Fibromyalgie a olivový olej

Cíl:

Cílem této studie je zkoumat účinky dvou olivových olejů s různým obsahem antioxidantů na kardiovaskulární rizikové faktory (parametry srážení krve, indexy krevních destiček, počet červených krvinek, zánětlivé markery, lipidový profil, oxid dusnatý a kortizol) u pacientů s diagnózou fibromyalgie. Vyšetřovatelé určí parametry související s trombózou (hladiny fibrinogenu, protrombinový čas, protrombinová aktivita, kefalinový čas, počet krevních destiček, distribuční šířka krevních destiček [PDW], střední objem krevních destiček [MPV], krevní destičkový krit, počet červených krvinek [RBC], neutrofil- poměr k lymfocytům [NLR] a poměr destiček k lymfocytům [PLR]), zánětlivé markery (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivní protein [CRP], rychlost sedimentace erytrocytů (ESR)) , hladiny oxidu dusnatého, lipidový profil a hladiny kortizolu.

Účastníci:

Tato studie bude provedena v souladu s ustanoveními Helsinské deklarace Světové lékařské asociace.

Výzkumná skupina se spojí se španělskou asociací pacientů s fibromyalgií, AFIXA (Association of Fibromyalgia of Jaén, Španělsko), aby nalezla pacienty, kteří by se studie zúčastnili. Výzkumníci svolají pacienty do laboratoře Fakulty zdravotnických věd Univerzity v Jaén (Španělsko), aby získali několik zajímavých údajů (věk, BMI, další chronická onemocnění, těhotenství, kojení a léky). Na základě těchto údajů výzkumníci vyberou skupinu fibromyalgie. Při druhé návštěvě laboratoře všichni pacienti podepíší informovaný souhlas, budou odebrány vzorky krve a vyplní několik dotazníků (Fibromyalgia Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

Ženám s fibromyalgií bude dříve diagnostikována fibromyalgie profesionálním revmatologem a splňují kritéria American College of Rheumatology (ACR) pro fibromyalgii. Kritériem pro vyloučení bude přítomnost jakéhokoli jiného chronického onemocnění (diabetes mellitus, hypertenze, revmatoidní artritida, hepatitida, rakovina nebo ischemická choroba srdeční), dyslipidémie, těhotenství, kojení nebo obezita II. stupně (BMI ≥ 35 kg/m2). Žádný z účastníků nebude léčen antikoagulancii, kortikosteroidy, estrogeny, analgetiky nebo protizánětlivými léky a bude zařazen pouze v případě, že je přestal užívat alespoň 2 měsíce před začátkem naší studie. Nikdo nebude pravidelně konzumovat alkohol a všichni budou nekuřáci. Všichni účastníci budou sedaví.

Plán studie: Bude provedena randomizovaná, kontrolovaná, dvojitě zaslepená nutriční studie. Zkouška bude spočívat v konzumaci 50 ml/den jednoho ze dvou organických olivových olejů s různým obsahem antioxidantů, EVOO nebo ROO, po dobu 3 týdnů. Krátkodobá nutriční studie, jako je tato, může nabídnout určité výhody s ohledem na dlouhodobou studii, protože umožňuje pacientům dodržovat přísnější a kontrolovanější dietu ve vztahu k příjmu jiných antioxidantů. Tímto způsobem může být omezena možná interference jiných antioxidantů, stejně jako interference z možných změn v životním stylu pacientů, které by také mohly změnit výsledky.

Účastníci budou náhodně rozděleni do jedné ze dvou skupin: EVOO a ROO. Před zahájením 3týdenní dietní studie účastníci provedou 2týdenní vymývací období, během kterého konzumovali ROO (50 ml denně po dobu 2 týdnů), protože jsou součástí populace, která pravidelně konzumuje olivový olej. Biochemické markery a klinické parametry u každého účastníka budou stanoveny před a po 3týdenním léčebném období.

