Fibromyalgie und Olivenöl

Ziel:

Ziel der vorliegenden Studie ist es, die Auswirkungen von zwei Olivenölen mit unterschiedlichem Gehalt an Antioxidantien auf kardiovaskuläre Risikofaktoren (Blutgerinnungsparameter, Thrombozytenindizes, Erythrozytenzahl, Entzündungsmarker, Lipidprofil, Stickstoffmonoxid und Cortisol) bei Patienten zu untersuchen Fibromyalgie diagnostiziert. Die Prüfärzte bestimmen thrombosebezogene Parameter (Fibrinogenspiegel, Prothrombinzeit, Prothrombinaktivität, Kephalinzeit, Thrombozytenzahl, Thrombozytenverteilungsbreite [PDW], mittleres Thrombozytenvolumen [MPV], Thrombozytenkrit, Anzahl roter Blutkörperchen [RBC], Neutrophilen- zu-Lymphozyten-Verhältnis [NLR] und Thrombozyten-zu-Lymphozyten-Verhältnis [PLR]), Entzündungsmarker (Interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktives Protein [CRP], Erythrozytensedimentationsrate (ESR)) , Stickoxidspiegel, Lipidprofil und Cortisolspiegel.

Teilnehmer:

Diese Studie wird gemäß den Bestimmungen der Deklaration von Helsinki des Weltärztebundes durchgeführt.

Die Forschungsgruppe wird eine spanische Vereinigung von Patienten mit Fibromyalgie, AFIXA (Association of Fibromyalgia of Jaén, Spain), kontaktieren, um Patienten für die Teilnahme an der Studie zu finden. Die Forscher werden Patienten in das Labor der Fakultät für Gesundheitswissenschaften der Universität Jaén (Spanien) einladen, um mehrere interessante Daten zu erhalten (Alter, BMI, andere chronische Krankheiten, Schwangerschaft, Stillzeit und Medikation). Basierend auf diesen Daten werden die Forscher die Fibromyalgie-Gruppe auswählen. Bei einem zweiten Besuch im Labor unterschreiben alle Patienten eine Einwilligungserklärung, Blutproben werden entnommen und sie füllen mehrere Fragebögen aus (Fibromyalgia Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

Die Frauen mit Fibromyalgie werden zuvor von einem professionellen Rheumatologen mit Fibromyalgie diagnostiziert und erfüllen die Kriterien des American College of Rheumatology (ACR) für Fibromyalgie. Ausschlusskriterien sind das Vorliegen einer anderen chronischen Erkrankung (Diabetes mellitus, Bluthochdruck, rheumatoide Arthritis, Hepatitis, Krebs oder ischämische Herzerkrankung), Dyslipidämie, Schwangerschaft, Stillzeit oder Fettleibigkeit Grad II (BMI ≥ 35 kg/m2). Keiner der Teilnehmer wird mit Antikoagulanzien, Kortikosteroiden, Östrogenen, Analgetika oder entzündungshemmenden Medikamenten behandelt und wird nur eingeschlossen, wenn er diese mindestens 2 Monate vor Beginn unserer Studie abgesetzt hat. Keiner wird regelmäßig Alkohol konsumieren, und alle werden Nichtraucher sein. Alle Teilnehmer werden sesshaft sein.

Studiendesign: Es wird eine randomisierte, kontrollierte, doppelblinde Ernährungsstudie durchgeführt. Die Studie besteht aus dem Verzehr von 50 ml/Tag eines der beiden Bio-Olivenöle mit unterschiedlichem Gehalt an Antioxidantien, EVOO oder ROO, über 3 Wochen. Ein Kurzzeit-Ernährungsversuch, wie der vorliegende, kann gegenüber einem Langzeitversuch gewisse Vorteile bieten, da er den Patienten ermöglicht, eine strengere und kontrolliertere Diät in Bezug auf die Einnahme anderer Antioxidantien einzuhalten. Auf diese Weise kann die mögliche Beeinflussung durch andere Antioxidantien begrenzt werden, ebenso wie die Beeinflussung durch mögliche Änderungen im Lebensstil der Patienten, die ebenfalls die Ergebnisse verändern könnten.

