건강한 지원자를 대상으로 한 비타민 K 보충 연구(목표 2B)

연구자들은 정의된 CYP4F2*3 유전자형을 가진 그룹에서 간 비타민 K 농도의 두 가지 바이오마커에 대한 비타민 K 보충의 효과를 연구할 것입니다. 구체적으로, 연구자들은 10일 간의 비타민 투여 후 장기(혈장 인자 II 단백체) 및 단기(요로 K-산 분해물) 간 비타민 K 농도의 새로운 바이오마커와 CYP4F2*3 사이의 연관성을 테스트할 것입니다. 건강한 지원자의 K 보충.

조사관은 UWMC에 게시된 광고를 통해 남성 및 여성의 건강한 지원자를 모집합니다. 2단계 선택 프로세스가 사용됩니다. 피험자는 전단지에 응답하여 스스로 선택하고 연구 코디네이터에게 연락합니다. 연구 코디네이터는 전화로 자격 여부를 심사하고 자격이 있는 경우 첫 번째 연구 방문 약속을 잡습니다. 첫 번째 단계에서 연구 코디네이터는 ~ 200명의 적격 후보자로부터 구강 면봉 DNA를 수집합니다. DNA는 CYP4F2*3 변형 대립유전자의 부재 또는 존재에 대해 테스트됩니다. PI 및 연구 코디네이터는 유전자형 결과를 검토한 다음 동형접합 CYP4F2*3 유전자형 또는 이형접합 CYP4F2*1/*3 유전자형을 가진 14명의 개인과 동형접합 CYP4F2*1 유전자형을 가진 14명의 인구통계학적으로 일치하는 그룹을 선택합니다. 연구의 보충 단계를 위한 진단 궤적. 그런 다음 연구 코디네이터는 2상 참여를 위해 전화로 이들 피험자에게 연락할 것입니다.

절차 - 단계 I, DNA 분리를 위한 협측 면봉 수집.

인구통계학적 설문지: 자가 보고한 유산, 연령 및 성별은 간단한 인구학적 설문지를 통해 수집됩니다.

협측 면봉: 면봉으로 뺨 세포를 채취하여 DNA를 분리하고 CYP4F2*1 및 CYP4F2*3 대립유전자를 테스트합니다.

유전자형 분석: CYP4F2 유전자형은 CYP4F2*3 대립형질의 부재 또는 존재 여부를 테스트하기 위해 상업적으로 이용 가능한 DNA 혼성화 프로브를 사용하여 검증된 TaqMan 분석(ABI/ThermoFisher Scientific)에 의해 결정됩니다. 동형접합 CYP4F2*3 유전자형 또는 이형접합 CYP4F2*1/*3 유전자형 및 CYP4F2*3 대립유전자인 피험자는 II상에 적합합니다.

절차 - 2상, 비타민 K 보충.

비타민 K 보충: CYP4F2 유전자형에 근거한 보충 연구에 선정된 연구 참여자는 연속 10일 동안 1mg/day 필로퀴논(Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone)을 투여받게 됩니다. 각 복용량은 아침(~오전 8시)에 흡수를 촉진하기 위해 2% 우유 반 파인트와 함께 복용합니다.

샘플 수집: 보충 연구를 위해 정맥혈 샘플(10mL EDTA 튜브)과 반점 소변 샘플은 10일 동안 비타민 K 보충제의 d1에서 d5까지 그리고 d8과 d10에 밤새 금식한 후 수집됩니다. 혈장은 분리되고 두 샘플은 분석할 때까지 -70°C에서 보관됩니다. 가임 여성은 d1의 소변 임신 검사를 받고 양성이면 연구에서 제외되며 모든 샘플과 데이터는 파기됩니다.

혈장 인자 II 단백체의 측정: 인자 II의 11개 개별 단백체의 혈장 농도는 LC-MS/MS에 의해 측정될 것이다. 이 데이터는 장기 비타민 K 상태인 unFII, ucFII:iFII 및 inFII:aFII의 세 가지 지표를 계산하는 데 사용됩니다. 이들은 인자 II 언더카르복실화 정도의 상이한 수학적 척도를 나타냅니다. 혈장 비타민 K1, PIVKA II 및 ucOC의 전향적 분석은 계획되어 있지 않지만 해당 데이터에 대한 필요성이 발생할 경우 예비로 보관됩니다.

소변 K-산 I 및 II의 측정: 조사관이 최근에 개발한 검증된 LC-MS/MS 분석을 사용하여 스팟 소변 샘플에서 K-산 I 및 II, 크레아티닌(Cr)의 정량화를 수행합니다. 전체 및 개별 소변 K-Acid/Cr 비율이 계산됩니다.

통계적 분석 계획: 조사관은 2개의 CYP4F2 유전자형 그룹에서 비타민 K 보충에 대한 평균 반응을 비교하기 위해 짝이 없는 t-테스트를 ​​수행할 것입니다. 반응은 10일 개입 기간 동안 기준선에 대해 보정된 비타민 K 상태 값 x 시간 곡선 아래 영역으로 정의됩니다. 두 번째 지표는 비타민 K 상태 비율의 절대 피크 변화입니다. 단기(요 K-Acid/Cr 비율) 및 장기(ucFII:iFII 및 inFII:aFII) 바이오마커는 모두 개별적으로 테스트됩니다. 파일럿 데이터를 기반으로, 각 유전자형 그룹에서 14개의 샘플 크기는 보충에 대한 반응에 2배의 차이가 있을 때 유의성 0.05 수준에서 유의미한 효과를 감지하기 위해 최소 80%의 검정력을 제공할 것입니다.