Organické olivové oleje budou získávány od společnosti Olifarma S.L. (Granada, Španělsko). Olivové oleje budou zabaleny podobně a účastníci budou zaslepeni, pokud jde o druh olivového oleje, který budou konzumovat. Účastníci budou konzumovat léčebný olivový olej surový, ale budou používat ROO k vaření, aby se jejich příjem antioxidantů nezměnil. Vyšetřovatelé dodají ROO na vaření v dostatečném množství pro celou rodinu. Výzkumníci odhadnou příjem účastníků pomocí 24hodinového stažení, které absolvují po dobu 3 dnů (2 pracovní dny a den volna) na začátku pokusu. Výzkumníci použijí průměr hodnot získaných během 3 dnů k výpočtu energetického příjmu účastníků (kcal/den) a příjmu makroživin (sacharidů [g/den], lipidů [g/den] a bílkovin [g/den ]) a mikroživiny, zejména ty, které mohou mít antioxidační účinek, včetně vitamínu C, vitamínu A, mědi, zinku a selenu. Na základě této analýzy vyšetřovatelé poskytnou všem účastníkům dietní doporučení se zaměřením na aspekty, které by každý měl zlepšit. Zaznamenají se údaje o váze účastníků na začátku a na konci pokusu. Vyšetřovatelé požádají účastníky, aby na konci pokusu vrátili všechny nádoby na olivový olej (spotřebované a nespotřebované nádoby) pro kontrolu spotřeby olivového oleje (tj. počet prázdných a plných nádob, které každý účastník vrátí).

Odběr krve a příprava krevních vzorků: Po celonočním lačnění bude v časných ranních hodinách odebírána žilní krev z antekubitální žíly do několika zkumavek s antikoagulačními a antikoagulačními zkumavkami. Krev ze zkumavek bez antikoagulancií se nechá srážet po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Zkumavky s antikoagulačním činidlem a zkumavky bez antikoagulantu budou poté centrifugovány při 3500 otáčkách za minutu po dobu 5 minut při teplotě 4 °C, aby se získaly vzorky plazmy a séra. Krev bude vždy odebírána ve stejnou denní dobu, aby se zabránilo cirkadiánním odchylkám. Parametry související s trombózou (hladiny fibrinogenu, protrombinový čas, protrombinová aktivita, kefalinový čas, počet krevních destiček, šířka distribuce krevních destiček [PDW], střední objem krevních destiček [MPV], krevní destičkový krit, počet červených krvinek [RBC], poměr neutrofilů a lymfocytů [NLR] a poměr krevních destiček k lymfocytům [PLR]) a rychlost sedimentace erytrocytů (ESR) byly stanoveny ve vzorcích plazmy. Ve vzorcích séra byly měřeny zánětlivé markery (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivní protein [CRP]), hladiny oxidu dusnatého, lipidový profil a hladiny kortizolu.

Klinické charakteristiky účastníků: Výzkumníci získají demografická a klinická data z rozhovorů a dotazníků účastníků. Stejný specialista bude provádět všechna měření a testy v průběhu studie. Dotazníky budou vyplněny ihned po odběru krve. Vědci budou hodnotit funkční kapacitu v každodenních životních aktivitách u pacientů s fibromyalgií pomocí španělské verze dotazníku Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). Skóre FIQ, což je nástroj, který vědci nejčastěji používají k odhadu závažnosti fibromyalgie, se pohybuje od 0 do 100. Vlastní muskuloskeletální bolest bude hodnocena u pacientů s fibromyalgií pomocí vizuální analogové škály (VAS; 10 cm). U obou těchto nástrojů vyšší skóre odráží horší symptomatologii. Vyšetřovatelé posoudí fyzický (Physical Component Summary, PCS-12) a duševní (Mental Component Summary, MCS-12) zdravotní stav pacientů a kontrol pomocí španělské verze 12-položkového Short-Form Health Survey (SF-12). ). Skóre se pohybuje od 0 do 100, přičemž nižší hodnoty odrážejí horší zdravotní stav.

Stanovení biochemických parametrů

Měření oxidu dusnatého (NO): Produkce NO byla nepřímo kvantifikována měřením sloučenin dusičnanů/dusitanů a sloučenin S-nitrosy (NOx) pomocí metody založené na chemiluminiscenci ozonu. Rozmražené alikvoty séra byly deproteinovány roztoky NaOH 0,8 N a ZnS04 16 %. Celkové množství NOx bude stanoveno, jak bylo popsáno dříve (Rus et al., 2011) za použití systému čištění Sievers Instruments, model NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), USA).

Stanovení zánětlivých markerů: Hladina IL-6 bude stanovena chemiluminiscenčním imunotestem za použití Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). Hladiny IL-10 budou měřeny chemiluminiscenčním imunoenzymatickým testem za použití luminometru MLX™ (Dynex Technologies, Chantilly, VA). CRP bude měřeno pomocí analyzátoru AU 5800 (Beckman Coulter).

