Studie suplementace vitaminem K u zdravých dobrovolníků (cíl 2B)

Výzkumníci budou studovat vliv suplementace vitaminu K na dva biomarkery koncentrace vitaminu K v játrech ve skupinách s definovaným genotypem CYP4F2*3. Konkrétně budou vyšetřovatelé testovat souvislost mezi našimi novými biomarkery dlouhodobé (plazmatické proteoformy Faktoru II) a krátkodobé (močové katabolity K-kyselin) jaterní koncentrace vitaminu K a CYP4F2*3 po 10denním období vitaminu Suplementace K u zdravých dobrovolníků.

Vyšetřovatelé naberou prostřednictvím inzerátů na UWMC zdravé dobrovolníky mužů a žen. Bude použit dvoustupňový výběrový proces. Subjekty si sami vyberou odpověďmi na letáky a kontaktují koordinátora výzkumu. Koordinátor výzkumu je po telefonu prověří, zda jsou způsobilí, a pokud jsou způsobilí, domluví si schůzku na první studijní návštěvu. V první fázi odebere koordinátor výzkumu bukální výtěr DNA od ~ 200 způsobilých kandidátů; DNA bude testována na nepřítomnost nebo přítomnost variantní alely CYP4F2*3. PI a koordinátor výzkumu posoudí výsledky genotypizace a poté vybere 14 jedinců s homozygotním genotypem CYP4F2*3 nebo heterozygotním genotypem CYP4F2*1/*3 a demograficky odpovídající skupinu 14 osob s homozygotním genotypem CYP4F2*1 v diagnostické místo pro suplementační fázi studie. Koordinátor studie pak tyto subjekty telefonicky kontaktuje pro účast ve fázi II.

Postupy - Fáze I, odběr bukálních výtěrů pro izolaci DNA.

Demografický dotazník: Prostřednictvím stručného demografického dotazníku budou shromážděny údaje o dědictví, věku a pohlaví, které si sami uvedli.

Bukální výtěr: Bavlněným tamponem odebereme lícní buňky a izolujeme DNA a otestujeme na alely CYP4F2*1 a CYP4F2*3.

Genotypizace: Genotyp CYP4F2 bude určen validovaným testem TaqMan (ABI/ThermoFisher Scientific) za použití komerčně dostupných hybridizačních sond DNA k testování nepřítomnosti nebo přítomnosti alely CYP4F2*3. Subjekty, které jsou buď homozygotním genotypem CYP4F2*3 nebo heterozygotním genotypem CYP4F2*1/*3 a alely CYP4F2*3, budou způsobilé pro fázi II.

Procedury - Fáze II, Suplementace vitaminu K.

Suplementace vitaminu K: Účastníci výzkumu vybraní pro studii suplementace na základě genotypu CYP4F2 budou dostávat 1 mg/den fylochinonu (Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone) po dobu 10 po sobě jdoucích dnů. Každá dávka se užije ráno (~ 8:00) s půl litrem 2% mléka pro usnadnění vstřebávání.

Odběr vzorku: Pro studii suplementace se po celonočním hladovění od d1 do d5 a v 8. a d10 suplementace vitaminem K po dobu 10 dnů odebere vzorek venózní krve (10 ml zkumavka s EDTA) a vzorek moči. Plazma bude izolována a oba vzorky budou skladovány při -70 °C až do analýzy. Ženy ve fertilním věku budou mít těhotenský test v moči d1, a pokud bude pozitivní, budou ze studie vyřazeny a všechny vzorky a data budou zničeny.

Měření plazmatických proteoforem faktoru II: Plazmatická koncentrace 11 jednotlivých proteoforem faktoru II bude měřena pomocí LC-MS/MS. Tato data budou použita k výpočtu tří metrik dlouhodobého stavu vitaminu K, unFII, ucFII:iFII a inFII:aFII. Ty představují různé matematické míry stupně podkarboxylace faktoru II. Prospektivní analýza plazmatického vitaminu K1, PIVKA II a ucOC není plánována, ale bude uložena v rezervě pro případ potřeby těchto údajů.

Měření K-kyseliny I a II v moči: Kvantifikace K-kyseliny I a II a kreatininu (Cr) ve vzorcích spotové moči bude prováděna pomocí validovaného testu LC-MS/MS, který výzkumníci nedávno vyvinuli. Bude vypočítán celkový a individuální poměr K-kyselina/Cr v moči.

Plán statistické analýzy: Výzkumníci provedou nepárový t-test, aby porovnali průměrnou odpověď na suplementaci vitaminu K ve dvou skupinách genotypu CYP4F2. Odpověď je definována jako plocha pod křivkou stavu vitaminu K x čas, korigovaná na výchozí hodnotu, pro 10denní intervenční období. Sekundární metrikou bude absolutní vrcholová změna poměru stavu vitaminu K. Jak krátkodobé (poměr K-Acid/Cr v moči), tak dlouhodobé (ucFII:iFII a inFII:aFII) biomarkery budou testovány samostatně. Na základě pilotních dat bude velikost vzorku 14 v každé genotypové skupině poskytovat sílu alespoň 80 % k detekci významného účinku na hladině významnosti 0,05, kdy existuje dvojnásobný rozdíl v odpovědi na suplementaci.