Fibromyalgi og olivenolje

Mål:

Målet med denne studien er å undersøke effekten av to olivenoljer med forskjellig antioksidantinnhold på kardiovaskulære risikofaktorer (blodkoagulasjonsparametere, blodplateindekser, antall røde blodlegemer, inflammatoriske markører, lipidprofil, nitrogenoksid og kortisol) hos pasienter diagnostisert med fibromyalgi. Etterforskerne vil bestemme tromboserelaterte parametere (fibrinogennivåer, protrombintid, protrombinaktivitet, cefalintid, blodplateantall, blodplatefordelingsbredde [PDW], gjennomsnittlig blodplatevolum [MPV], blodplatekritt, antall røde blodlegemer [RBC], nøytrofil- til-lymfocytt-forhold [NLR] og blodplate-til-lymfocytt-forhold [PLR]), inflammatoriske markører (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivt protein [CRP], erytrocyttsedimentasjonshastighet (ESR)) , nitrogenoksidnivåer, lipidprofil og kortisolnivåer.

Deltakere:

Denne studien vil bli utført i samsvar med bestemmelsene i Helsinki-erklæringen fra World Medical Association.

Forskergruppen vil kontakte en spansk forening av pasienter med fibromyalgi, AFIXA (Association of Fibromyalgia of Jaén, Spania) for å finne pasienter som kan delta i studien. Forskerne vil innkalle pasienter i laboratoriet ved Fakultet for helsevitenskap ved Universitetet i Jaén (Spania) for å innhente flere data av interesse (alder, BMI, andre kroniske sykdommer, graviditet, amming og medisiner). Basert på disse dataene vil etterforskerne velge fibromyalgigruppen. I et andre besøk på laboratoriet vil alle pasienter signere et informert samtykkeskjema, blodprøvene vil bli tatt og de vil fylle ut flere spørreskjemaer (Fibromyalgi Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

Kvinnene med fibromyalgi vil tidligere bli diagnostisert med fibromyalgi av en profesjonell revmatolog og møtte American College of Rheumatology (ACR) kriteriene for fibromyalgi. Eksklusjonskriterier vil være tilstedeværelsen av enhver annen kronisk sykdom (diabetes mellitus, hypertensjon, revmatoid artritt, hepatitt, kreft eller iskemisk hjertesykdom), dyslipidemi, graviditet, amming eller grad II overvekt (BMI ≥ 35 kg/m2). Ingen av deltakerne vil bli behandlet med antikoagulantia, kortikosteroider, østrogener, smertestillende eller betennelsesdempende midler, og vil kun bli inkludert dersom de hadde sluttet å bruke dem minst 2 måneder før studiestart. Ingen vil konsumere alkohol regelmessig, og alle vil være ikke-røykere. Alle deltakerne vil være stillesittende.

Studiedesign: En randomisert, kontrollert, dobbeltblind ernæringsstudie vil gjennomføres. Forsøket vil bestå av inntak av 50 ml/dag av en av de to økologiske olivenoljene med forskjellig antioksidantinnhold, EVOO eller ROO, over 3 uker. En kortsiktig ernæringsstudie, som den nåværende, kan gi visse fordeler i forhold til en langtidsprøve, da den lar pasienter følge et strengere og mer kontrollert kosthold i forhold til inntak av andre antioksidanter. På denne måten kan den mulige forstyrrelsen av andre antioksidanter begrenses, og det samme kan forstyrrelser fra mulige endringer i pasientenes livsstil, som også kan endre resultatene.

Deltakerne vil bli tilfeldig fordelt i en av de to gruppene: EVOO og ROO. Før de begynner på 3-ukers kostholdsforsøk, vil deltakerne gjennomføre en 2-ukers utvaskingsperiode der de konsumerte ROO (50 ml daglig i 2 uker) fordi de er en del av en befolkning som bruker olivenolje regelmessig. Biokjemiske markører og kliniske parametere hos hver deltaker vil bli bestemt før og etter den 3-ukers behandlingsperioden.

