Fibromialgia i oliwa z oliwek

Cel:

Celem niniejszego badania jest zbadanie wpływu dwóch oliw z oliwek o różnej zawartości przeciwutleniaczy na czynniki ryzyka sercowo-naczyniowego (parametry krzepnięcia krwi, wskaźniki płytek krwi, liczba czerwonych krwinek, markery stanu zapalnego, profil lipidowy, tlenek azotu i kortyzol) u pacjentów zdiagnozowano fibromialgię. Badacze określą parametry związane z zakrzepicą (stężenie fibrynogenu, czas protrombinowy, aktywność protrombinową, czas cefalinowy, liczba płytek krwi, szerokość dystrybucji płytek krwi [PDW], średnia objętość płytek krwi [MPV], liczba płytek krwi, liczba czerwonych krwinek [RBC], stosunek liczby limfocytów do limfocytów [NLR] i stosunek liczby płytek krwi do limfocytów [PLR]), markery stanu zapalnego (interleukina 6 [IL-6], IL-10, białko C-reaktywne [CRP], szybkość sedymentacji erytrocytów (ESR)) poziom tlenku azotu, profil lipidowy i poziom kortyzolu.

Uczestnicy:

Niniejsze badanie zostanie przeprowadzone zgodnie z postanowieniami Deklaracji Helsińskiej Światowego Stowarzyszenia Lekarzy.

Grupa badawcza skontaktuje się z hiszpańskim stowarzyszeniem pacjentów z fibromialgią, AFIXA (Stowarzyszenie Fibromialgii z Jaén, Hiszpania), aby znaleźć pacjentów do udziału w badaniu. Naukowcy zwołają pacjentów do laboratorium Wydziału Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu w Jaén (Hiszpania), aby uzyskać kilka interesujących ich danych (wiek, BMI, inne choroby przewlekłe, ciąża, laktacja i leki). Na podstawie tych danych badacze wybiorą grupę z fibromialgią. Podczas drugiej wizyty w laboratorium wszyscy pacjenci podpiszą formularz świadomej zgody, zostaną pobrane próbki krwi i wypełnią kilka kwestionariuszy (kwestionariusz wpływu fibromialgii, wizualna skala analogowa, krótki formularz 12 ankiety zdrowotnej).

Kobiety z fibromialgią zostaną wcześniej zdiagnozowane przez profesjonalnego reumatologa i spełnią kryteria American College of Rheumatology (ACR) dla fibromialgii. Kryteriami wykluczającymi będzie obecność jakiejkolwiek innej choroby przewlekłej (cukrzyca, nadciśnienie, reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie wątroby, rak lub choroba niedokrwienna serca), dyslipidemii, ciąży, laktacji lub otyłości II stopnia (BMI ≥ 35 kg/m2). Żaden z uczestników nie będzie leczony antykoagulantami, kortykosteroidami, estrogenami, lekami przeciwbólowymi lub przeciwzapalnymi i zostanie włączony tylko wtedy, gdy zaprzestał ich stosowania co najmniej 2 miesiące przed rozpoczęciem naszego badania. Nikt nie będzie regularnie spożywał alkoholu i wszyscy będą niepalący. Wszyscy uczestnicy będą mieli siedzący tryb życia.

Projekt badania: Przeprowadzona zostanie randomizowana, kontrolowana, podwójnie ślepa próba żywieniowa. Badanie będzie polegało na spożywaniu 50 ml dziennie jednej z dwóch organicznych oliw z oliwek o różnej zawartości przeciwutleniaczy, EVOO lub ROO, przez 3 tygodnie. Krótkoterminowa próba żywieniowa, taka jak niniejsza, może oferować pewne korzyści w porównaniu z długoterminową próbą, ponieważ pozwala pacjentom przestrzegać bardziej rygorystycznej i bardziej kontrolowanej diety w stosunku do przyjmowania innych przeciwutleniaczy. W ten sposób można ograniczyć możliwą ingerencję innych przeciwutleniaczy, podobnie jak ingerencję wynikającą z możliwych zmian w stylu życia pacjentów, co również może zmienić wyniki.

Uczestnicy zostaną losowo przydzieleni do jednej z dwóch grup: EVOO i ROO. Przed rozpoczęciem 3-tygodniowej próby dietetycznej uczestnicy przeprowadzili 2-tygodniowy okres wymywania, podczas którego spożywali ROO (50 ml dziennie przez 2 tygodnie), ponieważ należą do populacji regularnie spożywającej oliwę z oliwek. Markery biochemiczne i parametry kliniczne u każdego uczestnika zostaną określone przed i po 3-tygodniowym okresie leczenia.

