Fibromyalgi och olivolja

Syfte:

Målet med denna studie är att undersöka effekterna av två olivoljor med olika antioxidantinnehåll på kardiovaskulära riskfaktorer (blodkoagulationsparametrar, blodplättsindex, antal röda blodkroppar, inflammatoriska markörer, lipidprofil, kväveoxid och kortisol) hos patienter diagnostiserats med fibromyalgi. Utredarna kommer att fastställa trombosrelaterade parametrar (fibrinogennivåer, protrombintid, protrombinaktivitet, cefalintid, trombocytantal, trombocytfördelningsbredd [PDW], genomsnittlig trombocytvolym [MPV], blodplättskrit, antal röda blodkroppar [RBC], neutrofil- till-lymfocyt-kvot [NLR] och blodplätt-till-lymfocyt-kvot [PLR]), inflammatoriska markörer (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivt protein [CRP], erytrocytsedimentationshastighet (ESR)) , kväveoxidnivåer, lipidprofil och kortisolnivåer.

Deltagare:

Denna studie kommer att genomföras i enlighet med bestämmelserna i Helsingforsdeklarationen från World Medical Association.

Forskargruppen kommer att kontakta en spansk sammanslutning av patienter med fibromyalgi, AFIXA (Association of Fibromyalgia of Jaén, Spanien) för att hitta patienter att delta i studien. Forskarna kommer att sammankalla patienter i laboratoriet vid fakulteten för hälsovetenskap vid universitetet i Jaén (Spanien) för att få flera intressanta data (ålder, BMI, andra kroniska sjukdomar, graviditet, amning och medicinering). Baserat på dessa data kommer utredarna att välja fibromyalgigruppen. Vid ett andra besök på laboratoriet kommer alla patienter att skriva under ett informerat samtycke, blodproven kommer att tas och de kommer att fylla i flera frågeformulär (Fibromyalgia Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

Kvinnorna med fibromyalgi kommer att tidigare diagnostiseras med fibromyalgi av en professionell reumatolog och uppfyllde American College of Rheumatology (ACR) kriterier för fibromyalgi. Uteslutningskriterier kommer att vara förekomsten av någon annan kronisk sjukdom (diabetes mellitus, högt blodtryck, reumatoid artrit, hepatit, cancer eller ischemisk hjärtsjukdom), dyslipidemi, graviditet, amning eller fetma grad II (BMI ≥ 35 kg/m2). Ingen av deltagarna kommer att behandlas med antikoagulantia, kortikosteroider, östrogener, analgetika eller antiinflammatoriska läkemedel, och kommer endast att inkluderas om de hade slutat använda dem minst 2 månader innan vår studie startade. Ingen kommer att konsumera alkohol regelbundet, och alla kommer att vara icke-rökare. Alla deltagare kommer att vara stillasittande.

Studiedesign: En randomiserad, kontrollerad, dubbelblind näringsstudie kommer att genomföras. Försöket kommer att bestå av konsumtion av 50 ml/dag av en av de två ekologiska olivoljorna med olika antioxidanthalt, EVOO eller ROO, under 3 veckor. En kortsiktig näringsprövning, som den nuvarande, kan ge vissa fördelar med avseende på en långtidsprövning, eftersom den tillåter patienter att följa en striktare och mer kontrollerad kost i förhållande till intaget av andra antioxidanter. På så sätt kan den eventuella störningen av andra antioxidanter begränsas, liksom störningar från eventuella förändringar i patienternas livsstil, vilket också kan förändra resultaten.

Deltagarna kommer att slumpmässigt tilldelas en av de två grupperna: EVOO och ROO. Innan de påbörjar 3-veckors dietförsöket kommer deltagarna att genomföra en 2-veckors tvättperiod under vilken de konsumerade ROO (50 ml dagligen i 2 veckor) eftersom de är en del av en befolkning som konsumerar olivolja regelbundet. Biokemiska markörer och kliniska parametrar hos varje deltagare kommer att bestämmas före och efter den 3 veckor långa behandlingsperioden.