Økologiske olivenoljer vil fås fra Olifarma S.L. (Granada, Spania). Olivenoljene vil bli pakket på samme måte, og deltakerne vil bli blindet med hensyn til hvilken type olivenolje de vil konsumere. Deltakerne vil konsumere behandlingen olivenolje rå, men vil bruke ROO til matlaging for å opprettholde inntaket av antioksidanter uendret. Etterforskerne vil levere ROO for matlaging i tilstrekkelig mengde for hele familien. Forskerne vil estimere deltakernes inntak ved hjelp av en 24-timers tilbakekalling som de vil fullføre i 3 dager (2 arbeidsdager og en fridag) i begynnelsen av forsøket. Etterforskerne vil bruke gjennomsnittet av verdiene oppnådd over de 3 dagene for å beregne deltakernes energiinntak (kcal/dag) og inntak av makronæringsstoffer (karbohydrater [g/dag], lipider [g/dag] og protein [g/dag] ]) og mikronæringsstoffer, spesielt de som kan ha en antioksidanteffekt, inkludert vitamin C, vitamin A, kobber, sink og selen. Basert på denne analysen vil etterforskerne gi alle deltakerne kostholdsanbefalinger, med fokus på aspektene som hver enkelt bør forbedre. Data om vekten til deltakerne ved begynnelsen og slutten av forsøket vil registrere. Etterforskerne vil be om at deltakerne returnerer alle behandlede olivenoljebeholdere (de konsumerte og ukonsumerte beholderne) på slutten av forsøket for kontroll av olivenoljeforbruket (dvs. en telling av de tomme og fulle beholderne hver deltaker vil returnere).

Blodtaking og klargjøring av blodprøver: Etter faste over natten vil det tidlig om morgenen tas veneblod fra antecubitalvenen over i flere rør med antikoagulant og antikoagulantfrie rør. Blodet fra de antikoagulantfrie rørene får koagulere i 30 minutter ved romtemperatur. De antikoagulerende og antikoagulantfrie rørene vil deretter bli sentrifugert ved 3500 rpm i 5 minutter ved 4°C for å oppnå henholdsvis plasma- og serumprøver. Blodet vil alltid bli tatt på samme tid på dagen for å unngå døgnvariasjoner. Tromboserelaterte parametere (fibrinogennivåer, protrombintid, protrombinaktivitet, cefalintid, blodplatetall, blodplatefordelingsbredde [PDW], gjennomsnittlig blodplatevolum [MPV], blodplatekritt, antall røde blodlegemer [RBC], nøytrofil-til-lymfocytt-forhold [NLR], og blodplate-til-lymfocytt-forhold [PLR]) og erytrocyttsedimentasjonshastighet (ESR) ble bestemt i plasmaprøver. Inflammatoriske markører (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivt protein [CRP]), nitrogenoksidnivåer, lipidprofil og kortisolnivåer ble målt i serumprøver.

Kliniske kjennetegn ved deltakere: Etterforskerne vil innhente demografiske og kliniske data fra deltakernes intervju og spørreskjemaer. Den samme spesialisten vil utføre alle målinger og tester gjennom hele studien. Spørreskjemaene vil bli fylt ut umiddelbart etter at blodet ble tatt. Forskerne skal evaluere funksjonell kapasitet i dagliglivets aktiviteter hos pasienter med fibromyalgi ved å bruke den spanske versjonen av Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). FIQ-poengsummen, som er det instrumentet som oftest brukes av forskere for å estimere alvorlighetsgraden av fibromyalgi, varierer fra 0 til 100. Selvrapporterte muskel- og skjelettsmerter vil bli vurdert hos fibromyalgipasienter med en Visual Analogue Scale (VAS; 10 cm). For begge disse instrumentene reflekterer høyere skårer dårligere symptomatologi. Etterforskerne vil vurdere den fysiske (Physical Component Summary, PCS-12) og mentale (Mental Component Summary, MCS-12) helsetilstanden til pasienter og kontroller ved å bruke den spanske versjonen av 12-elementers kortformede helseundersøkelse (SF-12). ). Poeng varierer fra 0 til 100, med lavere verdier som gjenspeiler dårligere helsetilstand.

Bestemmelse av biokjemiske parametere

Nitrogenoksid (NO) Måling: NO-produksjonen ble indirekte kvantifisert ved å måle nitrat/nitritt og S-nitroseforbindelser (NOx) ved bruk av en ozonkjemiluminescensbasert metode. De tinte serumalikvotene ble deproteinisert med NaOH 0,8 N og ZnSO4 16% løsninger. Den totale mengden NOx vil bli bestemt som tidligere beskrevet (Rus et al., 2011) ved bruk av rensesystemet til Sievers Instruments, modell NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), USA).

Bestemmelse av inflammatoriske markører: IL-6-nivået vil bli bestemt ved en kjemiluminescerende immunanalyse ved bruk av Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). Nivåer av IL-10 vil bli målt ved en kjemiluminescerende immunoenzymatisk analyse ved bruk av et MLX™ luminometer (Dynex Technologies, Chantilly, VA). CRP vil bli målt med en AU 5800 analysator (Beckman Coulter).