Die Teilnehmer werden nach dem Zufallsprinzip einer der beiden Gruppen EVOO und ROO zugeteilt. Vor Beginn der 3-wöchigen Ernährungsstudie führen die Teilnehmer eine 2-wöchige Auswaschphase durch, in der sie ROO (50 ml täglich für 2 Wochen) konsumieren, da sie Teil einer Bevölkerung sind, die regelmäßig Olivenöl konsumiert. Biochemische Marker und klinische Parameter bei jedem Teilnehmer werden vor und nach der 3-wöchigen Behandlungsphase bestimmt.

Bio-Olivenöle werden von Olifarma S.L. (Granada, Spanien). Die Olivenöle werden ähnlich verpackt, und die Teilnehmer werden hinsichtlich der Art des Olivenöls, das sie konsumieren werden, geblendet. Die Teilnehmer werden das Behandlungsolivenöl roh konsumieren, aber ROO zum Kochen verwenden, um ihre Aufnahme von Antioxidantien unverändert zu halten. Die Ermittler werden ROO zum Kochen in ausreichender Menge für die ganze Familie liefern. Die Forscher werden die Aufnahme der Teilnehmer anhand eines 24-Stunden-Rückrufs schätzen, den sie zu Beginn der Studie an 3 Tagen (2 Arbeitstage und ein freier Tag) durchführen. Die Forscher verwenden den Durchschnitt der über die 3 Tage erhaltenen Werte, um die Energieaufnahme (kcal/Tag) und die Aufnahme von Makronährstoffen (Kohlenhydrate [g/Tag], Lipide [g/Tag] und Protein [g/Tag] der Teilnehmer zu berechnen ]) und Mikronährstoffe, insbesondere solche, die eine antioxidative Wirkung haben können, darunter Vitamin C, Vitamin A, Kupfer, Zink und Selen. Basierend auf dieser Analyse werden die Ermittler allen Teilnehmern Ernährungsempfehlungen geben, die sich auf die Aspekte konzentrieren, die jeder verbessern sollte. Daten über das Gewicht der Teilnehmer zu Beginn und am Ende des Versuchs werden aufgezeichnet. Die Ermittler werden die Teilnehmer auffordern, alle Behandlungsolivenölbehälter (die verbrauchten und nicht verbrauchten Behälter) am Ende der Studie zurückzugeben, um den Olivenölverbrauch zu kontrollieren (d. H. Eine Zählung der leeren und vollen Behälter, die jeder Teilnehmer zurückgibt).

Blutentnahme und Blutprobenvorbereitung: Nach nächtlichem Fasten wird am frühen Morgen venöses Blut aus der Antekubitalvene in mehrere Röhrchen mit gerinnungshemmenden und gerinnungshemmenden Röhrchen abgenommen. Das Blut der antikoagulansfreien Röhrchen lässt man 30 min bei Raumtemperatur gerinnen. Die Antikoagulans- und Antikoagulans-freien Röhrchen werden dann bei 3500 U/min für 5 min bei 4 °C zentrifugiert, um Plasma- bzw. Serumproben zu erhalten. Das Blut wird immer zur gleichen Tageszeit entnommen, um zirkadiane Schwankungen zu vermeiden. Thrombosebezogene Parameter (Fibrinogenspiegel, Prothrombinzeit, Prothrombinaktivität, Kephalinzeit, Thrombozytenzahl, Thrombozytenverteilungsbreite [PDW], mittleres Thrombozytenvolumen [MPV], Thrombozytenkrit, Anzahl der roten Blutkörperchen [RBC], Neutrophilen-zu-Lymphozyten-Verhältnis). [NLR] und Thrombozyten-zu-Lymphozyten-Verhältnis [PLR]) und Erythrozytensedimentationsrate (ESR) wurden in Plasmaproben bestimmt. Entzündungsmarker (Interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktives Protein [CRP]), Stickoxidspiegel, Lipidprofil und Cortisolspiegel wurden in Serumproben gemessen.

