健康志愿者的维生素 K 补充研究（目标 2B）

研究人员将在具有特定 CYP4F2*3 基因型的人群中研究补充维生素 K 对肝脏维生素 K 浓度的两种生物标志物的影响。 具体来说，研究人员将测试我们的长期（血浆因子 II 蛋白代谢物）和短期（尿钾酸分解代谢物）肝脏维生素 K 浓度和 CYP4F2*3 的新型生物标志物在 10 天的维生素治疗后的关联健康志愿者的 K 补充剂。

研究人员将通过在 UWMC 发布广告，招募男性和女性健康志愿者。 将采用两步选择过程。 受试者将通过回复传单自行选择，并联系研究协调员。 研究协调员将通过电话筛选他们是否符合条件，如果符合条件，则预约第一次研究访问。 在第一阶段，研究协调员将从约 200 名符合条件的候选人中收集 DNA 口腔拭子；将测试 DNA 是否存在 CYP4F2*3 变体等位基因。 PI 和研究协调员将审查基因分型结果，然后选择 14 名具有纯合 CYP4F2*3 基因型或杂合 CYP4F2*1/*3 基因型的个体，以及人口统计学匹配的 14 名具有纯合 CYP4F2*1 基因型的个体研究补充阶段的诊断位点。 然后，研究协调员将通过电话联系这些受试者以参与第二阶段。

程序 - 第一阶段，用于 DNA 分离的口腔拭子收集。

人口统计问卷：将通过简短的人口统计问卷收集自我报告的遗产、年龄和性别。

口腔拭子：我们将用棉签收集面颊细胞并分离 DNA 并检测 CYP4F2*1 和 CYP4F2*3 等位基因。

基因分型：CYP4F2 基因型将通过经过验证的 TaqMan 测定法 (ABI/ThermoFisher Scientific) 确定，使用市售的 DNA 杂交探针来检测 CYP4F2*3 等位基因的存在与否。 属于纯合 CYP4F2*3 基因型或杂合 CYP4F2*1/*3 基因型以及 CYP4F2*3 等位基因的受试者将有资格进入 II 期。

程序 - 第二阶段，补充维生素 K。

维生素 K 补充剂：根据 CYP4F2 基因型选择参加补充剂研究的研究参与者将连续 10 天服用 1 毫克/天的叶绿醌（Vitacost；Natures Life K-1 叶绿醌）。 每剂将在早上（~ 8 点）服用，用半品脱 2% 的牛奶服用，以促进吸收。

样品采集：对于补充研究，在从第 1 天到第 5 天以及第 8 天和第 10 天维生素 K 补充剂 10 天禁食过夜后，将收集静脉血样（10 mL EDTA 管）和尿液样本。 血浆将被分离，两个样品将被储存在 -70°C 直到分析。 有生育能力的妇女将进行 d1 的尿妊娠试验，如果呈阳性，将从研究中退出，所有样本和数据将被销毁。

血浆因子 II 蛋白质形式的测量：因子 II 的 11 种单独蛋白质形式的血浆浓度将通过 LC-MS/MS 测量。 该数据将用于计算长期维生素 K 状态的三个指标，即 unFII、ucFII:iFII 和 inFII:aFII。 这些代表因子 II 羧化不足程度的不同数学测量。 未计划对血浆维生素 K1、PIVKA II 和 ucOC 进行前瞻性分析，但会在需要该数据时保留。

尿钾酸 I 和 II 的测量：使用研究人员最近开发的经过验证的 LC-MS/MS 测定法，将对尿样中的钾酸 I 和 II 以及肌酐 (Cr) 进行定量。 将计算总的和个体的尿钾酸/铬比。

统计分析计划：研究人员将进行非配对 t 检验，以比较两个 CYP4F2 基因型组对补充维生素 K 的平均反应。 响应定义为维生素 K 状态值 x 时间曲线下的面积，针对 10 天干预期的基线进行了校正。 次要指标是维生素 K 状态比率的绝对峰值变化。 短期（尿 K-酸/Cr 比率）和长期（ucFII:iFII 和 inFII:aFII）生物标志物将分别进行测试。 根据试点数据，当对补充剂的反应存在两倍差异时，每个基因型组中 14 个样本量将提供至少 80% 的功效来检测显着性 0.05 水平的显着影响。