Fibromyalgie en Olijfolie

Doel:

Het doel van de huidige studie is om de effecten te onderzoeken van twee olijfolie met een verschillend gehalte aan antioxidanten op cardiovasculaire risicofactoren (bloedstollingsparameters, bloedplaatjesindices, aantal rode bloedcellen, ontstekingsmarkers, lipidenprofiel, stikstofmonoxide en cortisol) bij patiënten gediagnosticeerd met fibromyalgie. De onderzoekers bepalen trombosegerelateerde parameters (fibrinogeenspiegels, protrombinetijd, protrombineactiviteit, cefalinetijd, aantal bloedplaatjes, bloedplaatjesdistributiebreedte [PDW], gemiddeld bloedplaatjesvolume [MPV], bloedplaatjescrit, aantal rode bloedcellen [RBC], neutrofielen- to-lymphocyte ratio [NLR] en plaatjes-to-lymfocyten ratio [PLR]), inflammatoire markers (interleukine 6 [IL-6], IL-10, C-reactief proteïne [CRP], erytrocytsedimentatiesnelheid (ESR)) , stikstofoxideniveaus, lipidenprofiel en cortisolniveaus.

Deelnemers:

Deze studie zal worden uitgevoerd in overeenstemming met de bepalingen van de Verklaring van Helsinki van de World Medical Association.

De onderzoeksgroep zal contact opnemen met een Spaanse vereniging van patiënten met fibromyalgie, AFIXA (Vereniging van fibromyalgie van Jaén, Spanje) om patiënten te vinden die aan het onderzoek willen deelnemen. De onderzoekers zullen patiënten bijeenroepen in het laboratorium van de Faculteit der Gezondheidswetenschappen van de Universiteit van Jaén (Spanje) om verschillende relevante gegevens te verkrijgen (leeftijd, BMI, andere chronische ziekten, zwangerschap, borstvoeding en medicatie). Op basis van deze gegevens zullen de onderzoekers de fibromyalgiegroep selecteren. Bij een tweede bezoek aan het laboratorium ondertekenen alle patiënten een toestemmingsformulier, worden er bloedmonsters genomen en vullen ze verschillende vragenlijsten in (Fibromyalgia Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

De vrouwen met fibromyalgie zullen eerder gediagnosticeerd zijn met fibromyalgie door een professionele reumatoloog en voldoen aan de criteria van het American College of Rheumatology (ACR) voor fibromyalgie. Uitsluitingscriteria zijn de aanwezigheid van een andere chronische ziekte (diabetes mellitus, hypertensie, reumatoïde artritis, hepatitis, kanker of ischemische hartziekte), dyslipidemie, zwangerschap, borstvoeding of zwaarlijvigheid graad II (BMI ≥ 35 kg/m2). Geen van de deelnemers wordt behandeld met anticoagulantia, corticosteroïden, oestrogenen, analgetica of ontstekingsremmende middelen, en wordt alleen opgenomen als ze ten minste 2 maanden voor aanvang van onze studie zijn gestopt met het gebruik ervan. Niemand zal regelmatig alcohol consumeren en ze zullen allemaal niet-rokers zijn. Alle deelnemers zullen sedentair zijn.

Studieopzet: Er zal een gerandomiseerde, gecontroleerde, dubbelblinde voedingsproef worden uitgevoerd. De proef bestaat uit de consumptie van 50 ml/dag van een van de twee biologische olijfolie met verschillend gehalte aan antioxidanten, EVOO of ROO, gedurende 3 weken. Een kortdurende voedingsproef, zoals deze, kan bepaalde voordelen bieden ten opzichte van een langetermijnproef, omdat patiënten hierdoor een strenger en meer gecontroleerd dieet kunnen volgen in verhouding tot de inname van andere antioxidanten. Op deze manier kan de mogelijke interferentie van andere antioxidanten worden beperkt, evenals de interferentie van mogelijke veranderingen in de levensstijl van de patiënten, die ook de resultaten zouden kunnen veranderen.

De deelnemers worden willekeurig toegewezen aan een van de twee groepen: EVOO en ROO. Voordat de 3 weken durende dieetproef begint, zullen de deelnemers een wash-outperiode van 2 weken uitvoeren waarin ze ROO (50 ml per dag gedurende 2 weken) consumeerden omdat ze deel uitmaken van een bevolking die regelmatig olijfolie consumeert. Biochemische markers en klinische parameters bij elke deelnemer zullen worden bepaald voor en na de behandelingsperiode van 3 weken.

