Estudo de Suplementação de Vitamina K em Voluntários Saudáveis ​​(Objetivo 2B)

Os investigadores estudarão o efeito da suplementação de vitamina K em dois biomarcadores da concentração hepática de vitamina K em grupos com genótipo CYP4F2*3 definido. Especificamente, os investigadores testarão uma associação entre nossos novos biomarcadores de longo prazo (proteoformas do Fator II plasmático) e curto prazo (catabólitos do ácido K urinário) concentração hepática de vitamina K e CYP4F2*3 após um período de 10 dias de vitamina Suplementação de K em voluntários saudáveis.

Os investigadores recrutarão, por meio de anúncios publicados na UWMC, voluntários saudáveis ​​masculinos e femininos. Será empregado um processo de seleção em duas etapas. Os participantes se auto-selecionarão respondendo a folhetos e entrarão em contato com o coordenador da pesquisa. O coordenador da pesquisa fará uma triagem de elegibilidade por telefone e, se elegível, marcará uma consulta para a primeira visita do estudo. Para a primeira fase, o Coordenador de Pesquisa coletará um swab bucal de DNA de ~ 200 candidatos elegíveis; o DNA será testado quanto à ausência ou presença do alelo variante CYP4F2*3. O PI e o Coordenador de Pesquisa revisarão os resultados da genotipagem e, em seguida, selecionarão 14 indivíduos com um genótipo homozigoto CYP4F2*3 ou um genótipo heterozigoto CYP4F2*1/*3, e um grupo demograficamente compatível de 14 com um genótipo homozigoto CYP4F2*1 no diagnóstico para a fase de suplementação do estudo. O coordenador do estudo entrará em contato com esses sujeitos por telefone para a participação na Fase II.

Procedimentos - Fase I, Coleta de swab bucal para isolamento de DNA.

Questionário demográfico: Herança autodeclarada, idade e sexo serão coletados por meio de um breve questionário demográfico.

Swab bucal: coletaremos células da bochecha com um cotonete e isolaremos o DNA e testaremos os alelos CYP4F2*1 e CYP4F2*3.

Genotipagem: o genótipo CYP4F2 será determinado por um ensaio TaqMan validado (ABI/ThermoFisher Scientific), usando sondas de hibridização de DNA comercialmente disponíveis para testar a ausência ou presença do alelo CYP4F2*3. Indivíduos que são um genótipo homozigoto CYP4F2*3 ou um genótipo heterozigoto CYP4F2*1/*3 e alelos CYP4F2*3 serão elegíveis para a Fase II.

Procedimentos - Fase II, Suplementação de Vitamina K.

Suplementação de vitamina K: Os participantes da pesquisa selecionados para o estudo de suplementação com base no genótipo CYP4F2 receberão 1 mg/dia de filoquinona (Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone) por 10 dias consecutivos. Cada dose será tomada pela manhã (~ 8h), com meio litro de leite 2% para facilitar a absorção.

Coleta de amostra: Para o estudo de suplementação, uma amostra de sangue venoso (tubo de 10 mL EDTA) e uma amostra de urina serão coletadas após um jejum noturno de d1 a d5 e em d8 e d10 de suplementação de vitamina K por 10 dias. O plasma será isolado e ambas as amostras serão armazenadas a -70°C até a análise. As mulheres com potencial para engravidar farão um teste de gravidez de urina de d1 e, se positivo, serão retiradas do estudo e todas as amostras e dados serão destruídos.

Medição das Proteoformas Plasmáticas do Fator II: A concentração plasmática das 11 proteoformas individuais do Fator II será medida por LC-MS/MS. Esses dados serão usados ​​para calcular três métricas de status de vitamina K a longo prazo, unFII, ucFII:iFII e inFII:aFII. Estes representam diferentes medidas matemáticas do grau de subcarboxilação do Fator II. A análise prospectiva da vitamina K1 plasmática, PIVKA II e ucOC não está planejada, mas será mantida em reserva caso haja necessidade desses dados.

Medição de K-Acid urinário I e II: A quantificação de K-Acid I e II e creatinina (Cr) em amostras pontuais de urina será realizada, usando um ensaio LC-MS/MS validado que os investigadores desenvolveram recentemente. A relação K-Acid/Cr urinário total e individual será computada.

Plano de Análise Estatística: Os investigadores realizarão um teste t não pareado para comparar a resposta média à suplementação de vitamina K nos dois grupos de genótipos CYP4F2. A resposta é definida como a área sob a curva do valor do status da vitamina K x tempo, corrigida para a linha de base, para o período de intervenção de 10 dias. Uma métrica secundária será a mudança de pico absoluta na proporção de status de vitamina K. Tanto os biomarcadores de curta duração (relação ácido K urinário/Cr) quanto os de longa duração (ucFII:iFII e inFII:aFII) serão testados separadamente. Com base em dados piloto, um tamanho de amostra de 14 em cada grupo de genótipo fornecerá um poder de pelo menos 80% para detectar um efeito significativo no nível de significância 0,05, quando houver uma diferença de duas vezes na resposta à suplementação.