Měření kortizolu: Hladina kortizolu bude stanovena ve vzorcích séra pomocí fluorescenčního polarizačního imunotestu s použitím analyzátoru AxSYM (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA).

Stanovení lipidového profilu: Sérový lipidový profil (celkový cholesterol, lipoprotein s vysokou hustotou [HDL]-cholesterol, triglyceridy, apolipoprotein A1 a apolipoprotein B) bude měřen spektrofotometrickým postupem pomocí analyzátoru OLYMPUS AU 5400 (Beckman Coulter). Hladiny lipoproteinu s nízkou hustotou (LDL)-cholesterolu budou odhadnuty nepřímo pomocí Friedewaldovy rovnice. Hladina homocysteinu bude stanovena fluorescenční polarizační imunoanalýzou pomocí analyzátoru AxSYM (Abbott Laboratories). Výzkumníci určí peroxidaci lipidů měřením látek reaktivních s thiobarbiturovou kyselinou (TBARS), které jsou dobrým indikátorem peroxidace lipidů, hlavního markeru oxidačního stresu. TBARS bude stanoveno spektrofotometricky ve vzorcích plazmy podle doporučení výrobce (TBARS Assay Kit, OXItek, Catalog. 0801192).

Stanovení parametrů souvisejících s trombózou: Parametry krevní koagulace (hladiny fibrinogenu, protrombinový čas, protrombinová aktivita a kefalinový čas) budou stanoveny ve vzorcích plazmy pomocí analyzátoru BCS XP (Siemens Healthineers, Erlangen, Německo). Výzkumníci budou měřit determinanty funkce krevních destiček (počet krevních destiček, šířka distribuce krevních destiček [PDW] a střední objem krevních destiček [MPV]) a počet červených krvinek (RBC), neutrofilů a lymfocytů ve vzorcích plazmy pomocí průtokové cytometrie pomocí ADVIA 2120 analyzátor (Siemens Healthineers, Erlangen, Německo).

Hodnocení velikosti vzorku: Velikost vzorku byla odhadnuta pomocí softwaru Ene 3.0 (GlaxoSmithKline). Velikost vzorku byla odhadnuta na základě hladin malondialdehydu (Gassió et al., 2008). Při jednostranné hypotéze, za předpokladu pravděpodobnosti chyby I. typu 5 %, β rizika 0,10, se směrodatnou odchylkou účinku 1,4, se považuje za nezbytných 10 pacientů na větev studie, tj. celkem 20 pacientů. Pokud se předpokládá 10 % ztrát pacientů, bude potřeba minimální velikost vzorku 24 pacientů, 12 pro každou větev studie.

Statistická analýza: Statistická analýza dat bude provedena pomocí statistického balíčku IBM SPSS Statistics 24 pro Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). Pro testování normality a homoskedasticity bude proveden Kolmogorov-Smirnovův test a Levennův test.

Aby bylo možné analyzovat účinek každého olivového oleje mezi měřeními před a po měření, data, která sledovala normální rozdělení a princip homoskedasticity rozptylů, byly testovány pomocí dvoucestné ANOVA. Statistická významnost bude stanovena použitím nepárového Studentova t-testu pro porovnání rozdílů mezi průměry. Data, která nesledovala normální rozdělení nebo princip homoskedasticity, budou testována pomocí Scheirer-Ray-Hareova testu, neparametrického ekvivalentu pro dvoucestnou ANOVA. Statistická významnost bude stanovena použitím Mann-Whitneyho U-testu pro porovnání rozdílů mezi průměry.

Pro analýzu účinku typu olivového oleje budou všechny hodnoty převedeny na delta skóre (tj. post-pre hodnoty) a poté budou testovány nepárovým Studentovým t testem nebo Mann-Whitney U-testem na základě normality a homoskedasticity. dat.

Velikost účinku bude vypočtena pomocí Cohenova d pro parametrické testy a eta na druhou (η²) pro neparametrické testy. Hodnoty Cohenova d 0,2, 0,5 a 0,8 odpovídají klasickým Cohenovým pásmům interpretace velikosti efektu jako malé, střední a velké. Hodnoty η² 0,02, 0,13 a 0,26 odpovídají velikosti malého, středního a velkého účinku. Výzkumníci stanovili hladinu statistické významnosti na p < 0,05.