Biologische olijfolie wordt verkregen van Olifarma S.L. (Granada, Spanje). De olijfolie wordt op dezelfde manier verpakt en de deelnemers zullen verblind zijn over het type olijfolie dat ze zullen consumeren. Deelnemers consumeren de behandelde olijfolie rauw, maar gebruiken ROO om te koken om hun inname van antioxidanten ongewijzigd te houden. De onderzoekers zullen ROO leveren om te koken in voldoende hoeveelheid voor het hele gezin. De onderzoekers schatten de inname van de deelnemers in door middel van een 24-uurs recall die ze aan het begin van de proef gedurende 3 dagen (2 werkdagen en een vrije dag) zullen volbrengen. De onderzoekers zullen het gemiddelde van de verkregen waarden over de 3 dagen gebruiken om de energie-inname (kcal/dag) en de inname van macronutriënten (koolhydraten [g/dag], lipiden [g/dag] en eiwitten [g/dag) van de deelnemers te berekenen ]) en micronutriënten, vooral degene die een antioxiderende werking kunnen hebben, waaronder vitamine C, vitamine A, koper, zink en selenium. Op basis van deze analyse zullen de onderzoekers alle deelnemers voedingsaanbevelingen geven, gericht op de aspecten die elk zouden moeten verbeteren. Gegevens van het gewicht van de deelnemers aan het begin en einde van de proef worden geregistreerd. De onderzoekers zullen de deelnemers vragen om alle containers met behandelde olijfolie (de geconsumeerde en niet-geconsumeerde containers) aan het einde van de proef terug te sturen voor controle van de olijfolieconsumptie (d.w.z. een telling van de lege en volle containers die elke deelnemer zal retourneren).

Bloedafname en voorbereiding van bloedmonsters: Na een nacht vasten wordt in de vroege ochtend veneus bloed afgenomen uit de antecubitale ader in verschillende buisjes met antistollingsmiddel en antistollingsmiddelvrije buisjes. Het bloed van de antistollingsmiddelvrije buizen mag 30 minuten bij kamertemperatuur stollen. De antistollingsmiddel- en antistollingsmiddelvrije buisjes worden vervolgens gedurende 5 minuten bij 4°C bij 3500 rpm gecentrifugeerd om respectievelijk plasma- en serummonsters te verkrijgen. Het bloed zal altijd op hetzelfde tijdstip van de dag worden afgenomen om circadiane variaties te voorkomen. Trombosegerelateerde parameters (fibrinogeenspiegels, protrombinetijd, protrombineactiviteit, cefalinetijd, aantal bloedplaatjes, bloedplaatjesverdelingsbreedte [PDW], gemiddeld bloedplaatjesvolume [MPV], bloedplaatjescrit, aantal rode bloedcellen [RBC], verhouding neutrofielen tot lymfocyten [NLR] en bloedplaatjes-tot-lymfocytenratio [PLR]) en erytrocytbezinkingssnelheid (ESR) werden bepaald in plasmamonsters. Inflammatoire markers (interleukine 6 [IL-6], IL-10, C-reactief proteïne [CRP]), stikstofoxideniveaus, lipidenprofiel en cortisolspiegels werden gemeten in serummonsters.

Klinische kenmerken van deelnemers: De onderzoekers zullen demografische en klinische gegevens verkrijgen uit interviews met deelnemers en vragenlijsten. Gedurende het hele onderzoek voert dezelfde specialist alle metingen en testen uit. De vragenlijsten worden direct na de bloedafname ingevuld. De onderzoekers zullen de functionele capaciteit in het dagelijks leven van patiënten met fibromyalgie evalueren met behulp van de Spaanse versie van de Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). De FIQ-score, het instrument dat door onderzoekers het meest wordt gebruikt om de ernst van fibromyalgie in te schatten, varieert van 0 tot 100. Zelfgerapporteerde musculoskeletale pijn zal worden beoordeeld bij fibromyalgiepatiënten door middel van een Visual Analogue Scale (VAS; 10 cm). Voor beide instrumenten weerspiegelen hogere scores slechtere symptomatologie. De onderzoekers zullen de fysieke (Physical Component Summary, PCS-12) en mentale (Mental Component Summary, MCS-12) gezondheidsstatus van patiënten en controles beoordelen met behulp van de Spaanse versie van de 12-Item Short-Form Health Survey (SF-12 ). Scores variëren van 0 tot 100, waarbij lagere waarden een slechtere gezondheidstoestand weerspiegelen.

Bepaling van biochemische parameters

Meting van stikstofmonoxide (NO): NO-productie werd indirect gekwantificeerd door nitraat/nitriet- en S-nitroseverbindingen (NOx) te meten met behulp van een op ozon gebaseerde chemiluminescentiemethode. De ontdooide serummonsters werden onteiwit met NaOH 0,8 N en ZnS04 16% oplossingen. De totale hoeveelheid NOx zal worden bepaald zoals eerder beschreven (Rus et al., 2011) met behulp van het zuiveringssysteem van Sievers Instruments, model NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), VS).

