Badanie suplementacji witaminy K u zdrowych ochotników (Cel 2B)

Badacze będą badać wpływ suplementacji witaminy K na dwa biomarkery stężenia witaminy K w wątrobie w grupach ze zdefiniowanym genotypem CYP4F2*3. W szczególności badacze przetestują związek między naszymi nowymi biomarkerami długoterminowego (proteoformy czynnika II w osoczu) i krótkoterminowego (katabolity kwasu K w moczu) wątrobowego stężenia witaminy K i CYP4F2*3 po 10-dniowym okresie przyjmowania witaminy Suplementacja K u zdrowych ochotników.

Badacze będą rekrutować zdrowych ochotników płci męskiej i żeńskiej, umieszczając ogłoszenia w UWMC. Zastosowany zostanie dwuetapowy proces selekcji. Badani sami dokonają wyboru, odpowiadając na ulotki i kontaktując się z koordynatorem badań. Koordynator badania przeprowadzi ich telefoniczną weryfikację pod kątem kwalifikowalności i jeśli się zakwalifikuje, umówi się na pierwszą wizytę studyjną. W pierwszej fazie koordynator badań pobierze wymaz DNA z jamy ustnej od ~ 200 kwalifikujących się kandydatów; DNA zostanie przetestowane pod kątem nieobecności lub obecności wariantu allelu CYP4F2*3. PI i Koordynator ds. Badań dokona przeglądu wyników genotypowania, a następnie wybierze 14 osób z homozygotycznym genotypem CYP4F2*3 lub heterozygotycznym genotypem CYP4F2*1/*3 oraz dopasowaną demograficznie grupę 14 osób z homozygotycznym genotypem CYP4F2*1 na locus diagnostycznym dla fazy suplementacji badania. Koordynator badania skontaktuje się następnie telefonicznie z tymi osobami w sprawie udziału w fazie II.

Procedury — faza I, pobieranie wymazu z jamy ustnej w celu izolacji DNA.

Kwestionariusz demograficzny: Pochodzenie, wiek i płeć zgłaszane przez samych siebie zostaną zebrane za pomocą krótkiego kwestionariusza demograficznego.

Wymaz z policzka: Za pomocą wacika pobierzemy komórki policzkowe, wyizolujemy DNA i przetestujemy allele CYP4F2*1 i CYP4F2*3.

Genotypowanie: genotyp CYP4F2 zostanie określony za pomocą zwalidowanego testu TaqMan (ABI/ThermoFisher Scientific), przy użyciu dostępnych w handlu sond do hybrydyzacji DNA w celu sprawdzenia braku lub obecności allelu CYP4F2*3. Osoby z genotypem homozygotycznym CYP4F2*3 lub heterozygotycznym genotypem CYP4F2*1/*3 i allelami CYP4F2*3 będą kwalifikować się do fazy II.

Zabiegi - Faza II, Suplementacja witaminy K.

Suplementacja witaminy K: Uczestnicy badania wybrani do badania suplementacji w oparciu o genotyp CYP4F2 otrzymają filochinon w dawce 1 mg dziennie (Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone) przez 10 kolejnych dni. Każda dawka zostanie przyjęta rano (około 8 rano), z pół litra 2% mleka, aby ułatwić wchłanianie.

Pobieranie próbek: Do badania nad suplementacją, próbka krwi żylnej (probówka 10 ml EDTA) i próbka moczu zostaną pobrane po nocnym poście od d1 do d5 oraz w dniach 8 i 10 suplementacji witaminy K przez 10 dni. Osocze zostanie wyizolowane, a obie próbki będą przechowywane w temperaturze -70°C do czasu analizy. Kobiety w wieku rozrodczym będą miały test ciążowy z moczu d1 i jeśli wynik będzie pozytywny, zostaną wycofane z badania, a wszystkie próbki i dane zostaną zniszczone.

Pomiar proteoform czynnika II w osoczu: Stężenie w osoczu 11 indywidualnych proteoform czynnika II będzie mierzone metodą LC-MS/MS. Dane te zostaną wykorzystane do obliczenia trzech wskaźników długoterminowego stanu witaminy K, unFII, ucFII:iFII i inFII:aFII. Reprezentują one różne matematyczne miary stopnia niedokarboksylacji czynnika II. Prospektywna analiza stężenia witaminy K1, PIVKA II i ucOC w osoczu nie jest planowana, ale zostanie zachowana, jeśli zajdzie taka potrzeba.

Pomiar K-kwasu I i II w moczu: Oznaczenie ilościowe K-kwasu I i II oraz kreatyniny (Cr) w pojedynczych próbkach moczu zostanie przeprowadzone przy użyciu zwalidowanego testu LC-MS/MS, który niedawno opracowali badacze. Obliczony zostanie całkowity i indywidualny stosunek kwasu K/Cr w moczu.

Plan analizy statystycznej: Badacze przeprowadzą niesparowany test t, aby porównać średnią odpowiedź na suplementację witaminy K w dwóch grupach genotypowych CYP4F2. Odpowiedź definiuje się jako pole pod krzywą wartości stanu witaminy K x czas, skorygowaną względem wartości wyjściowej, dla 10-dniowego okresu interwencji. Drugorzędną miarą będzie bezwzględna szczytowa zmiana stosunku statusu witaminy K. Zarówno biomarkery krótkoterminowe (stosunek K-kwas/Cr w moczu), jak i długoterminowe (ucFII:iFII i inFII:aFII) będą testowane oddzielnie. Na podstawie danych pilotażowych wielkość próby 14 w każdej grupie genotypowej zapewni moc co najmniej 80% do wykrycia istotnego efektu na poziomie istotności 0,05, gdy występuje dwukrotna różnica w odpowiedzi na suplementację.