Vitamin K-tilskuddsstudie hos friske frivillige (Mål 2B)

Forskerne vil studere effekten av vitamin K-tilskudd på to biomarkører for vitamin K-konsentrasjon i leveren i grupper med definert CYP4F2*3 genotype. Spesifikt vil etterforskerne teste for en assosiasjon mellom våre nye biomarkører av langsiktige (plasmafaktor II-proteoformer) og kortsiktige (urinary K-syrekatabolitter) vitamin K-konsentrasjon i leveren og CYP4F2*3 etter en 10-dagers periode med vitamin. K-tilskudd hos friske frivillige.

Etterforskerne vil rekruttere, ved publiserte annonser på UWMC, friske mannlige og kvinnelige frivillige. En to-trinns utvelgelsesprosess vil bli brukt. Emner vil selv velge ved å svare på flyers, og kontakte forskningskoordinatoren. Forskningskoordinatoren vil undersøke dem for kvalifisering over telefon, og hvis de er kvalifisert, avtaler det første studiebesøket. For den første fasen vil forskningskoordinatoren samle inn en bukkal vattpinne med DNA fra ~200 kvalifiserte kandidater; DNAet vil bli testet for fravær eller tilstedeværelse av CYP4F2*3-variantallelen. PI og forskningskoordinator vil gjennomgå genotypingsresultatene og deretter velge 14 individer med enten en homozygot CYP4F2*3 genotype eller en heterozygot CYP4F2*1/*3 genotype, og en demografisk matchet gruppe på 14 med en homozygot CYP4F2*1 genotype på diagnostisk lokus for tilskuddsfasen av studien. Studiekoordinatoren vil da kontakte disse fagene på telefon for fase II-deltakelse.

Prosedyrer - Fase I, bukkal vattpinneinnsamling for DNA-isolering.

Demografisk spørreskjema: Selvrapportert arv, alder og kjønn vil bli samlet inn gjennom et kort demografisk spørreskjema.

Buccal vattpinne: Vi samler inn kinnceller med en bomullspinne og isolerer DNA og tester for CYP4F2*1 og CYP4F2*3 allelene.

Genotyping: CYP4F2-genotype vil bli bestemt ved en validert TaqMan-analyse (ABI/ThermoFisher Scientific), ved bruk av kommersielt tilgjengelige DNA-hybridiseringsprober for å teste for fravær eller tilstedeværelse av CYP4F2*3-allelen. Personer som enten er en homozygot CYP4F2*3 genotype eller en heterozygot CYP4F2*1/*3 genotype, og CYP4F2*3 alleler vil være kvalifisert for fase II.

Prosedyrer - Fase II, Vitamin K-tilskudd.

Vitamin K-tilskudd: Forskningsdeltakere valgt ut for tilskuddsstudien basert på CYP4F2-genotype vil få 1 mg/dag fyllokinon (Vitacost; Natures Life K-1 fyllokinon) i 10 påfølgende dager. Hver dose tas om morgenen (~ 08.00), med en halv halvliter 2 % melk for å lette absorpsjonen.

Prøvetaking: For tilskuddsstudien vil en venøs blodprøve (10 mL EDTA-rør) og en punkturinprøve tas etter en faste over natten fra d1 til og med d5 og på d8 og d10 av vitamin K-tilskudd i 10 dager. Plasma vil bli isolert og begge prøvene vil bli lagret ved -70°C frem til analyse. Kvinner i fertil alder vil ha en uringraviditetstest på d1, og hvis den er positiv, vil den bli trukket fra studien, og alle prøver og data vil bli ødelagt.

Måling av plasmafaktor II-proteoformer: Plasmakonsentrasjonen av de 11 individuelle proteoformene av faktor II vil bli målt ved LC-MS/MS. Disse dataene vil bli brukt til å beregne tre beregninger for langsiktig vitamin K-status, unFII, ucFII:iFII og inFII:aFII. Disse representerer forskjellige matematiske mål på graden av faktor II-underkarboksylering. Prospektiv analyse av plasma vitamin K1, PIVKA II og ucOC er ikke planlagt, men vil bli holdt i reserve dersom det skulle oppstå behov for disse dataene.

Måling av urin K-syre I og II: Kvantifisering av K-syre I og II, og kreatinin (Cr) i punkturinprøver vil bli utført ved bruk av en validert LC-MS/MS-analyse som etterforskerne nylig har utviklet. Totalt og individuelt urin K-syre/Cr-forhold vil bli beregnet.

Statistisk analyseplan: Forskerne vil gjennomføre en uparet t-test for å sammenligne gjennomsnittlig respons på vitamin K-tilskudd i de to CYP4F2-genotypegruppene. Respons er definert som området under vitamin K-statusverdien x tidskurven, korrigert for baseline, for den 10-dagers intervensjonsperioden. En sekundær metrikk vil være den absolutte toppendring i vitamin K-statusforholdet. Både korte (urin K-syre/Cr-forhold) og langsiktige (ucFII:iFII og inFII:aFII) biomarkører vil testes separat. Basert på pilotdata vil en prøvestørrelse på 14 i hver genotypegruppe gi en kraft på minst 80 % til å oppdage en signifikant effekt på signifikans 0,05-nivå, når det er en to ganger forskjell i responsen på tilskudd.