先兆子痫中的心脏和免疫细胞功能

学习规划

临床观察研究的总体目标是确定在先兆子痫 (PE) 女性中观察到的促炎免疫细胞表型是否与怀孕期间和之后以及产后的心脏功能相关。

研究团队将由 Alice Christensen 博士（博士候选人）组成，她将同意研究组内的患者并开展临床和实验室方面的研究； Suchita Nadkarni 博士（主要主管）将在研究的所有基础科学方面监督和培训 Christensen 博士； Steve Thornton 教授和 Elena Greco 博士（临床主管）将担任该研究的产科负责人；顾问心脏病专家将包括 Neha Sekhri 博士，他将是任何心脏问题的主要联系人，Anna Herrey 博士，他将监督研究的成像方面的分析，以及 Kate Von Klemperer 博士，他将在伦敦皇家酒店与 Christensen 博士联络并提供建议和 Barts 医院关于超声心动图（回声）。 为此，将从伦敦皇家医院招募约 100 名孕妇。

研究人群将包括 3 组：

1. 先兆子痫患者（34 例）
2. 妊娠高血压综合征（PIH；33 例患者）
3. 健康孕妇 (33)

正常血压和 PIH 患者将与 PE 患者的胎龄相匹配。 超声心动图和非对比心血管磁共振 (CMR) 研究将在入组时和产后 3 个月对研究中的所有患者进行，前提是届时与妊娠相关的任何生理性心血管变化都将得到解决。 Anna Herrey 博士是孕妇 CMR 方面的领先专家，他将监督研究中的图像分析。 Herrey 博士最近发表了一篇论文，概述了对孕妇进行 CMR 的安全性以及不使用钆造影剂的比较分辨率（Herrey 等人，2019 年）。 心脏功能将通过超声心动图检查测量射血分数、应变和舒张功能（以及脉搏波速度）来评估。 心肌组织特征将通过非对比 CMR（T1 和 T2 映射和全容积评估，LV 功能分析的金标准（Bellenger 等人 2000 年和 Grothues 等人 2002 年））进行评估。 研究组中任何在产后 3 个月时表现出异常心脏变化的患者都将被转介给 Sekhri 医生进行 6 个月的随访（此时在 NHS 护理下）。 所有心脏扫描都将在 Barts 医院作为门诊病人进行，但患有严重 PE 的女性除外，在进入病房时，超声心动图将在床边进行。 因此，这些女性在入组时不会进行 CMR 检查，但会被邀请参加 3 个月后的 CMR 和超声心动图检查随访。

将从患者身上采集时间匹配的血液样本，以评估免疫细胞表型。 将收集血浆样本用于心脏特定因素（BNP、肌钙蛋白）的分析以及类固醇激素（黄体酮和雌二醇）以及可溶性炎症和抗炎介质的测量。 为了限制研究中的偏差，所有 CMR 图像分析（由 Herrey 博士完成）都将采用盲法。 Sekhri 博士将可用于第二次报告，以评估 CMR 研究的观察者间变异性。 如果早发性和迟发性 PE（分别在妊娠 34 周之前和之后发生的 PE）之间存在明显差异，则将在 PE 组内对亚组进行分析。 这项初步试点研究将为早期和晚期发病疾病的进一步研究提供功效计算信息。

留学手续

后续程序

所有招募到该研究的患者，除了那些患有严重 PE 的患者，都将作为皇家伦敦的门诊患者进行随访，并将被要求到 Barts 医院进行 CMR 研究。

参与者退出

参与者可以选择在任何阶段提交书面请求退出试验。 参与者还可以选择撤回对进一步参与的同意，在这种情况下将不会收集进一步的数据以供纳入。 如果参与者不幸失去能力，收集到的信息将继续使用，但不会记录更多数据。

研究者还会询问参与者是否可以保留他们的联系信息，以便研究者可以联系他们参与与当前研究相关的未来研究。 将在同意书上询问此请求。

研究定义结束

研究的结束将通过实现每个患者组的建议患者数量（上文概述）来定义。

统计考虑

由于这将是一项试点研究，研究人员无法对所需患者数量进行功效计算。 每个患者组的人数是根据他们认为可以在最初 1 年期间招募的实际患者人数以及随后对这些患者进行的后续研究选择的。

分析方法

在我们当地的 NIHR 生物信息学和生物资源库设施 (http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository) 的支持下，将使用多种方法分析多个参数组比较 (ANOVA) 以增加功效。 为了限制研究中的偏差，所有 CMR 图像分析（由 Herrey 博士和 Sekhri 博士完成）将采用盲法，并将测量观察者间的变异性。