Ekologiczne oliwy z oliwek będą pozyskiwane z firmy Olifarma S.L. (Grenada, Hiszpania). Oliwy z oliwek będą podobnie pakowane, a uczestnicy nie będą wiedzieć, jaki rodzaj oliwy będą spożywać. Uczestnicy będą spożywać leczniczą oliwę z oliwek na surowo, ale będą używać ROO do gotowania, aby utrzymać niezmienione spożycie przeciwutleniaczy. Badacze dostarczą ROO do gotowania w ilości wystarczającej dla całej rodziny. Naukowcy oszacują spożycie przez uczestników za pomocą 24-godzinnego wywiadu, który ukończą przez 3 dni (2 dni robocze i dzień wolny) na początku badania. Badacze wykorzystają średnią wartości uzyskanych w ciągu 3 dni do obliczenia spożycia energii przez uczestników (kcal/dzień) i spożycia makroskładników odżywczych (węglowodanów [g/dzień], lipidów [g/dzień] i białka [g/dzień). ]) oraz mikroelementy, zwłaszcza te, które mogą wykazywać działanie przeciwutleniające, w tym witamina C, witamina A, miedź, cynk i selen. Na podstawie tej analizy badacze przedstawią wszystkim uczestnikom zalecenia dietetyczne, koncentrując się na aspektach, które każdy powinien poprawić. Dane dotyczące wagi uczestników na początku i na końcu próby zostaną zapisane. Badacze poproszą uczestników, aby zwrócili wszystkie pojemniki z oliwą z oliwek do leczenia (pojemniki zużyte i niezużyte) na koniec badania w celu kontroli zużycia oliwy z oliwek (tj. zliczenia pustych i pełnych pojemników, które każdy uczestnik zwróci).

Pobieranie krwi i przygotowanie próbek krwi: Po całonocnym poście krew żylna zostanie pobrana wczesnym rankiem z żyły łokciowej do kilku probówek z antykoagulantami i bez antykoagulantów. Krew z probówek wolnych od antykoagulantów pozostawia się do skrzepnięcia na 30 minut w temperaturze pokojowej. Probówki z antykoagulantami i bez antykoagulantów będą następnie wirowane przy 3500 obr./min przez 5 min w 4°C w celu uzyskania odpowiednio próbek osocza i surowicy. Krew będzie pobierana zawsze o tej samej porze dnia, aby uniknąć wahań okołodobowych. Parametry związane z zakrzepicą (stężenie fibrynogenu, czas protrombinowy, aktywność protrombinowa, czas cefalinowy, liczba płytek krwi, szerokość dystrybucji płytek krwi [PDW], średnia objętość płytek krwi [MPV], liczba płytek krwi, liczba krwinek czerwonych [RBC], stosunek liczby neutrofili do limfocytów [NLR] i stosunek płytek krwi do limfocytów [PLR]) oraz szybkość sedymentacji erytrocytów (ESR) oznaczano w próbkach osocza. W próbkach surowicy zmierzono markery stanu zapalnego (interleukina 6 [IL-6], IL-10, białko C-reaktywne [CRP]), poziomy tlenku azotu, profil lipidowy i poziomy kortyzolu.

Charakterystyka kliniczna uczestników: Badacze uzyskają dane demograficzne i kliniczne z wywiadów i kwestionariuszy uczestników. Ten sam specjalista przeprowadzi wszystkie pomiary i testy w trakcie całego badania. Ankiety zostaną wypełnione niezwłocznie po pobraniu krwi. Naukowcy ocenią wydolność funkcjonalną w codziennych czynnościach pacjentów z fibromialgią za pomocą hiszpańskiej wersji kwestionariusza Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). Wynik FIQ, który jest instrumentem najczęściej używanym przez naukowców do oceny nasilenia fibromialgii, mieści się w zakresie od 0 do 100. Samodzielnie zgłaszany ból mięśniowo-szkieletowy zostanie oceniony u pacjentów z fibromialgią za pomocą wizualnej skali analogowej (VAS; 10 cm). W przypadku obu tych instrumentów wyższe wyniki odzwierciedlają gorszą symptomatologię. Badacze ocenią fizyczny (podsumowanie komponentów fizycznych, PCS-12) i psychiczny (podsumowanie komponentów psychicznych, MCS-12) stan zdrowia pacjentów i grupy kontrolnej, korzystając z hiszpańskiej wersji 12-itemowej krótkiej ankiety dotyczącej stanu zdrowia (SF-12 ). Wyniki mieszczą się w zakresie od 0 do 100, przy czym niższe wartości odzwierciedlają gorszy stan zdrowia.

Oznaczanie parametrów biochemicznych

Tlenek azotu (NO) Pomiar: Wytwarzanie NO mierzono ilościowo poprzez pomiar azotanów/azotynów i związków S-nitrozowych (NOx) przy użyciu metody opartej na chemiluminescencji ozonu. Rozmrożone porcje surowicy odbiałczono za pomocą 0,8 N NaOH i 16% roztworów ZnSO4. Całkowita ilość NOx zostanie określona zgodnie z wcześniejszym opisem (Rus i in., 2011) przy użyciu systemu oczyszczania firmy Sievers Instruments, model NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), USA).

