用于治疗 COVID-19 的橙皮苷和地奥司明

研究背景和基本原理 2019 年 12 月底，中国武汉市医院发现不明原因肺炎，并首次向 WHO 国家办公室报告 [1-3]。 几天后，中国政府确认了新型传染性呼吸道疾病的人际传播[4]。 2020 年 1 月底，世界卫生组织宣布由新型冠状病毒 (SARS-CoV-2) 引起的严重急性呼吸系统综合症 (SARS) 疫情为国际突发公共卫生事件。 这种被称为冠状病毒 19 (COVID-19) 的疾病从中国迅速传播到世界各地，随后世界卫生组织宣布其为全球大流行病。 强毒病毒结构与（SARS-CoV）毒株密切相关，具有单链正义RNA组成[5]。

这种大流行病对全世界尤其是对像埃及这样人口众多的国家来说尤其重要。 迫切需要为感染者提供紧急、持续和具有成本效益的医疗保健服务。 早期发现和预防 COVID-19 进展的策略将对受感染的患者产生重大影响，也将对资源有限的国家产生经济效益。

感染 COVID-19 的人可能没有任何症状，但仍然是周围其他人的传染源。 感染后最常见的临床表现从轻微症状（全身乏力、干咳、低烧和喉咙痛）到严重症状（典型的严重急性呼吸窘迫综合征 (ARDS) 和肺炎）[6]。 尽管大量的科学研究工作主要集中在抗病毒药物的使用、某些药物的再利用和疫苗生产上，以治疗 COVID-19 患者，但到目前为止还没有特定的治疗方法或疫苗用于治疗。 新药开发是一个耗时的过程，因此药物重新定位可能是控制这种大流行感染的最佳解决方案。

精选药物 橙皮苷是一种常见的黄酮苷，存在于柠檬和甜橙等柑橘类水果中[7, 8]。 橙皮苷具有多种药理活性，例如抗动脉粥样硬化、抗高血脂、抗糖尿病、静脉紧张、心脏保护、抗炎和抗高血压作用。 橙皮苷的抗炎活性主要归因于其抗氧化防御机制和抑制促炎细胞因子的产生[7]。 橙皮苷通过显着减少病毒复制来表现出对流感病毒的抗病毒活性。 用橙皮苷处理感染细胞可通过激活和上调 p38 和 JNK 表达来增强细胞自主免疫，这对于针对流感病毒的细胞防御机制至关重要[9]。

长期以来，橙皮苷一直被用作草药。 应 FDA 的要求，FASEB（美国实验生物学学会联合会）确认了橙皮苷的安全性。 毒性研究证实了口服摄入橙皮苷后的高安全性。 口服毒性研究的结果表明，口服橙皮苷摄入量超过 2 克/千克后没有不良副作用 [10]。

Daflon 500 mg 是一种市售的片剂剂型，含有 50 mg 橙皮苷和 450 mg diosmin 的微粉化类黄酮混合物，用作血管保护性血管紧张剂[10]。 这种橙皮苷混合物的特点是安全性高。 给大鼠连续口服橙皮苷合剂13周和26周，使用每日剂量35倍的极高剂量显示无毒性，LD50值高达3g/kg体重以上。 临床试验使用了超过 2850 名接受橙皮苷混合物治疗 6 周至 1 年的患者，结果显示血液学参数、肝肾功能正常，没有毒性迹象 [11]。

我们的研究团队最近在 Medical Hypotheses 杂志上发表了橙皮苷在 COVID-19 预防和治疗中的作用 [12]。

解开用于 COVID-19 细胞进入的宿主细胞受体将为攻击提供可能的途径。 COVID-19 的细胞进入取决于两个连续的步骤，首先是病毒刺突蛋白（S 蛋白）与宿主细胞受体的结合，然后是细胞蛋白酶对 S 蛋白的启动。 最近，研究人员表明，COVID-19 使用 ACE-2 受体进入 [13]，并使用丝氨酸蛋白酶 TMPRSS2 启动 S 蛋白。 Camostat mesylate 是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂药物，可阻止病毒进入，并在日本用作 COVID-19 治疗药物[14]。

COVID-19 通过其特定的刺突受体结合域 (RBD) 序列与 ACE-2 受体结合，形成 SARS-CoV-2-RBD-ACE-2 复合物。 使用同源模型筛选了 78 种抗病毒药物针对人类 ACE2 受体的拟议计算活性。 这项研究表明，橙皮苷是唯一一种可以靶向 SARS-CoV-2 Spike 和 ACE2 人类受体之间结合界面的化合物。 基于虚拟筛选，橙皮苷可能会破坏 ACE2 与 SARS-CoV-2 的 RBD 的相互作用，从而阻止其进入肺细胞 [15]。 因此，橙皮苷可作为一种很有前途的 COVID-19 感染预防剂。

