Onderzoek naar vitamine K-suppletie bij gezonde vrijwilligers (doel 2B)

De onderzoekers zullen het effect bestuderen van vitamine K-suppletie op twee biomarkers van de vitamine K-concentratie in de lever in groepen met een gedefinieerd CYP4F2*3-genotype. Concreet zullen de onderzoekers testen op een associatie tussen onze nieuwe biomarkers van lange termijn (plasma Factor II proteoforms) en korte termijn (urine K-Acid katabolieten) hepatische vitamine K-concentratie en CYP4F2*3 na een 10-daagse periode van vitamine K-concentratie in de lever. K-suppletie bij gezonde vrijwilligers.

De onderzoekers zullen door middel van geplaatste advertenties bij UWMC mannelijke en vrouwelijke gezonde vrijwilligers rekruteren. Er zal een selectieproces in twee stappen worden toegepast. Onderwerpen selecteren zichzelf door op flyers te reageren en contact op te nemen met de onderzoekscoördinator. De onderzoekscoördinator screent ze telefonisch op geschiktheid en maakt, indien in aanmerking komend, een afspraak voor het eerste studiebezoek. Voor de eerste fase neemt de onderzoekscoördinator een buccaal uitstrijkje van DNA van ~ 200 in aanmerking komende kandidaten; het DNA zal worden getest op de afwezigheid of aanwezigheid van het CYP4F2*3-variant allel. De PI en onderzoekscoördinator zullen de genotyperingsresultaten beoordelen en vervolgens 14 individuen selecteren met ofwel een homozygoot CYP4F2*3-genotype of een heterozygoot CYP4F2*1/*3-genotype, en een demografisch overeenkomende groep van 14 met een homozygoot CYP4F2*1-genotype op het diagnostische locus voor de suppletiefase van de studie. De studiecoördinator neemt dan telefonisch contact op met deze proefpersonen voor Fase II deelname.

Procedures - Fase I, buccale uitstrijkjes voor DNA-isolatie.

Demografische vragenlijst: zelfgerapporteerde afkomst, leeftijd en geslacht worden verzameld via een korte demografische vragenlijst.

Buccaal uitstrijkje: we verzamelen wangcellen met een wattenstaafje en isoleren DNA en testen op de CYP4F2*1- en CYP4F2*3-allelen.

Genotypering: Het CYP4F2-genotype zal worden bepaald met een gevalideerde TaqMan-assay (ABI/ThermoFisher Scientific), waarbij gebruik wordt gemaakt van in de handel verkrijgbare DNA-hybridisatieprobes om te testen op de afwezigheid of aanwezigheid van het CYP4F2*3-allel. Proefpersonen die een homozygoot CYP4F2*3-genotype of een heterozygoot CYP4F2*1/*3-genotype en CYP4F2*3-allelen hebben, komen in aanmerking voor fase II.

Procedures - Fase II, vitamine K-suppletie.

Vitamine K-suppletie: onderzoeksdeelnemers die zijn geselecteerd voor de suppletiestudie op basis van het CYP4F2-genotype, krijgen gedurende 10 opeenvolgende dagen 1 mg fylloquinon (Vitacost; Natures Life K-1 Phylloquinone) per dag. Elke dosis wordt 's morgens (~ 8 uur 's ochtends) ingenomen met een halve liter melk van 2% om de opname te vergemakkelijken.

Monsterafname: Voor het suppletieonderzoek wordt een veneus bloedmonster (10 ml EDTA-buisje) en een spot-urinemonster verzameld na een nacht vasten van d1 tot en met d5 en op d8 en d10 van vitamine K-suppletie gedurende 10 dagen. Het plasma wordt geïsoleerd en beide monsters worden tot analyse bij -70°C bewaard. Vrouwen in de vruchtbare leeftijd zullen een urine-zwangerschapstest van d1 ondergaan en als ze positief zijn, worden ze uit het onderzoek teruggetrokken en worden alle monsters en gegevens vernietigd.

Meting van plasmafactor II-proteovormen: De plasmaconcentratie van de 11 individuele proteovormen van factor II zal worden gemeten met LC-MS/MS. Deze gegevens zullen worden gebruikt om drie statistieken van de vitamine K-status op de lange termijn te berekenen, unFII, ucFII:iFII en inFII:aFII. Deze vertegenwoordigen verschillende wiskundige maatstaven voor de mate van factor II-ondercarboxylering. Prospectieve analyse van plasma vitamine K1, PIVKA II en ucOC is niet gepland, maar zal in reserve worden gehouden mocht de behoefte aan die gegevens zich voordoen.

Meting van K-Acid I en II in de urine: kwantificering van K-Acid I en II, en creatinine (Cr) in spot-urinemonsters zal worden uitgevoerd met behulp van een gevalideerde LC-MS/MS-test die de onderzoekers onlangs hebben ontwikkeld. De totale en individuele K-zuur/Cr-ratio in de urine wordt berekend.

Statistisch analyseplan: De onderzoekers zullen een ongepaarde t-test uitvoeren om de gemiddelde respons op vitamine K-suppletie in de twee CYP4F2-genotypegroepen te vergelijken. Respons wordt gedefinieerd als het gebied onder de curve van vitamine K-statuswaarde x tijd, gecorrigeerd voor baseline, voor de interventieperiode van 10 dagen. Een secundaire maatstaf is de absolute piekverandering in de vitamine K-statusratio. Zowel korte (urinaire K-Acid/Cr ratio) als lange termijn (ucFII:iFII en inFII:aFII) biomarkers zullen apart getest worden. Op basis van proefgegevens zal een steekproefomvang van 14 in elke genotypegroep een vermogen van ten minste 80% opleveren om een ​​significant effect op significantieniveau 0,05 te detecteren, wanneer er een tweevoudig verschil is in de respons op suppletie.