Ekologiska olivoljor kommer från Olifarma S.L. (Granada, Spanien). Olivoljorna kommer att förpackas på liknande sätt, och deltagarna kommer att bli blinda vad gäller vilken typ av olivolja de kommer att konsumera. Deltagarna kommer att konsumera behandlingen olivolja rå men kommer att använda ROO för matlagning för att behålla sitt intag av antioxidanter oförändrat. Utredarna kommer att tillhandahålla ROO för matlagning i tillräcklig mängd för hela familjen. Forskarna kommer att uppskatta deltagarnas intag med hjälp av en 24-timmars återkallelse som de kommer att genomföra i 3 dagar (2 arbetsdagar och en ledig dag) i början av försöket. Utredarna kommer att använda medelvärdet av värdena som erhållits under de tre dagarna för att beräkna deltagarnas energiintag (kcal/dag) och intag av makronäringsämnen (kolhydrater [g/dag], lipider [g/dag] och protein [g/dag] ]) och mikronäringsämnen, särskilt de som kan ha en antioxidanteffekt, inklusive vitamin C, vitamin A, koppar, zink och selen. Baserat på denna analys kommer utredarna att ge alla deltagare kostrekommendationer, med fokus på de aspekter som var och en bör förbättra. Data om deltagarnas vikt i början och slutet av försöket kommer att registreras. Utredarna kommer att begära att deltagarna lämnar tillbaka alla behandlade olivoljebehållare (de förbrukade och oanvända behållarna) i slutet av försöket för kontroll av olivoljekonsumtionen (dvs. ett antal tomma och fulla behållare som varje deltagare kommer att returnera).

Blodtagning och beredning av blodprover: Efter fasta över natten kommer venöst blod att tas tidigt på morgonen från antecubitalvenen till flera rör med antikoagulerande och antikoagulantfria rör. Blodet från de antikoagulantfria rören kommer att tillåtas koagulera i 30 minuter vid rumstemperatur. De antikoagulerande och antikoagulantfria rören kommer sedan att centrifugeras vid 3500 rpm i 5 minuter vid 4°C för att erhålla plasma- respektive serumprover. Blodet kommer alltid att tas vid samma tid på dagen för att undvika dygnsvariationer. Trombosrelaterade parametrar (fibrinogennivåer, protrombintid, protrombinaktivitet, cefalintid, trombocytantal, trombocytfördelningsbredd [PDW], genomsnittlig trombocytvolym [MPV], blodplättskrit, antal röda blodkroppar [RBC], neutrofil-till-lymfocytförhållande [NLR], och blodplätt-till-lymfocyt-förhållande [PLR]) och erytrocytsedimentationshastighet (ESR) bestämdes i plasmaprover. Inflammatoriska markörer (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivt protein [CRP]), kväveoxidnivåer, lipidprofil och kortisolnivåer mättes i serumprover.

Deltagarnas kliniska egenskaper: Utredarna kommer att få demografiska och kliniska data från deltagarnas intervjuer och frågeformulär. Samma specialist kommer att utföra alla mätningar och tester under hela studien. Frågeformulären kommer att fyllas i omedelbart efter att blodet tagits. Forskarna kommer att utvärdera funktionell kapacitet i dagliga aktiviteter hos patienter med fibromyalgi med hjälp av den spanska versionen av Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). FIQ-poängen, som är det instrument som oftast används av forskare för att uppskatta fibromyalgis svårighetsgrad, varierar från 0 till 100. Självrapporterad muskuloskeletal smärta kommer att bedömas hos fibromyalgipatienter med en Visual Analogue Scale (VAS; 10 cm). För båda dessa instrument återspeglar högre poäng sämre symptomatologi. Utredarna kommer att bedöma den fysiska (sammanfattning av fysiska komponenter, PCS-12) och mentala (sammanfattning av mentala komponenter, MCS-12) hos patienter och kontroller med hjälp av den spanska versionen av den 12-delade kortformiga hälsoundersökningen (SF-12). ). Poäng varierar från 0 till 100, med lägre värden som återspeglar sämre hälsotillstånd.

Bestämning av biokemiska parametrar

Mätning av kväveoxid (NO): NO-produktionen kvantifierades indirekt genom att mäta nitrat/nitrit och S-nitrosföreningar (NOx) med en ozonkemiluminescensbaserad metod. De tinade serumalikvoterna avproteiniserades med NaOH 0,8 N och ZnS04 16% lösningar. Den totala mängden NOx kommer att bestämmas som tidigare beskrivits (Rus et al., 2011) med hjälp av reningssystemet från Sievers Instruments, modell NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), USA).

