K-vitamin-kiegészítési vizsgálat egészséges önkénteseknél (2B. cél)

A kutatók a K-vitamin-pótlás hatását vizsgálják a máj K-vitamin-koncentrációjának két biomarkerére meghatározott CYP4F2*3 genotípusú csoportokban. Pontosabban, a kutatók azt vizsgálják, hogy van-e összefüggés a hosszú távú (plazma II-es faktor proteoformái) és a rövid távú (vizeletben lévő K-sav katabolitok) máj K-vitamin-koncentrációja és a CYP4F2*3 között 10 napos vitaminkezelést követően. K-kiegészítés egészséges önkéntesekben.

A nyomozók az UWMC-nél feladott hirdetésekkel toboroznak egészséges férfi és női önkénteseket. Kétlépcsős kiválasztási eljárást alkalmaznak. Az alanyok maguk választanak ki szórólapokra válaszolva, és kapcsolatba lépnek a kutatási koordinátorral. A kutatási koordinátor telefonon átvizsgálja őket a jogosultság szempontjából, és ha jogosult, időpontot egyeztet az első tanulmányútra. Az első szakaszban a kutatási koordinátor körülbelül 200 alkalmas jelölt szájüregi DNS-mintáját gyűjti össze; a DNS-t teszteljük a CYP4F2*3 variáns allél hiányára vagy jelenlétére. A PI és a kutatási koordinátor felülvizsgálja a genotipizálási eredményeket, majd kiválaszt 14 egyedet vagy homozigóta CYP4F2*3 genotípussal vagy heterozigóta CYP4F2*1/*3 genotípussal, valamint egy demográfiailag egyező 14 fős csoportot homozigóta CYP4F2*1 genotípussal. diagnosztikai lókusz a vizsgálat kiegészítési szakaszához. A vizsgálati koordinátor ezután telefonon felveszi a kapcsolatot ezekkel az alanyokkal a II. fázisban való részvétel érdekében.

Eljárások – I. fázis, Bukkális tampon gyűjtése DNS izolálásához.

Demográfiai kérdőív: Az önbevallott örökség, életkor és nem egy rövid demográfiai kérdőív segítségével kerül összegyűjtésre.

Bukkális tampon: pamut törlővel összegyűjtjük az arc sejtjeit, és DNS-t izolálunk, és megvizsgáljuk a CYP4F2*1 és CYP4F2*3 allélokat.

Genotipizálás: A CYP4F2 genotípust validált TaqMan teszttel (ABI/ThermoFisher Scientific) határozzuk meg, a kereskedelemben kapható DNS-hibridizációs próbákkal a CYP4F2*3 allél hiányának vagy jelenlétének tesztelésére. Azok az alanyok, akik vagy homozigóta CYP4F2*3 genotípusúak, vagy heterozigóta CYP4F2*1/*3 genotípusúak és CYP4F2*3 allélok, jogosultak a II.

Eljárások - II. fázis, K-vitamin pótlás.

K-vitamin-kiegészítés: A CYP4F2 genotípuson alapuló kiegészítési vizsgálatba kiválasztott kutatók 1 mg/nap filokinont (Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone) kapnak 10 egymást követő napon. Minden adagot reggel (~ 8:00) kell bevenni, fél liter 2%-os tejjel a felszívódás megkönnyítése érdekében.

Mintavétel: A kiegészítő vizsgálathoz vénás vérmintát (10 ml-es EDTA-cső) és vizeletmintát veszünk egy éjszakai koplalás után d1-től d5-ig, valamint d8-án és d10-én 10 napig tartó K-vitamin-pótlás után. A plazmát elkülönítik, és mindkét mintát -70 °C-on tárolják az elemzésig. A fogamzóképes nőknél d1-es vizelet terhességi tesztet végeznek, és ha pozitív, akkor kivonják a vizsgálatból, és minden mintát és adatot megsemmisítenek.

A plazma II faktor proteoformáinak mérése: A II. faktor 11 egyedi proteoformájának plazmakoncentrációját LC-MS/MS módszerrel mérjük. Ezeket az adatokat a K-vitamin hosszú távú állapotának három mutatójának kiszámításához használjuk fel: unFII, ucFII:iFII és inFII:aFII. Ezek a II. faktor alulkarboxiláció mértékének különböző matematikai mérőszámai. A plazma K1-vitamin, a PIVKA II és az ucOC prospektív elemzését nem tervezik, de tartalékba fogják helyezni, ha szükség lenne ezekre az adatokra.

A vizelet K-sav I és II mérése: A K-sav I és II, valamint a kreatinin (Cr) mennyiségi meghatározását pontszerű vizeletmintákban a vizsgálók által nemrégiben kifejlesztett, validált LC-MS/MS assay segítségével végzik el. A rendszer kiszámítja a vizelet teljes és egyedi K-sav/Cr arányát.

Statisztikai elemzési terv: A kutatók páratlan t-tesztet végeznek, hogy összehasonlítsák a K-vitamin-pótlásra adott átlagos választ a két CYP4F2 genotípusú csoportban. A válaszreakciót a K-vitamin állapotérték x időgörbe alatti területként határozzuk meg, az alapvonalra korrigálva a 10 napos beavatkozási időszakra. Másodlagos mérőszám a K-vitamin állapotarány abszolút csúcsváltozása lesz. Mind a rövid (vizelet K-sav/Cr arány), mind a hosszú távú (ucFII:iFII és inFII:aFII) biomarkereket külön teszteljük. A kísérleti adatok alapján az egyes genotípus-csoportok 14-es mintája legalább 80%-os teljesítményt biztosít a szignifikáns hatás kimutatására a 0,05-ös szignifikancia szinten, ha kétszeres különbség van a kiegészítésre adott válaszban.