использованием программного обеспечения Ene 3.0 (GlaxoSmithKline). Размер выборки оценивался на основе уровней малонового диальдегида (Gassió et al., 2008). При односторонней гипотезе, предполагающей вероятность ошибки I рода 5 %, риск β 0,10, при стандартном отклонении эффекта 1,4, считают необходимым 10 пациентов на ветвь исследования, то есть всего 20 пациенты. Если предполагается 10% потерь пациентов, потребуется минимальный размер выборки 24 пациента, по 12 на каждую ветвь исследования.

Статистический анализ: Статистический анализ данных будет выполняться с использованием статистического пакета IBM SPSS Statistics 24 для Windows (SPSS Inc, Чикаго, Иллинойс). Тест Колмогорова-Смирнова и тест Левена будут выполняться для проверки нормальности и гомоскедастичности соответственно.

Чтобы проанализировать влияние каждого оливкового масла между предварительными и последующими измерениями, данные, которые соответствовали нормальному распределению и принципу гомоскедастичности дисперсий, были проверены с помощью двустороннего дисперсионного анализа. Статистическая значимость будет установлена ​​путем применения непарного критерия Стьюдента для сравнения различий между средними значениями. Данные, которые не соответствуют нормальному распределению или принципу гомоскедастичности, будут проверены с использованием критерия Шайрера-Рея-Хара, непараметрического эквивалента двухфакторного дисперсионного анализа. Статистическая значимость будет установлена ​​путем применения U-критерия Манна-Уитни для сравнения различий между средними значениями.

Чтобы проанализировать влияние типа оливкового масла, все значения будут преобразованы в дельта-баллы (т. е. значения после предварительной обработки), а затем будут проверены с помощью непарного t-критерия Стьюдента или U-критерия Манна-Уитни на основе нормальности и гомоскедастичности. данных.

Величина эффекта будет рассчитываться с использованием коэффициента Коэна для параметрических тестов и эта-квадрата (η²) для непараметрических тестов. Значения Коэна d 0,2, 0,5 и 0,8 соответствуют классическим полосам Коэна для интерпретации размера эффекта как малого, среднего и большого соответственно. Значения η² 0,02, 0,13 и 0,26 соответствуют малому, среднему и большому размеру эффекта соответственно. Исследователи установили уровень статистической значимости на уровне p < 0,05.