Bepaling van ontstekingsmarkers: Het IL-6-gehalte zal worden bepaald door middel van een chemiluminescente immunoassay met behulp van de Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). Niveaus van IL-10 zullen worden gemeten door middel van een chemiluminescente immuno-enzymatische assay met behulp van een MLXTM luminometer (Dynex Technologies, Chantilly, VA). CRP zal worden gemeten met behulp van een AU 5800 analysator (Beckman Coulter).

Cortisolmeting: Cortisolniveau zal worden bepaald in serummonsters door middel van een fluorescentiepolarisatie-immunoassay met behulp van een AxSYM-analysator (Abbott Laboratories, Illinois (IL), VS).

Bepaling van het lipidenprofiel: het serumlipidenprofiel (totaal cholesterol, high-density lipoproteïne [HDL]-cholesterol, triglyceriden, apolipoproteïne A1 en apolipoproteïne B) zal worden gemeten met een spectrofotometrische procedure met behulp van een OLYMPUS AU 5400-analysator (Beckman Coulter). Low-density lipoprotein (LDL)-cholesterolgehaltes zullen indirect worden geschat met de Friedewald-vergelijking. Het niveau van homocysteïne zal worden bepaald door een fluorescentiepolarisatie-immunoassay met behulp van een AxSYM-analysator (Abbott Laboratories). De onderzoekers zullen lipideperoxidatie bepalen door thiobarbituurzuurreactieve stoffen (TBARS) te meten, die een goede indicator zijn van lipideperoxidatie, een belangrijke marker van oxidatieve stress. TBARS zal spectrofotometrisch worden bepaald in plasmamonsters volgens de aanbevelingen van de fabrikant (TBARS Assay Kit, OXItek, Catalog. 0801192).

Bepaling van trombosegerelateerde parameters: Bloedstollingsparameters (fibrinogeenspiegels, protrombinetijd, protrombineactiviteit en cefalinetijd) zullen worden bepaald in plasmamonsters met behulp van de BCS XP-analysator (Siemens Healthineers, Erlangen, Duitsland). De onderzoekers zullen determinanten van de bloedplaatjesfunctie (bloedplaatjestelling, bloedplaatjesdistributiebreedte [PDW] en gemiddeld bloedplaatjesvolume [MPV]) en het aantal rode bloedcellen (RBC), neutrofielen en lymfocyten in plasmamonsters meten door middel van flowcytometrie met behulp van de ADVIA 2120. analysator (Siemens Healthineers, Erlangen, Duitsland).

Beoordeling van de steekproefomvang: De steekproefomvang is geschat met behulp van de Ene 3.0-software (GlaxoSmithKline). De steekproefomvang is geschat op basis van de niveaus van malondialdehyde (Gassió et al., 2008). Bij een unilaterale hypothese, uitgaande van een kans op een type I-fout van 5%, een β-risico van 0,10, met een standaarddeviatie van het effect van 1,4, worden 10 patiënten per tak van de studie noodzakelijk geacht, dat wil zeggen in totaal 20 patiënten. Als wordt uitgegaan van 10% van de patiëntenverliezen, is een minimale steekproefomvang van 24 patiënten nodig, 12 voor elke tak van het onderzoek.

Statistische analyse: De statistische analyse van de gegevens wordt uitgevoerd met behulp van het statistische pakket IBM SPSS Statistics 24 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). De Kolmogorov-Smirnov-test en de Levenne-test zullen worden uitgevoerd om respectievelijk normaliteit en homoscedasticiteit te testen.

Om het effect van elke olijfolie tussen voor- en nametingen te analyseren, werden de gegevens die een normale verdeling volgden en het principe van homoscedasticiteit van varianties getest door een tweeweg-ANOVA. De statistische significantie wordt vastgesteld door een ongepaarde Student's t-toets toe te passen om verschillen tussen gemiddelden te vergelijken. Gegevens die geen normale verdeling of het principe van homoscedasticiteit volgden, zullen worden getest met behulp van de Scheirer-Ray-Hare-test, het niet-parametrische equivalent voor tweeweg-ANOVA. De statistische significantie zal worden vastgesteld door de Mann-Whitney U-test toe te passen om verschillen tussen gemiddelden te vergelijken.

Om het effect van het type olijfolie te analyseren, worden alle waarden omgezet in deltascores (d.w.z. post-pre-waarden) en daarna getest met de ongepaarde Student's t-test of de Mann-Whitney U-test op basis van normaliteit en homoscedasticiteit Van de gegevens.

De effectgrootte wordt berekend met behulp van de Cohen's d voor parametrische tests en de eta-kwadraat (η²) voor niet-parametrische tests. Waarden van Cohen's d van 0,2, 0,5 en 0,8 komen overeen met de klassieke Cohen-interpretatiebanden van de effectgrootte als respectievelijk klein, middelgroot en groot. Waarden van η² van 0,02, 0,13 en 0,26 komen overeen met respectievelijk een kleine, middelgrote en grote effectgrootte. De onderzoekers stelden het niveau van statistische significantie vast op p < 0,05.