線維筋痛症とオリーブオイル

標的：

本研究の目的は、患者の心血管危険因子 (血液凝固パラメーター、血小板指数、赤血球数、炎症マーカー、脂質プロファイル、一酸化窒素およびコルチゾール) に対する抗酸化物質の含有量が異なる 2 つのオリーブ オイルの効果を調査することです。線維筋痛症と診断されました。 治験責任医師は、血栓症関連パラメータ（フィブリノゲンレベル、プロトロンビン時間、プロトロンビン活性、セファリン時間、血小板数、血小板分布幅[PDW]、平均血小板容積[MPV]、血小板クリット、赤血球[RBC]数、好中球-対リンパ球比 [NLR]、および血小板対リンパ球比 [PLR])、炎症マーカー (インターロイキン 6 [IL-6]、IL-10、C 反応性タンパク質 [CRP]、赤血球沈降速度 (ESR)) 、一酸化窒素レベル、脂質プロファイル、およびコルチゾールレベル。

参加者：

この研究は、世界医師会のヘルシンキ宣言の規定に従って実施されます。

研究グループは、スペインの線維筋痛症患者協会、AFIXA (スペイン、ハエンの線維筋痛症協会) に連絡を取り、研究に参加する患者を探します。 研究者は、ハエン大学（スペイン）の健康科学部の研究室に患者を招集し、関心のあるいくつかのデータ（年齢、BMI、その他の慢性疾患、妊娠、授乳、投薬）を取得します。 これらのデータに基づいて、研究者は線維筋痛症グループを選択します。 検査室への 2 回目の訪問では、すべての患者がインフォームド コンセント フォームに署名し、血液サンプルが採取され、いくつかのアンケート (線維筋痛影響アンケート、ビジュアル アナログ スケール、簡易フォーム 12 健康調査) に記入されます。

線維筋痛症の女性は、以前に専門のリウマチ専門医によって線維筋痛症と診断されており、線維筋痛症に関する米国リウマチ学会（ACR）の基準を満たしています。 除外基準は、他の慢性疾患（真性糖尿病、高血圧、関節リウマチ、肝炎、癌または虚血性心疾患）、脂質異常症、妊娠、授乳またはグレード II 肥満（BMI ≥ 35 kg/m2）の存在です。 抗凝固薬、コルチコステロイド、エストロゲン、鎮痛薬または抗炎症薬で治療される参加者はなく、研究開始の少なくとも2か月前に使用を中止した場合にのみ含まれます。 定期的にアルコールを摂取する人はおらず、全員が非喫煙者です。 すべての参加者は座りがちです。

研究デザイン: 無作為化、制御、二重盲検栄養試験を実施します。 この試験では、抗酸化物質の含有量が異なる 2 つのオーガニック オリーブ オイル、EVOO または ROO のいずれかを 3 週間にわたって 1 日 50 ml 摂取します。 現在のもののような短期栄養試験は、患者が他の抗酸化物質の摂取に関してより厳格でより管理された食事を順守することを可能にするため、長期試験に関して特定の利点を提供する可能性があります. このようにして、結果を変える可能性のある患者のライフスタイルの変化による干渉と同様に、他の抗酸化物質の干渉の可能性を制限することができます.

参加者は、EVOO と ROO の 2 つのグループのいずれかにランダムに割り当てられます。 3週間の食事試験を開始する前に、参加者は定期的にオリーブオイルを消費する集団の一部であるため、ROOを消費する2週間のウォッシュアウト期間を実施します（2週間、毎日50ml）. 各参加者の生化学的マーカーと臨床パラメーターは、3週間の治療期間の前後に決定されます。