Bestämning av inflammatoriska markörer: IL-6-nivån kommer att bestämmas med en kemiluminescerande immunanalys med hjälp av Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). Nivåer av IL-10 kommer att mätas med en kemiluminescerande immunoenzymatisk analys med användning av en MLX™ luminometer (Dynex Technologies, Chantilly, VA). CRP kommer att mätas med en AU 5800 analysator (Beckman Coulter).

Kortisolmätning: Kortisolnivån kommer att bestämmas i serumprover genom en fluorescenspolarisationsimmunanalys med en AxSYM-analysator (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA).

Bestämning av lipidprofil: Serumlipidprofil (totalkolesterol, högdensitetslipoprotein [HDL]-kolesterol, triglycerider, apolipoprotein A1 och apolipoprotein B) kommer att mätas med en spektrofotometrisk procedur med en OLYMPUS AU 5400 analysator (Beckman Coulter). Low-density lipoprotein (LDL)-kolesterolnivåer kommer att uppskattas indirekt med Friedewald-ekvationen. Nivån av homocystein kommer att bestämmas genom en fluorescenspolarisationsimmunanalys med en AxSYM-analysator (Abbott Laboratories). Forskarna kommer att bestämma lipidperoxidation genom att mäta tiobarbitursyrareaktiva substanser (TBARS), som är en bra indikator på lipidperoxidation, en viktig markör för oxidativ stress. TBARS kommer att bestämmas spektrofotometriskt i plasmaprover enligt tillverkarens rekommendationer (TBARS Assay Kit, OXItek, Catalog. 0801192).

Bestämning av trombosrelaterade parametrar: Blodkoagulationsparametrar (fibrinogennivåer, protrombintid, protrombinaktivitet och cefalintid) kommer att bestämmas i plasmaprover med hjälp av BCS XP-analysatorn (Siemens Healthineers, Erlangen, Tyskland). Forskarna kommer att mäta bestämningsfaktorer för trombocytfunktion (trombocytantal, trombocytfördelningsbredd [PDW] och genomsnittlig trombocytvolym [MPV]), och antal röda blodkroppar (RBC), neutrofiler och lymfocyter i plasmaprover genom flödescytometri med ADVIA 2120 analysator (Siemens Healthineers, Erlangen, Tyskland).

Provstorleksbedömning: Provstorleken har uppskattats med hjälp av programvaran Ene 3.0 (GlaxoSmithKline). Provstorleken har uppskattats baserat på halterna av malondialdehyd (Gassió et al., 2008). Med en ensidig hypotes, med antagande av en sannolikhet för typ I-fel på 5 %, en β-risk på 0,10, med en standardavvikelse av effekten på 1,4, anses 10 patienter vara nödvändiga per gren av studien, det vill säga totalt 20 patienter. Om 10 % av patientförlusterna antas, kommer en minimal provstorlek på 24 patienter, 12 för varje gren av studien att behövas.

Statistisk analys: Den statistiska analysen av data kommer att utföras med hjälp av det statistiska paketet IBM SPSS Statistics 24 för Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). Kolmogorov-Smirnov-testet och Levenne-testet kommer att utföras för att testa normalitet respektive homoskedasticitet.

För att analysera effekten av varje olivolja mellan före- och eftermått, testades data som följde en normalfördelning och principen om homoskedasticitet av varianser med en tvåvägs ANOVA. Den statistiska signifikansen kommer att fastställas genom att tillämpa ett oparat Students t-test för att jämföra skillnader mellan medelvärden. Data som inte följde en normalfördelning eller principen om homoskedasticitet kommer att testas med Scheirer-Ray-Hare-testet, den icke-parametriska motsvarigheten för tvåvägs ANOVA. Den statistiska signifikansen kommer att fastställas genom att använda Mann-Whitneys U-test för att jämföra skillnader mellan medelvärden.

För att analysera effekten av typen av olivolja kommer alla värden att omvandlas till deltapoäng (d.v.s. post-pre-värden) och testas därefter med oparat Students t-test eller Mann-Whitney U-test baserat på normalitet och homoskedasticitet av data.

Effektstorleken kommer att beräknas med hjälp av Cohens d för parametriska test och eta-kvadrat (η²) för icke-parametriska test. Värden på Cohens d på 0,2, 0,5 och 0,8 motsvarar de klassiska Cohen-banden för tolkning av effektstorleken som liten, medium respektive stor. Värden på η² på 0,02, 0,13 och 0,26 motsvarar liten, medelstor respektive stor effektstorlek. Utredarna satte nivån för statistisk signifikans till p < 0,05.