Klinische Merkmale der Teilnehmer: Die Ermittler erhalten demografische und klinische Daten aus den Interviews und Fragebögen der Teilnehmer. Derselbe Spezialist wird alle Messungen und Tests während der gesamten Studie durchführen. Die Fragebögen werden unmittelbar nach der Blutentnahme ausgefüllt. Die Forscher werden die funktionelle Kapazität bei Aktivitäten des täglichen Lebens bei Patienten mit Fibromyalgie anhand der spanischen Version des Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ) bewerten. Der FIQ-Score, das von Forschern am häufigsten verwendete Instrument zur Einschätzung des Schweregrads der Fibromyalgie, reicht von 0 bis 100. Selbstberichtete muskuloskelettale Schmerzen werden bei Fibromyalgie-Patienten anhand einer visuellen Analogskala (VAS; 10 cm) bewertet. Bei beiden Instrumenten spiegeln höhere Werte eine schlechtere Symptomatologie wider. Die Ermittler werden den körperlichen (Physical Component Summary, PCS-12) und mentalen (Mental Component Summary, MCS-12) Gesundheitszustand von Patienten und Kontrollpersonen anhand der spanischen Version der Kurzform-Gesundheitsbefragung mit 12 Punkten (SF-12 ). Die Werte reichen von 0 bis 100, wobei niedrigere Werte einen schlechteren Gesundheitszustand widerspiegeln.

Bestimmung biochemischer Parameter

Stickoxid (NO)-Messung: Die NO-Produktion wurde indirekt quantifiziert, indem Nitrat/Nitrit- und S-Nitrose-Verbindungen (NOx) unter Verwendung einer auf Ozon-Chemilumineszenz basierenden Methode gemessen wurden. Die aufgetauten Serumaliquots wurden mit 0,8 N NaOH- und 16 %-igen ZnSO&sub4;-Lösungen deproteiniert. Die Gesamtmenge an NOx wird wie zuvor beschrieben (Rus et al., 2011) unter Verwendung des Spülsystems von Sievers Instruments, Modell NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), USA) bestimmt.

Bestimmung von Entzündungsmarkern: Der IL-6-Spiegel wird durch einen chemilumineszenten Immunoassay unter Verwendung des Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter) bestimmt. Die Konzentrationen von IL-10 werden durch einen chemilumineszenten immunenzymatischen Assay unter Verwendung eines MLXTM-Luminometers (Dynex Technologies, Chantilly, VA) gemessen. CRP wird unter Verwendung eines AU 5800-Analysators (Beckman Coulter) gemessen.

Cortisolmessung: Der Cortisolspiegel wird in Serumproben durch einen Fluoreszenz-Polarisations-Immunoassay unter Verwendung eines AxSYM-Analysegeräts (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA) bestimmt.

Bestimmung des Lipidprofils: Das Serumlipidprofil (Gesamtcholesterin, High-Density-Lipoprotein [HDL]-Cholesterin, Triglyceride, Apolipoprotein A1 und Apolipoprotein B) wird durch ein spektrophotometrisches Verfahren unter Verwendung eines OLYMPUS AU 5400-Analysators (Beckman Coulter) gemessen. Low-Density-Lipoprotein (LDL)-Cholesterinspiegel werden indirekt mit der Friedewald-Gleichung geschätzt. Der Homocysteinspiegel wird durch einen Fluoreszenz-Polarisations-Immunassay unter Verwendung eines AxSYM-Analysators (Abbott Laboratories) bestimmt. Die Forscher werden die Lipidperoxidation bestimmen, indem sie Thiobarbitursäure-reaktive Substanzen (TBARS) messen, die ein guter Indikator für die Lipidperoxidation sind, ein wichtiger Marker für oxidativen Stress. TBARS wird spektrophotometrisch in Plasmaproben gemäß den Empfehlungen des Herstellers bestimmt (TBARS Assay Kit, OXItek, Katalog. 0801192).

