Исследование пищевых добавок с витамином К у здоровых добровольцев (цель 2B)

Исследователи изучат влияние добавок витамина К на два биомаркера концентрации витамина К в печени в группах с определенным генотипом CYP4F2*3. В частности, исследователи будут проверять связь между нашими новыми биомаркерами долговременной (протеоформы фактора II в плазме) и краткосрочной (катаболиты K-кислот в моче) концентрации витамина K в печени и CYP4F2*3 после 10-дневного периода приема витамина Добавка K у здоровых добровольцев.

Исследователи будут набирать, размещая объявления в UWMC, здоровых добровольцев мужского и женского пола. Будет использоваться двухэтапный процесс отбора. Субъекты будут самостоятельно выбирать, отвечая на листовки, и свяжутся с координатором исследования. Координатор исследования по телефону проверит их на предмет соответствия требованиям и, если они соответствуют требованиям, назначит встречу для первого ознакомительного визита. На первом этапе координатор исследований соберет буккальные мазки ДНК примерно у 200 подходящих кандидатов; ДНК будет проверена на отсутствие или присутствие вариантного аллеля CYP4F2*3. PI и координатор исследований рассмотрят результаты генотипирования, а затем отберут 14 человек либо с гомозиготным генотипом CYP4F2*3, либо с гетерозиготным генотипом CYP4F2*1/*3, а также демографически совпадающую группу из 14 человек с гомозиготным генотипом CYP4F2*1. диагностический локус для дополнительной фазы исследования. Затем координатор исследования свяжется с этими субъектами по телефону для участия в Фазе II.

Процедуры – этап I, взятие буккального мазка для выделения ДНК.

Демографический вопросник: сведения о происхождении, возрасте и поле, о которых сообщают сами участники, будут собраны с помощью краткого демографического вопросника.

Буккальный мазок: мы соберем щечные клетки ватным тампоном, выделим ДНК и проверим на наличие аллелей CYP4F2*1 и CYP4F2*3.

Генотипирование: генотип CYP4F2 будет определяться с помощью валидированного анализа TaqMan (ABI/ThermoFisher Scientific) с использованием коммерчески доступных ДНК-гибридизационных зондов для проверки наличия или отсутствия аллеля CYP4F2*3. Субъекты с гомозиготным генотипом CYP4F2*3 или гетерозиготным генотипом CYP4F2*1/*3 и аллелями CYP4F2*3 будут иметь право на участие в Фазе II.

Процедуры - фаза II, добавка витамина К.

Добавка витамина К: участники исследования, отобранные для исследования добавок на основе генотипа CYP4F2, будут получать 1 мг/день филлохинона (Vitacost; Natures Life K-1 филлохинон) в течение 10 дней подряд. Каждая доза будет приниматься утром (~ 8 утра) с половиной пинты 2% молока для облегчения всасывания.

Сбор образцов: для исследования добавок образец венозной крови (10 мл пробирка с ЭДТА) и образец мочи будут собраны после ночного голодания с 1 по 5 день, а также в дни 8 и 10 приема витамина К в течение 10 дней. Плазма будет выделена, и оба образца будут храниться при -70°C до проведения анализа. Женщинам с детородным потенциалом будет сделан тест мочи на беременность d1, и в случае положительного результата они будут исключены из исследования, а все образцы и данные будут уничтожены.

Измерение протеоформ фактора II в плазме: Концентрацию 11 отдельных протеоформ фактора II в плазме измеряют с помощью ЖХ-МС/МС. Эти данные будут использоваться для расчета трех показателей долгосрочного статуса витамина К, unFII, ucFII:iFII и inFII:aFII. Они представляют собой различные математические меры степени недокарбоксилирования фактора II. Проспективный анализ содержания витамина К1 в плазме, PIVKA II и ucOC не планируется, но будет проведен в резерве, если возникнет необходимость в этих данных.

Измерение K-кислоты I и II в моче: Количественное определение K-кислоты I и II и креатинина (Cr) в разовых образцах мочи будет выполняться с использованием утвержденного анализа LC-MS/MS, недавно разработанного исследователями. Будет рассчитано общее и индивидуальное соотношение K-кислот/Cr в моче.

План статистического анализа: Исследователи проведут непарный t-критерий, чтобы сравнить средний ответ на добавку витамина К в группах с двумя генотипами CYP4F2. Ответ определяется как площадь под кривой значения статуса витамина К, умноженной на время, с поправкой на исходный уровень для 10-дневного периода вмешательства. Вторичным показателем будет абсолютное пиковое изменение соотношения статуса витамина К. Как краткосрочные (соотношение K-кислоты в моче/Cr), так и долгосрочные (ucFII:iFII и inFII:aFII) биомаркеры будут тестироваться отдельно. Основываясь на пилотных данных, размер выборки из 14 человек в каждой группе генотипа обеспечит мощность не менее 80% для обнаружения значительного эффекта на уровне значимости 0,05, когда существует двукратная разница в реакции на добавки.