オーガニック オリーブ オイルは、Olifarma S.L. から入手します。 （グラナダ、スペイン）。 オリーブオイルも同様にパッケージ化され、参加者は消費するオリーブオイルの種類について盲検化されます. 参加者は治療用オリーブオイルを生で消費しますが、酸化防止剤の摂取を維持するために料理には ROO を使用します。 研究者は、家族全員に十分な量の料理用の ROO を提供します。 研究者は、試験開始時の 3 日間 (2 営業日と 1 日休み) に完了する 24 時間のリコールによって、参加者の摂取量を推定します。 調査員は、3 日間で得られた値の平均を使用して、参加者のエネルギー摂取量 (kcals/日) と主要栄養素 (炭水化物 [g/日]、脂質 [g/日]、およびタンパク質 [g/日] の摂取量を計算します。 ]) と微量栄養素、特にビタミン C、ビタミン A、銅、亜鉛、セレンなどの抗酸化作用があるもの. この分析に基づいて、研究者はすべての参加者に食事の推奨事項を提供し、それぞれが改善すべき側面に焦点を当てます. トライアルの開始時と終了時の参加者の体重のデータが記録されます。 治験責任医師は、オリーブ オイルの消費を管理するために、試験の終了時にすべての治療用オリーブ オイルの容器 (消費済みおよび未消費の容器) を返却するよう参加者に要求します (つまり、各参加者が返却する空容器と満杯容器の数)。

採血および血液サンプルの調製: 一晩絶食した後、静脈血を早朝に肘前静脈から抗凝固剤および抗凝固剤を含まないチューブを含むいくつかのチューブに採取します。 抗凝固剤を含まないチューブの血液は、室温で 30 分間凝固させます。 次いで、抗凝固剤および抗凝固剤を含まないチューブを、4℃で5分間、3500 rpmで遠心分離して、それぞれ血漿および血清サンプルを得る。 採血は日内変動を避けるため、常に同じ時刻に行われます。 血栓症関連パラメータ（フィブリノーゲンレベル、プロトロンビン時間、プロトロンビン活性、セファリン時間、血小板数、血小板分布幅[PDW]、平均血小板容積[MPV]、血小板クリット、赤血球[RBC]数、好中球対リンパ球比[NLR]、および血小板対リンパ球比 [PLR]) および赤血球沈降速度 (ESR) は、血漿サンプルで測定されました。 炎症マーカー (インターロイキン 6 [IL-6]、IL-10、C 反応性タンパク質 [CRP])、一酸化窒素レベル、脂質プロファイル、およびコルチゾール レベルが血清サンプルで測定されました。

参加者の臨床的特徴：研究者は、参加者のインタビューとアンケートから人口統計学的および臨床データを取得します。 同じスペシャリストが、研究全体を通してすべての測定とテストを実施します。 問診票は採血後すぐに記入していただきます。 研究者は、スペイン語版の線維筋痛症影響質問票 (FIQ) を使用して、線維筋痛症患者の日常生活活動における機能的能力を評価します。 線維筋痛症の重症度を推定するために研究者が最もよく使用する FIQ スコアは、0 から 100 の範囲です。 自己申告による筋骨格痛は、線維筋痛症患者において、視覚的アナログスケール (VAS; 10 cm) によって評価されます。 これらの手段の両方について、より高いスコアはより悪い症状を反映しています。 調査員は、スペイン語版の 12-Item Short-Form Health Survey (SF-12) を使用して、患者およびコントロールの身体的 (身体的要素の要約、PCS-12) および精神的 (精神的要素の要約、MCS-12) の健康状態を評価します。 ）。 スコアの範囲は 0 ～ 100 で、値が低いほど健康状態が悪いことを示します。

生化学的パラメータの決定

一酸化窒素 (NO) 測定: NO 生成は、オゾン化学発光ベースの方法を使用して、硝酸塩/亜硝酸塩および S-ニトロース化合物 (NOx) を測定することによって間接的に定量化されました。 解凍した血清アリコートをＮａＯＨ ０．８ＮおよびＺｎＳＯ４ １６％溶液で除タンパク質した。 ＮＯｘの総量は、Ｓｉｅｖｅｒｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、モデルＮＯＡ ２８０ｉ（ＧＥ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、コロラド（ＣＯ）、米国）のパージシステムを使用して、以前に記載されたように（Ｒｕｓら、２０１１年）決定される。

炎症マーカーの決定：IL-6レベルは、Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter)を用いた化学発光イムノアッセイによって決定される。 ＩＬ－１０のレベルは、ＭＬＸ（商標）照度計（Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ，ＶＡ）を使用する化学発光免疫酵素アッセイによって測定される。 ＣＲＰは、ＡＵ ５８００分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して測定される。