宿主对 COVID-19 感染的抗病毒反应取决于免疫系统和细胞自卫机制的激活。 免疫力在保护宿主免受病毒感染方面起着重要作用。 免疫过度反应或免疫缺陷的发生是感染患者病情危重或严重的原因[16]。 橙皮苷对流感病毒的抗病毒活性涉及其在丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 通路激活中的作用。 MAPK 宿主防御级联有助于有效抑制病毒复制、传播并最大限度地减少组织损伤[9]。 最近的一项研究表明，干扰素-MAPK 通路在 COVID-19 免疫反应中发挥了重要作用[16]。 因此，橙皮苷通过激活宿主免疫力来帮助对抗 COVID-19 病毒复制及其进展，从而改善患者的预后。

感染 COVID-19 的患者表现出所谓的“细胞因子风暴”，它主要是作为炎症反应开始的，并导致可溶性炎症标志物不受控制地过度产生。 现有证据表明细胞因子风暴是 ARDS 发展的主要原因。 细胞因子风暴涉及各种免疫活性分子的释放，例如干扰素（例如 IFNγ)、白细胞介素（例如 IL-1β、IL-2、IL-6)、趋化因子和肿瘤坏死因子-α (TNF-α) [17]。

橙皮苷具有高抗炎活性，可抑制 IFN-γ 和 IL-2 等促炎细胞因子的分泌[18]。 此外，橙皮苷通过抑制 NF κB 信号级联的激活来抑制 IL 1β 刺激的炎症反应[19]。 它还在抑制 2 型糖尿病患者炎症标志物如（TNFα 和 IL-6）的释放方面发挥了重要作用[20]。 因此，它可以作为辅助疗法来控制针对COVID-19的严重炎症反应。

对 COVID-19 感染的免疫反应后凝血途径的激活促进了凝块形成。 微血栓形成的拟议机制涉及促凝血剂-抗凝血剂失衡的发生、血小板活化和将纤维蛋白原转化为纤维蛋白。 弥散性血管内凝血易于发生多器官衰竭，尤其是在严重感染病例中[21]。

建议使用预防剂量的肝素（低分子量，LMWH）来预防 COVID-19 住院患者的静脉血栓栓塞[21]。 在这种情况下，必须强调橙皮苷和地奥司明混合物与肝素联合给药对预防血栓栓塞的作用。 先前使用 Daflon 500 mg 和 LMWH 的临床试验结果证实，与单独使用 LMWH 相比，这种组合在预防肺栓塞和深静脉血栓形成方面具有显着效果。 因此，LMWH 和 Daflon 500 mg 的共同给药可以显着抑制凝块形成并防止疾病进展 [22]。

诊断标准 我国病毒研究机构通过经典的科赫假设，并通过电镜观察其形态，对SARS-CoV-2进行了初步鉴定[1]。 迄今为止，COVID-19 的黄金临床诊断方法是通过实时 PCR 在鼻咽拭子采样或其他呼吸道采样中进行核酸检测，并通过二代测序进一步确认患者的临床分类患者可分为三类：无症状、上呼吸道感染（URTI）表现为鼻炎、咽炎或孤立的低热和肌痛，以及下呼吸道感染（LRTI）表现为肺炎或支气管炎症状[3]。

（橙皮苷和地奥司明混合物，Daflon®）的副作用 与所有药物一样，Daflon 500 mg 会引起副作用，但并不是每个人都会出现。 已经描述了一些常见的胃肠道疾病和植物神经系统疾病（不适感）的病例，这些病例不需要停止治疗。

（橙皮苷和地奥司明混合物，Daflon®）Daflon 500 毫克片剂的安全问题对于大多数人来说，口服长达 6 个月可能是安全的。 长期使用它的安全性尚不清楚。 副作用包括胃痛和心烦、腹泻和头痛。

（橙皮苷和地奥司明混合物，Daflon®）的禁忌症 没有报告禁忌症。

（橙皮苷和地奥司明混合物，Daflon®）的相互作用 没有严重的药物相互作用，只有中度和轻微的相互作用

• Celiprol：（中度药物相互作用）橙皮苷可能会降低 Celiprol 的吸收。
• 地尔硫卓：（中度药物相互作用）橙皮苷可能会降低地尔硫卓的吸收。
• 维拉帕米：（中度药物相互作用）橙皮苷可能会增加维拉帕米的吸收。
• 抗高血压药物：（中度药物相互作用）橙皮苷可能会降低高血压，可能会导致您的血压过低。
• 抗凝剂/抗血小板药物：（中度药物相互作用）橙皮苷可能会减缓血液凝固，这可能会增加瘀伤和出血的机会。
• 镇静药物（苯二氮卓类药物）（中度药物相互作用）橙皮苷可能会导致过度嗜睡。

