K-vitamintilskudsundersøgelse i sunde frivillige (Mål 2B)

Forskerne vil studere effekten af ​​vitamin K-tilskud på to biomarkører for lever-vitamin K-koncentration i grupper med defineret CYP4F2*3 genotype. Specifikt vil efterforskerne teste for en sammenhæng mellem vores nye biomarkører af langsigtede (plasma faktor II proteoformer) og kortvarige (urinary K-syre katabolitter) hepatisk vitamin K koncentration og CYP4F2*3 efter en 10-dages periode med vitamin. K-tilskud hos raske frivillige.

Efterforskerne vil ved opslåede annoncer på UWMC rekruttere sunde mandlige og kvindelige frivillige. Der vil blive anvendt en to-trins udvælgelsesproces. Emner vil selv vælge ved at svare på flyers og kontakte forskningskoordinatoren. Forskningskoordinatoren vil screene dem for berettigelse over telefonen, og hvis de er berettiget, aftaler de det første studiebesøg. I den første fase vil forskningskoordinatoren indsamle en bukkal podning af DNA fra ~ 200 kvalificerede kandidater; DNA'et vil blive testet for fravær eller tilstedeværelse af CYP4F2*3-variantallelen. PI og forskningskoordinator vil gennemgå genotyperesultaterne og derefter udvælge 14 individer med enten en homozygot CYP4F2*3 genotype eller en heterozygot CYP4F2*1/*3 genotype og en demografisk matchet gruppe på 14 med en homozygot CYP4F2*1 genotype diagnostisk locus for suppleringsfasen af ​​undersøgelsen. Studiekoordinatoren vil derefter kontakte disse forsøgspersoner telefonisk for deltagelse i fase II.

Procedurer - Fase I, Indsamling af bukkal podning til DNA-isolering.

Demografisk spørgeskema: Selvrapporteret arv, alder og køn vil blive indsamlet gennem et kort demografisk spørgeskema.

Buccal podning: Vi vil indsamle kindceller med en vatpind og isolere DNA og teste for CYP4F2*1 og CYP4F2*3 allelerne.

Genotypebestemmelse: CYP4F2-genotype vil blive bestemt ved et valideret TaqMan-assay (ABI/ThermoFisher Scientific), ved hjælp af kommercielt tilgængelige DNA-hybridiseringsprober til at teste for fravær eller tilstedeværelse af CYP4F2*3-allelen. Forsøgspersoner, der enten er en homozygot CYP4F2*3-genotype eller en heterozygot CYP4F2*1/*3-genotype, og CYP4F2*3-alleler vil være kvalificerede til fase II.

Procedurer - Fase II, K-vitamintilskud.

Vitamin K-tilskud: Forskningsdeltagere udvalgt til tilskudsstudiet baseret på CYP4F2-genotype vil blive givet 1 mg/dag phylloquinon (Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone) i 10 på hinanden følgende dage. Hver dosis tages om morgenen (~ kl. 8) med en halv pint 2% mælk for at lette optagelsen.

Prøvetagning: Til tilskudsundersøgelsen vil en venøs blodprøve (10 mL EDTA-rør) og en pleturinprøve blive indsamlet efter en faste natten over fra d1 til og med d5 og på d8 og d10 af vitamin K-tilskud i 10 dage. Plasma vil blive isoleret, og begge prøver vil blive opbevaret ved -70°C indtil analyse. Kvinder i den fødedygtige alder vil have en uringraviditetstest på d1, og hvis den er positiv, vil den blive trukket tilbage fra undersøgelsen, og alle prøver og data vil blive destrueret.

Måling af plasmafaktor II-proteoformer: Plasmakoncentrationen af ​​de 11 individuelle proteoformer af faktor II vil blive målt ved LC-MS/MS. Disse data vil blive brugt til at beregne tre metrics for langsigtet vitamin K-status, unFII, ucFII:iFII og inFII:aFII. Disse repræsenterer forskellige matematiske mål for graden af ​​faktor II-undercarboxylering. Prospektiv analyse af plasma-vitamin K1, PIVKA II og ucOC er ikke planlagt, men vil blive holdt i reserve, hvis behovet for disse data opstår.

Måling af urin K-syre I og II: Kvantificering af K-syre I og II og kreatinin (Cr) i pleturinprøver vil blive udført ved hjælp af et valideret LC-MS/MS-assay, som efterforskerne for nylig har udviklet. Det samlede og individuelle urin K-syre/Cr-forhold vil blive beregnet.

Statistisk analyseplan: Forskerne vil udføre en uparret t-test for at sammenligne den gennemsnitlige respons på vitamin K-tilskud i de to CYP4F2-genotypegrupper. Respons er defineret som arealet under vitamin K-statusværdien x tidskurven, korrigeret for baseline, for den 10-dages interventionsperiode. En sekundær metrik vil være den absolutte topændring i vitamin K-statusforholdet. Både korte (urin K-syre/Cr-forhold) og langsigtede (ucFII:iFII og inFII:aFII) biomarkører testes separat. Baseret på pilotdata vil en prøvestørrelse på 14 i hver genotypegruppe give en styrke på mindst 80 % til at detektere en signifikant effekt på signifikans 0,05-niveauet, når der er en dobbelt forskel i responsen på tilskud.