Studie av vitamin K-tillskott hos friska frivilliga (Mål 2B)

Utredarna kommer att studera effekten av vitamin K-tillskott på två biomarkörer för leverns vitamin K-koncentration i grupper med definierad CYP4F2*3 genotyp. Specifikt kommer utredarna att testa för ett samband mellan våra nya biomarkörer av långvariga (plasmafaktor II-proteoformer) och kortsiktiga (urinära K-syrakataboliter) levervitamin K-koncentration och CYP4F2*3 efter en 10-dagarsperiod av vitamin K-tillskott hos friska frivilliga.

Utredarna kommer att rekrytera, genom publicerade annonser på UWMC, friska manliga och kvinnliga frivilliga. En urvalsprocess i två steg kommer att användas. Ämnen kommer att välja själv genom att svara på flygblad och kontakta forskningssamordnaren. Forskningskoordinatorn kommer att undersöka dem för behörighet via telefon och om de är behöriga, boka tid för det första studiebesöket. För den första fasen kommer forskningssamordnaren att samla in en buckal svabb av DNA från ~ 200 kvalificerade kandidater; DNA:t kommer att testas för frånvaro eller närvaro av CYP4F2*3-variantallelen. PI och forskningskoordinatorn kommer att granska genotypningsresultaten och sedan välja ut 14 individer med antingen en homozygot CYP4F2*3 genotyp eller en heterozygot CYP4F2*1/*3 genotyp, och en demografiskt matchad grupp av 14 med en homozygot CYP4F2*1 genotyp vid diagnostiskt läge för tilläggsfasen av studien. Studiekoordinatorn kommer sedan att kontakta dessa personer per telefon för deltagande i fas II.

Procedurer - Fas I, buckal pinnprovning för DNA-isolering.

Demografiskt frågeformulär: Självrapporterat arv, ålder och kön kommer att samlas in genom ett kort demografiskt frågeformulär.

Buccal swab: Vi kommer att samla in kindceller med en bomullspinne och isolera DNA och testa för CYP4F2*1 och CYP4F2*3 alleler.

Genotypning: CYP4F2-genotyp kommer att bestämmas med en validerad TaqMan-analys (ABI/ThermoFisher Scientific), med användning av kommersiellt tillgängliga DNA-hybridiseringsprober för att testa för frånvaro eller närvaro av CYP4F2*3-allelen. Försökspersoner som antingen är en homozygot CYP4F2*3-genotyp eller en heterozygot CYP4F2*1/*3-genotyp och CYP4F2*3-alleler kommer att vara berättigade till fas II.

Procedurer - Fas II, Vitamin K-tillskott.

Vitamin K-tillskott: Forskningsdeltagare som väljs ut för tilläggsstudien baserad på genotypen CYP4F2 kommer att ges 1 mg/dag fyllokinon (Vitacost; Natures Life K-1 fyllokinon) under 10 dagar i följd. Varje dos tas på morgonen (~ 8 på morgonen), med en halv pint 2% mjölk för att underlätta absorptionen.

Provtagning: För tilläggsstudien kommer ett venöst blodprov (10 mL EDTA-rör) och ett punkturinprov att samlas in efter en fasta över natten från d1 till d5 och på d8 och d10 av vitamin K-tillskott i 10 dagar. Plasma kommer att isoleras och båda proverna kommer att förvaras vid -70°C fram till analys. Kvinnor i fertil ålder kommer att ha ett uringraviditetstest på d1 och om det är positivt, kommer de att dras tillbaka från studien och alla prover och data kommer att förstöras.

Mätning av plasmafaktor II-proteoformer: Plasmakoncentrationen av de 11 individuella proteoformerna av faktor II kommer att mätas med LC-MS/MS. Dessa data kommer att användas för att beräkna tre mått för långsiktig vitamin K-status, unFII, ucFII:iFII och inFII:aFII. Dessa representerar olika matematiska mått på graden av faktor II-underkarboxylering. Prospektiv analys av plasmavitamin K1, PIVKA II och ucOC är inte planerad, men kommer att hållas i reserv om behov av dessa data skulle uppstå.

Mätning av K-syra I och II i urin: Kvantifiering av K-syra I och II och kreatinin (Cr) i punkturinprover kommer att utföras med hjälp av en validerad LC-MS/MS-analys som utredarna nyligen har utvecklat. Det totala och individuella K-syra/Cr-förhållandet i urinen kommer att beräknas.

Statistisk analysplan: Utredarna kommer att genomföra ett oparat t-test för att jämföra medelsvaret på vitamin K-tillskott i de två genotypgrupperna CYP4F2. Respons definieras som arean under vitamin K-statusvärdet x tidskurvan, korrigerad för baslinje, för den 10-dagars interventionsperioden. Ett sekundärt mått kommer att vara den absoluta toppändringen i vitamin K-statusförhållandet. Både korta (urinary K-syra/Cr-förhållande) och långvariga (ucFII:iFII och inFII:aFII) biomarkörer kommer att testas separat. Baserat på pilotdata kommer en provstorlek på 14 i varje genotypgrupp att ge en styrka på minst 80 % för att upptäcka en signifikant effekt på signifikansnivån 0,05, när det finns en tvåfaldig skillnad i svaret på tillskott.