Studio sull'integrazione di vitamina K in volontari sani (Obiettivo 2B)

I ricercatori studieranno l'effetto dell'integrazione di vitamina K su due biomarcatori della concentrazione epatica di vitamina K in gruppi con genotipo CYP4F2*3 definito. In particolare, i ricercatori testeranno un'associazione tra i nostri nuovi biomarcatori di concentrazione di vitamina K epatica a lungo termine (proteoforme del fattore II plasmatico) e a breve termine (cataboliti dell'acido K urinario) e CYP4F2*3 dopo un periodo di 10 giorni di vitamina Integrazione di K in volontari sani.

Gli investigatori recluteranno, mediante annunci pubblicati presso l'UWMC, volontari sani maschi e femmine. Sarà impiegato un processo di selezione in due fasi. I soggetti autoselezionano rispondendo ai volantini e contattano il coordinatore della ricerca. Il coordinatore della ricerca li esaminerà telefonicamente per l'idoneità e, se idonei, fisserà un appuntamento per la prima visita di studio. Per la prima fase, il coordinatore della ricerca raccoglierà un tampone buccale di DNA da ~ 200 candidati idonei; il DNA sarà testato per l'assenza o la presenza dell'allele variante CYP4F2*3. Il PI e il coordinatore della ricerca esamineranno i risultati della genotipizzazione e quindi selezioneranno 14 individui con un genotipo omozigote CYP4F2*3 o un genotipo eterozigote CYP4F2*1/*3 e un gruppo demograficamente abbinato di 14 con un genotipo omozigote CYP4F2*1 al locus diagnostico per la fase di integrazione dello studio. Il coordinatore dello studio contatterà quindi questi soggetti per telefono per la partecipazione alla Fase II.

Procedure - Fase I, Raccolta del tampone buccale per l'isolamento del DNA.

Questionario demografico: il patrimonio, l'età e il sesso autodichiarati saranno raccolti attraverso un breve questionario demografico.

Tampone buccale: raccoglieremo le cellule della guancia con un batuffolo di cotone, isoleremo il DNA e testeremo gli alleli CYP4F2*1 e CYP4F2*3.

Genotipizzazione: il genotipo CYP4F2 sarà determinato mediante un test TaqMan convalidato (ABI/ThermoFisher Scientific), utilizzando sonde di ibridazione del DNA disponibili in commercio per testare l'assenza o la presenza dell'allele CYP4F2*3. I soggetti che sono un genotipo omozigote CYP4F2*3 o un genotipo eterozigote CYP4F2*1/*3 e alleli CYP4F2*3 saranno idonei per la Fase II.

Procedure - Fase II, supplementazione di vitamina K.

Integrazione di vitamina K: i partecipanti alla ricerca selezionati per lo studio di integrazione basato sul genotipo CYP4F2 riceveranno 1 mg/giorno di fillochinone (Vitacost; Natures Life K-1 fillochinone) per 10 giorni consecutivi. Ogni dose sarà assunta al mattino (~ 8 am), con mezzo litro di latte al 2% per facilitarne l'assorbimento.

Raccolta dei campioni: per lo studio sull'integrazione, verranno raccolti un campione di sangue venoso (provetta da 10 ml di EDTA) e un campione di urina spot dopo un digiuno notturno dal giorno 1 al giorno 5 e il giorno 8 e il giorno 10 dell'integrazione di vitamina K per 10 giorni. Il plasma sarà isolato ed entrambi i campioni saranno conservati a -70°C fino al momento dell'analisi. Le donne in età fertile avranno un test di gravidanza sulle urine di d1 e, se positive, saranno ritirate dallo studio e tutti i campioni e i dati verranno distrutti.

Misurazione delle proteoforme plasmatiche del fattore II: la concentrazione plasmatica delle 11 singole proteoforme del fattore II sarà misurata mediante LC-MS/MS. Questi dati verranno utilizzati per calcolare tre metriche dello stato di vitamina K a lungo termine, unFII, ucFII:iFII e inFII:aFII. Questi rappresentano diverse misure matematiche del grado di sottocarbossilazione del Fattore II. L'analisi prospettica della vitamina K1 plasmatica, PIVKA II e ucOC non è pianificata, ma sarà tenuta di riserva in caso di necessità di tali dati.

Misurazione dell'acido K urinario I e II: Verrà eseguita la quantificazione dell'acido K I e II e della creatinina (Cr) in campioni di urina spot, utilizzando un test LC-MS / MS convalidato che i ricercatori hanno recentemente sviluppato. Verrà calcolato il rapporto K-Acid/Cr urinario totale e individuale.

Piano di analisi statistica: i ricercatori condurranno un test t non appaiato per confrontare la risposta media all'integrazione di vitamina K nei due gruppi di genotipo CYP4F2. La risposta è definita come l'area sotto il valore dello stato della vitamina K x la curva del tempo, corretta per il basale, per il periodo di intervento di 10 giorni. Una metrica secondaria sarà la variazione di picco assoluta nel rapporto dello stato della vitamina K. Entrambi i biomarcatori a breve (rapporto K-Acid/Cr urinario) ea lungo termine (ucFII:iFII e inFII:aFII) saranno testati separatamente. Sulla base dei dati pilota, una dimensione del campione di 14 in ciascun gruppo genotipico fornirà una potenza di almeno l'80% per rilevare un effetto significativo al livello di significatività 0,05, quando c'è una differenza doppia nella risposta all'integrazione.