Étude sur la supplémentation en vitamine K chez des volontaires sains (Objectif 2B)

Les chercheurs étudieront l'effet de la supplémentation en vitamine K sur deux biomarqueurs de la concentration hépatique de vitamine K dans des groupes avec un génotype CYP4F2*3 défini. Plus précisément, les chercheurs testeront une association entre nos nouveaux biomarqueurs de la concentration hépatique en vitamine K à long terme (protéoformes du facteur II plasmatique) et à court terme (catabolites urinaires de l'acide K) et le CYP4F2 * 3 après une période de 10 jours de vitamine Supplémentation en K chez des volontaires sains.

Les enquêteurs recruteront, par des annonces affichées à l'UWMC, des volontaires sains masculins et féminins. Un processus de sélection en deux étapes sera utilisé. Les sujets s'auto-sélectionneront en répondant aux dépliants et contacteront le coordinateur de la recherche. Le coordinateur de la recherche les sélectionnera par téléphone pour leur éligibilité et, s'ils sont éligibles, prendra rendez-vous pour la première visite d'étude. Pour la première phase, le coordinateur de recherche prélèvera un prélèvement buccal d'ADN auprès de ~ 200 candidats éligibles ; l'ADN sera testé pour l'absence ou la présence de l'allèle variant CYP4F2*3. Le chercheur principal et le coordinateur de recherche examineront les résultats du génotypage, puis sélectionneront 14 individus avec un génotype homozygote CYP4F2*3 ou un génotype hétérozygote CYP4F2*1/*3, et un groupe de 14 individus appariés sur le plan démographique avec un génotype homozygote CYP4F2*1 au locus diagnostique pour la phase de supplémentation de l'étude. Le coordinateur de l'étude contactera ensuite ces sujets par téléphone pour la participation à la Phase II.

Procédures - Phase I, collecte d'écouvillons buccaux pour l'isolement de l'ADN.

Questionnaire démographique : L'héritage, l'âge et le sexe autodéclarés seront recueillis au moyen d'un bref questionnaire démographique.

Écouvillon buccal : Nous prélèverons des cellules de la joue avec un coton-tige et isolerons l'ADN et testerons les allèles CYP4F2*1 et CYP4F2*3.

Génotypage : le génotype CYP4F2 sera déterminé par un test TaqMan validé (ABI/ThermoFisher Scientific), en utilisant des sondes d'hybridation d'ADN disponibles dans le commerce pour tester l'absence ou la présence de l'allèle CYP4F2*3. Les sujets qui sont soit un génotype CYP4F2*3 homozygote, soit un génotype hétérozygote CYP4F2*1/*3, et les allèles CYP4F2*3 seront éligibles pour la phase II.

Procédures - Phase II, supplémentation en vitamine K.

Supplémentation en vitamine K : Les participants à la recherche sélectionnés pour l'étude de supplémentation basée sur le génotype CYP4F2 recevront 1 mg/jour de phylloquinone (Vitacost ; Natures Life K-1 Phylloquinone) pendant 10 jours consécutifs. Chaque dose sera prise le matin (~ 8 h), avec un demi-litre de lait 2 % pour faciliter l'absorption.

Prélèvement d'échantillon : Pour l'étude de supplémentation, un échantillon de sang veineux (tube EDTA de 10 mL) et un échantillon d'urine ponctuel seront prélevés après une nuit de jeûne du j1 au j5 et aux j8 et j10 d'une supplémentation en vitamine K pendant 10 jours. Le plasma sera isolé et les deux échantillons seront conservés à -70 °C jusqu'à l'analyse. Les femmes en âge de procréer subiront un test de grossesse urinaire de j1 et, si elles sont positives, seront retirées de l'étude, et tous les échantillons et données seront détruits.

Mesure des protéoformes plasmatiques du facteur II : La concentration plasmatique des 11 protéoformes individuelles du facteur II sera mesurée par LC-MS/MS. Ces données seront utilisées pour calculer trois mesures du statut en vitamine K à long terme, unFII, ucFII:iFII et inFII:aFII. Celles-ci représentent différentes mesures mathématiques du degré de sous-carboxylation du Facteur II. L'analyse prospective de la vitamine K1 plasmatique, du PIVKA II et de l'ucOC n'est pas prévue, mais sera tenue en réserve en cas de besoin.

Mesure de l'acide K urinaire I et II : la quantification de l'acide K I et II et de la créatinine (Cr) dans des échantillons d'urine ponctuels sera effectuée, à l'aide d'un test LC-MS/MS validé que les enquêteurs ont récemment développé. Le rapport K-acide/Cr urinaire total et individuel sera calculé.

Plan d'analyse statistique : les enquêteurs effectueront un test t non apparié pour comparer la réponse moyenne à la supplémentation en vitamine K dans les deux groupes de génotype CYP4F2. La réponse est définie comme l'aire sous la courbe valeur x temps du statut en vitamine K, corrigée pour la ligne de base, pour la période d'intervention de 10 jours. Une mesure secondaire sera la variation maximale absolue du rapport de statut en vitamine K. Les biomarqueurs à court (rapport acide K/Cr urinaire) et à long terme (ucFII:iFII et inFII:aFII) seront testés séparément. Sur la base des données pilotes, une taille d'échantillon de 14 dans chaque groupe de génotype fournira une puissance d'au moins 80 % pour détecter un effet significatif au niveau de signification de 0,05, lorsqu'il y a une double différence dans la réponse à la supplémentation.