Kortisolmåling: Kortisolnivået vil bli bestemt i serumprøver ved en fluorescenspolarisasjonsimmunoassay ved bruk av en AxSYM-analysator (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA).

Bestemmelse av lipidprofil: Serumlipidprofil (totalkolesterol, høydensitetslipoprotein [HDL]-kolesterol, triglyserider, apolipoprotein A1 og apolipoprotein B) vil bli målt ved en spektrofotometrisk prosedyre ved bruk av en OLYMPUS AU 5400 analysator (Beckman Coulter). Low-density lipoprotein (LDL)-kolesterolnivåer vil bli estimert indirekte med Friedewald-ligningen. Nivået av homocystein vil bli bestemt ved en fluorescenspolarisasjonsimmunoanalyse ved bruk av en AxSYM-analysator (Abbott Laboratories). Forskerne vil bestemme lipidperoksidasjon ved å måle tiobarbitursyrereaktive stoffer (TBARS), som er en god indikator på lipidperoksidasjon, en viktig markør for oksidativt stress. TBARS vil bli bestemt spektrofotometrisk i plasmaprøver etter produsentens anbefalinger (TBARS Assay Kit, OXItek, Catalog. 0801192).

Bestemmelse av tromboserelaterte parametere: Blodkoagulasjonsparametere (fibrinogennivåer, protrombintid, protrombinaktivitet og cefalintid) vil bli bestemt i plasmaprøver ved bruk av BCS XP-analysatoren (Siemens Healthineers, Erlangen, Tyskland). Forskerne vil måle determinanter for blodplatefunksjon (blodplateantall, blodplatefordelingsbredde [PDW] og gjennomsnittlig blodplatevolum [MPV]), og antall røde blodlegemer (RBC), nøytrofile og lymfocytter i plasmaprøver ved hjelp av flowcytometri ved bruk av ADVIA 2120 analysator (Siemens Healthineers, Erlangen, Tyskland).

Prøvestørrelsesvurdering: Prøvestørrelsen er estimert ved hjelp av Ene 3.0-programvaren (GlaxoSmithKline). Prøvestørrelse er estimert basert på nivåene av malondialdehyd (Gassió et al., 2008). Med en ensidig hypotese, forutsatt en sannsynlighet for type I feil på 5 %, en β-risiko på 0,10, med et standardavvik på effekten på 1,4, anses 10 pasienter som nødvendig per gren av studien, det vil si totalt 20 pasienter. Hvis 10 % av pasienttap antas, vil det være nødvendig med en minimal prøvestørrelse på 24 pasienter, 12 for hver gren av studien.

Statistisk analyse: Den statistiske analysen av dataene vil bli utført ved å bruke den statistiske pakken IBM SPSS Statistics 24 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). Kolmogorov-Smirnov-testen og Levenne-testen vil bli utført for å teste henholdsvis normalitet og homoskedastisitet.

For å analysere effekten av hver olivenolje mellom pre- og postmål, ble dataene som fulgte en normalfordeling og prinsippet om homoskedastisitet av varians testet med en toveis ANOVA. Den statistiske signifikansen vil bli etablert ved å bruke en uparet Students t-test for å sammenligne forskjeller mellom gjennomsnitt. Data som ikke fulgte en normalfordeling eller prinsippet om homoskedastisitet vil bli testet ved hjelp av Scheirer-Ray-Hare-testen, den ikke-parametriske ekvivalenten for toveis ANOVA. Den statistiske signifikansen vil bli etablert ved å bruke Mann-Whitney U-testen for å sammenligne forskjeller mellom gjennomsnitt.

For å analysere effekten av typen olivenolje, vil alle verdier konverteres til delta-skårer (dvs. post-pre-verdier) og deretter testes ved uparet Student's t-test eller Mann-Whitney U-test basert på normalitet og homoskedastisitet av data.

Effektstørrelsen vil bli beregnet ved å bruke Cohens d for parametriske tester og eta-kvadrat (η²) for ikke-parametriske tester. Verdier av Cohens d på 0,2, 0,5 og 0,8 tilsvarer de klassiske Cohen-båndene for tolkning av effektstørrelsen som henholdsvis liten, middels og stor. Verdier for η² på 0,02, 0,13 og 0,26 tilsvarer henholdsvis liten, middels og stor effektstørrelse. Etterforskerne satte nivået for statistisk signifikans til p < 0,05.