特别注意事项和警告：

• 怀孕和哺乳：当与地奥司明一起口服时，橙皮苷对孕妇或哺乳期妇女可能是安全的。
• 出血性疾病：橙皮苷可能会减缓血液凝固并增加出血风险。 理论上，橙皮苷可能会使出血性疾病恶化。
• 低血压：橙皮苷可能会降低血压。 从理论上讲，服用橙皮苷可能会使已经患有低血压的人的血压变得过低。
• 手术：橙皮苷可能会延长出血时间。 有人担心橙皮苷可能会增加手术过程中和手术后出血的风险。 在预定的手术前至少 2 周停止服用橙皮苷。

研究目标

该研究计划被用作为可能治疗 COVID-19 感染患者提供合适药物或药物组合的实用策略。 这种药物可能有助于预防呼吸系统并发症的进展。 这可以通过以下不同的目标来实现：

1. 根据对 COVID-19 病毒的可能活性筛选与不同药理学类别相关的不同药物。
2. 为感染患者和/或发生呼吸衰竭的高风险患者提供具有成本效益且易于实施的治疗策略。
3. 最后，这种临床策略仍然是改善埃及人健康状况的重要目标，可以挽救他们的生命，同时节省大量资金。

工作范围 工作范围将通过

1. 使用新改用的药物（Daflon 500 mg）治疗 COVID-19 感染者。
2. 通过根据 3 月 13 日发布的 WHO（疑似 COVID-19 疾病时严重急性呼吸道感染（SARI）的临床管理）临时指南设计的临床试验评估药物对轻度 COVID-19 患者对症治疗的效果2020.
3. 研究该药物对预防急性呼吸窘迫综合征 (ARDS) 等严重疾病的影响。

随机双盲对照平行研究（橙皮苷和地奥司明混合物，Daflon®）治疗埃及新诊断的 Covid-19 患者。

研究设计 本研究将是一项双盲随机对照平行研究 研究人群和方法 设置 本研究将针对目前在高等教育部附属指定医院接受治疗的患者。 患者将被随机分配接受 Daflon 与接受标准护理的对照组患者根据以下标准，确诊 COVID-19 的住院患者将被纳入本研究；成人（18-65 岁），男女，入院时鼻咽样本 PCR 阳性。 此外，纳入标准将涉及新诊断的无症状或上呼吸道感染 (URTI) 患者，他们将出现鼻炎、咽炎或孤立的低烧和肌痛。

知情同意 在被纳入研究之前，符合纳入标准的患者将书面知情同意参与该研究。 将向每位参与者提供一份信息文件，清楚地说明研究的性质以及与参与研究相关的风险或副作用以及益处。 该研究将按照赫尔辛基宣言的伦理标准进行。 方案将提交国家伦理委员会审查批准。 该试验将注册为临床试验。

程序 将在第 0 天对患者进行登记、初始数据收集和治疗的基线观察。 后续持续时间为 28 天或直到 PCR 阴性。 从第 1 天开始，患者将每天接受标准化护理或 Daflon 1000 mg，每天 3 次，持续 10 天。 将根据所有参与者的临床判断提供对症治疗和抗生素作为预防细菌重复感染的措施。 所有参与者都将在基线和随访期后提交血液样本进行 RT-PCR 测定，并评估血清 IL1β、TNF-α、hsCRP 的变化。 CBC 将用于淋巴细胞计数。 将评估呼吸频率和 PaO2 的变化。 此外，将计算死亡率。

结果 主要结果测量：RT-PCR 是否为阴性 次要结果测量包括：呼吸频率和 PaO2 的变化、血清 IL1β、TNF-α、hsCRP、淋巴细胞计数、死亡率和副作用发生的变化。

随机双盲对照平行研究（橙皮苷和地奥司明混合物，Daflon®）治疗埃及新诊断的 Covid-19 患者。

研究设计：随机双盲对照平行研究研究类型：介入性临床试验招募：每组 50 名参与者分配：随机分配：平行干预模型描述：两个平行组随机断言掩蔽：双重（参与者，研究者）主要目的：治疗或有效性加安全性 预计研究开始日期：01/07/2020 预计主要完成日期：15/07/2020 预计研究完成日期：01/10/2020 Arms

实验：

每天 3 次，每次 1000 毫克 Daflon，持续 10 天

有源比较器：

隔离医院提供的标准护理。 结果

主要结果指标：

PCR阴性

次要结果测量：

呼吸频率的变化 患者 PaO2 的变化 血清 IL1β 的变化 血清 TNF-α 的变化 血清 hsCRP 的变化 用于淋巴细胞计数的 CBC 报告的副作用 死亡率

纳入标准：

Covid-19 确诊病例（全部通过 RT-PCR 检测） 新诊断的无症状或上呼吸道感染 (URTI) 患者，将出现鼻炎、咽炎或孤立的低烧和肌痛，成人（18-65 岁） ） 两性

排除标准：

出血性疾病患者 低至极低血压患者 手术后患者 免疫功能低下患者在筛选时服用药物