Bestimmung thromboserelevanter Parameter: Blutgerinnungsparameter (Fibrinogenspiegel, Prothrombinzeit, Prothrombinaktivität und Kephalinzeit) werden in Plasmaproben mit dem Analysegerät BCS XP (Siemens Healthineers, Erlangen, Deutschland) bestimmt. Die Forscher werden Determinanten der Blutplättchenfunktion (Blutplättchenzahl, Blutplättchenverteilungsbreite [PDW] und mittleres Blutplättchenvolumen [MPV]) und die Anzahl roter Blutkörperchen (RBC), Neutrophilen und Lymphozyten in Plasmaproben durch Durchflusszytometrie mit dem ADVIA 2120 messen Analysator (Siemens Healthineers, Erlangen, Deutschland).

Schätzung der Stichprobengröße: Die Stichprobengröße wurde unter Verwendung der Software Ene 3.0 (GlaxoSmithKline) geschätzt. Die Probengröße wurde auf der Grundlage des Malondialdehydgehalts geschätzt (Gassió et al., 2008). Bei einseitiger Hypothese, angenommen einer Fehlerwahrscheinlichkeit 1. Art von 5 %, einem β-Risiko von 0,10, bei einer Standardabweichung des Effekts von 1,4, werden pro Studienzweig 10 Patienten als notwendig erachtet, also insgesamt 20 Patienten. Wenn 10 % der Patientenverluste angenommen werden, wird eine minimale Stichprobengröße von 24 Patienten benötigt, 12 für jeden Zweig der Studie.

Statistische Auswertung: Die statistische Auswertung der Daten erfolgt mit dem Statistikpaket IBM SPSS Statistics 24 für Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). Der Kolmogorov-Smirnov-Test und der Levenne-Test werden durchgeführt, um Normalität bzw. Homoskedastizität zu testen.

Um die Wirkung jedes Olivenöls zwischen Vor- und Nachmessungen zu analysieren, wurden die Daten, die einer Normalverteilung und dem Prinzip der Homoskedastizität der Varianzen folgten, durch eine zweifache ANOVA getestet. Die statistische Signifikanz wird durch Anwenden eines ungepaarten Student-t-Tests zum Vergleichen von Unterschieden zwischen Mittelwerten festgestellt. Daten, die keiner Normalverteilung oder dem Prinzip der Homoskedastizität folgen, werden mit dem Scheirer-Ray-Hare-Test getestet, dem nichtparametrischen Äquivalent für die zweifache ANOVA. Die statistische Signifikanz wird durch Anwendung des Mann-Whitney-U-Tests ermittelt, um Differenzen zwischen Mittelwerten zu vergleichen.

Um die Wirkung der Olivenölsorte zu analysieren, werden alle Werte in Delta-Scores (d. h. Post-Pre-Werte) umgewandelt und anschließend durch den ungepaarten Student-t-Test oder den Mann-Whitney-U-Test auf der Grundlage von Normalität und Homoskedastizität getestet von Dateien.

Die Effektgröße wird mit dem Cohen´s d für parametrische Tests und dem Eta-Quadrat (η²) für nichtparametrische Tests berechnet. Werte von Cohen´s d von 0,2, 0,5 und 0,8 entsprechen den klassischen Cohen-Bändern zur Interpretation der Effektgröße als klein, mittel bzw. groß. Werte von η² von 0,02, 0,13 und 0,26 entsprechen einer kleinen, mittleren bzw. großen Effektgröße. Die Forscher legten das Niveau der statistischen Signifikanz auf p < 0,05 fest.