Oznaczanie markerów stanu zapalnego: Poziom IL-6 będzie oznaczany chemiluminescencyjnym testem immunologicznym przy użyciu Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). Poziomy IL-10 będą mierzone za pomocą chemiluminescencyjnego testu immunoenzymatycznego z użyciem luminometru MLX™ (Dynex Technologies, Chantilly, VA). CRP będzie mierzone za pomocą analizatora AU 5800 (Beckman Coulter).

Pomiar kortyzolu: Poziom kortyzolu zostanie określony w próbkach surowicy za pomocą testu immunologicznego z polaryzacją fluorescencji przy użyciu analizatora AxSYM (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA).

Określenie profilu lipidowego: Profil lipidowy w surowicy (cholesterol całkowity, cholesterol lipoprotein o wysokiej gęstości [HDL], triglicerydy, apolipoproteina A1 i apolipoproteina B) zostanie zmierzony za pomocą procedury spektrofotometrycznej przy użyciu analizatora OLYMPUS AU 5400 (Beckman Coulter). Poziomy lipoprotein o małej gęstości (LDL)-cholesterolu zostaną oszacowane pośrednio za pomocą równania Friedewalda. Poziom homocysteiny zostanie określony za pomocą testu immunologicznego z polaryzacją fluorescencji przy użyciu analizatora AxSYM (Abbott Laboratories). Naukowcy określą peroksydację lipidów, mierząc substancje reagujące z kwasem tiobarbiturowym (TBARS), które są dobrym wskaźnikiem peroksydacji lipidów, głównego markera stresu oksydacyjnego. TBARS zostanie określony spektrofotometrycznie w próbkach osocza zgodnie z zaleceniami producenta (TBARS Assay Kit, OXItek, Katalog. 0801192).

Oznaczanie parametrów związanych z zakrzepicą: Parametry krzepliwości krwi (stężenie fibrynogenu, czas protrombinowy, aktywność protrombinowa i czas cefalinowy) będą oznaczane w próbkach osocza za pomocą analizatora BCS XP (Siemens Healthineers, Erlangen, Niemcy). Za pomocą cytometrii przepływowej ADVIA 2120 naukowcy zmierzą determinanty funkcji płytek krwi (liczba płytek krwi, szerokość dystrybucji płytek krwi [PDW] i średnia objętość płytek krwi [MPV]) oraz liczbę czerwonych krwinek (RBC), neutrofilów i limfocytów w próbkach osocza. analizator (Siemens Healthineers, Erlangen, Niemcy).

Ocena wielkości próby: Wielkość próby oszacowano za pomocą oprogramowania Ene 3.0 (GlaxoSmithKline). Wielkość próby oszacowano na podstawie poziomów dialdehydu malonowego (Gassió i in., 2008). Przy hipotezie jednostronnej, zakładając prawdopodobieństwo błędu typu I na poziomie 5%, ryzyko β na poziomie 0,10, przy odchyleniu standardowym efektu 1,4, uważa się za koniecznych 10 pacjentów na gałąź badania, czyli łącznie 20 pacjenci. Jeśli założy się 10% strat pacjentów, potrzebna będzie minimalna wielkość próby 24 pacjentów, po 12 dla każdej gałęzi badania.

Analiza statystyczna: Analiza statystyczna danych zostanie przeprowadzona przy użyciu pakietu statystycznego IBM SPSS Statistics 24 dla Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). W celu zbadania odpowiednio normalności i homoskedastyczności zostaną przeprowadzone testy Kołmogorowa-Smirnowa i testy Levenne'a.

Aby przeanalizować wpływ każdej oliwy z oliwek między pomiarami przed i po, dane, które były zgodne z rozkładem normalnym i zasadą homoskedastyczności wariancji, zostały przetestowane za pomocą dwuczynnikowej ANOVA. Istotność statystyczna zostanie ustalona przez zastosowanie niesparowanego testu t-Studenta w celu porównania różnic między średnimi. Dane, które nie mają rozkładu normalnego lub zasady homoskedastyczności, zostaną przetestowane przy użyciu testu Scheirera-Raya-Hare'a, nieparametrycznego odpowiednika dwukierunkowej analizy ANOVA. Istotność statystyczna zostanie ustalona poprzez zastosowanie testu U Manna-Whitneya w celu porównania różnic między średnimi.

Aby przeanalizować wpływ rodzaju oliwy z oliwek, wszystkie wartości zostaną przeliczone na wyniki delta (tj. wartości post-pre), a następnie zostaną przetestowane za pomocą testu t-Studenta dla nieparzystych lub testu U Manna-Whitneya opartego na normalności i homoskedastyczności danych.

Wielkość efektu zostanie obliczona przy użyciu współczynnika d Cohena dla testów parametrycznych i kwadratu eta (η²) dla testów nieparametrycznych. Wartości d Cohena wynoszące 0,2, 0,5 i 0,8 odpowiadają klasycznym pasmom Cohena interpretacji wielkości efektu odpowiednio jako małe, średnie i duże. Wartości η² 0,02, 0,13 i 0,26 odpowiadają odpowiednio małej, średniej i dużej wielkości efektu. Badacze ustalili poziom istotności statystycznej na p < 0,05.