コルチゾール測定：AxSYMアナライザー（Abbott Laboratories、イリノイ州（IL）、米国）を使用した蛍光偏光イムノアッセイにより、血清サンプル中のコルチゾールレベルを決定します。

脂質プロファイルの決定：血清脂質プロファイル（総コレステロール、高密度リポタンパク質[HDL]-コレステロール、トリグリセリド、アポリポタンパク質A1、およびアポリポタンパク質B）は、OLYMPUS AU 5400アナライザー（Beckman Coulter）を使用した分光測光手順によって測定されます。 低密度リポタンパク質 (LDL) - コレステロール値は、フリーデワルドの式を使用して間接的に推定されます。 ホモシステインのレベルは、ＡｘＳＹＭ分析器（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用する蛍光偏光イムノアッセイによって決定される。 研究者は、酸化ストレスの主要なマーカーである脂質過酸化の優れた指標であるチオバルビツール酸反応性物質（TBARS）を測定することにより、脂質過酸化を決定します。 ＴＢＡＲＳは、製造業者の推奨に従って、血漿サンプルにおいて分光光度法で決定される（ＴＢＡＲＳアッセイキット、ＯＸＩｔｅｋ、Ｃａｔａｌｏｇ． 0801192)。

血栓症関連パラメーターの決定: 血液凝固パラメーター (フィブリノゲン レベル、プロトロンビン時間、プロトロンビン活性、およびセファリン時間) は、BCS XP アナライザー (Siemens Healthineers、Erlangen、Germany) を使用して血漿サンプルで決定されます。 研究者らは、ADVIA 2120 を使用したフローサイトメトリーにより、血小板機能の決定要因 (血小板数、血小板分布幅 [PDW]、および平均血小板容積 [MPV])、および血漿サンプル中の赤血球 (RBC)、好中球およびリンパ球数を測定します。アナライザー (Siemens Healthineers、エアランゲン、ドイツ)。

サンプル サイズの評価: サンプル サイズは、Ene 3.0 ソフトウェア (GlaxoSmithKline) を使用して推定されています。 サンプルサイズは、マロンジアルデヒドのレベルに基づいて推定されています (Gassió et al., 2008)。 一方的な仮説で、タイプ I エラーの確率が 5%、β リスクが 0.10、効果の標準偏差が 1.4 であると仮定すると、研究の枝ごとに 10 人の患者、つまり合計 20 人が必要であると見なされます。忍耐。 患者の損失の 10% が想定される場合、最小サンプル サイズは 24 人で、研究の各ブランチに 12 人が必要になります。

統計分析: データの統計分析は、統計パッケージ IBM SPSS Statistics 24 for Windows (SPSS Inc、イリノイ州シカゴ) を使用して実行されます。 Kolmogorov-Smirnov 検定と Levenne 検定を実行して、それぞれ正規性と等分散性を検定します。

測定前と測定後の各オリーブオイルの効果を分析するために、正規分布に従ったデータと分散の等分散性の原則を二元配置分散分析でテストしました。 統計的有意性は、対応のないスチューデントの t 検定を適用して平均間の差を比較することによって確立されます。 正規分布または等分散性の原則に従わなかったデータは、二元配置 ANOVA のノンパラメトリック同等物である Scheirer-Ray-Hare 検定を使用して検定されます。 統計的有意性は、マンホイットニー U 検定を適用して平均間の差を比較することによって確立されます。

オリーブ オイルの種類の影響を分析するために、すべての値がデルタ スコア (つまり、ポスト プレ値) に変換され、その後、対応のないスチューデントの t 検定または正規性と等分散性に基づくマン ホイットニーの U 検定によってテストされます。データの。

効果量は、パラメトリック検定ではコーエンの d を使用し、ノンパラメトリック検定ではイータ 2 乗 (η²) を使用して計算されます。 0.2、0.5、および 0.8 の Cohen´s d の値は、効果サイズをそれぞれ小、中、大として解釈する古典的な Cohen バンドに対応します。 0.02、0.13、0.26 の η² の値は、それぞれ小、中、大の効果サイズに対応します。 研究者は、統計的有意水準を p < 0.05 に設定しました。