研究人员将使用流式细胞仪分析免疫细胞表型。 这是一种行之有效的方法。 Nadkarni 博士的实验室可以使用流式细胞术核心设施，该设施的机器可以识别任何给定细胞上的 12 种表型标记。 此外，首席研究员 Nadkarni 博士及其团队在使用这种方法进行免疫细胞表型分析方面拥有丰富的经验。 主要优点是：

1. 它是免疫细胞表型分析的金标准
2. 需要最少量的血液（最多 200 微升）
3. 抗体是可商购的，并且已经过我们自己和其他人的广泛验证
4. Nadkarni 博士开发了一种高通量方法，可以同时分析许多样本，从而最大限度地减少处理错误

所有样本将在样本收集后 1 小时内进行处理和分析，以最大限度地减少免疫细胞表面蛋白质的降解。

研究人员还建议研究血浆中的循环因子，这将使用市售的 ELISA 试剂盒进行。

主要终点将是确定与正常健康和 PIH 组相比，我们的先兆子痫患者队列中异常免疫细胞表型与异常心脏功能之间是否存在相关性。 此外，将进行分析以发现我们的先兆子痫和 PIH 患者队列之间具有统计学意义的心脏功能和表型差异，这将提高我们对患者组之间心脏功能的理解。

伦理

当前研究的申请在提交后等待处理。 将如上所述获得并记录知情同意。 特殊群体的津贴详见上文。

偶然发现

如果在研究过程中出现任何具有临床意义的偶然发现，将通知参与者全科医生和临床护理团队。 在注册过程中将寻求与 GP 联系的同意。

年度安全报告

CI 将在 REC“赞成意见”周年纪念日使用 HRA 模板向 REC 和发起人发送年度进展报告。

数据管理

所有生成的数据都将存储在结合了临床和实验室数据的 Excel 电子表格中。 电子表格将通过密码保护存储在受保护计算机上的安全硬盘中。 密码和数据的访问将严格按照需要知道的原则进行。 一个完整的审计跟踪将到位。

源数据

本研究的源数据将包括先兆子痫或妊娠高血压的初步诊断，这些数据将从皇家伦敦的 Elena Greco 博士领导的产科护理团队获得。 这些将以验血结果和/或怀孕扫描图像的形式出现。

随后的源数据将是在初始时间点（先兆子痫和孕龄匹配对照的诊断）拍摄的 CMR 图像和研究的第二个时间点（产后 3 个月）的后续 CMR 图像数据。 除了 CMR 图像之外，源数据还将从在上述时间点从患者身上采集的血液样本的实验室表型分析中获得。

直接参与研究的调查人员将有权访问源数据。 在某些情况下，在被认为对患者及其持续护理最有利的情况下，临床医生可能会向其他专家寻求建议，这可能需要他们访问源数据。

保密

研究人员将进行伪随机化，患者只能通过医院编号来识别。 由于这将是一项后续研究，研究人员需要将患者联系起来，因此这项研究不会完全匿名。

记录保留和归档

研究数据和文件将根据相关监管要求和现场 SOP 进行存档。

在研究开始时，将向每位参与者分配一个唯一的字母数字患者标识符。 数据将使用安全数据库中的唯一参与者标识符存储。 数据不会存储在个人电脑上。 机密文件将存放在位于安全房间内的上锁橱柜中。 临床记录将根据信任协议进行处理。 在整个研究过程中，将遵守数据保护法和 NHS 保密行为准则。 可以与临床团队成员共享数据，以允许进行持续的临床护理。

GCP 指南要求研究者或机构保留所有病例报告表和支持从每个参与者收集的数据的所有源文件以及所有试验文件。 将采取措施防止意外或过早销毁这些文件。 重要文件必须至少保留 20 年。 当不再需要保留这些文件时，申办者有责任通知研究者。 如果负责的调查员退休或离开机构，则必须将文件责任转移给接受其保管的人

样品制备和采集

将从已阅读信息表并签署同意书的患者中收集用于评估免疫细胞表型的血样。 在心脏 MRI 的那天。 每次最多从患者身上取出 15 毫升，并收集到柠檬酸钠管中。

实验室程序

大多数血液样本将使用流式细胞术方法进行表型分析。 简而言之，50 微升血液将用市售抗体标记，这些抗体与荧光染料结合，可以通过流式细胞仪上的激光检测。 专用软件将能够对免疫细胞上表达的表型标记进行评估分析。

这些样本还将分离出特定免疫细胞，包括中性粒细胞和 T 细胞，这些样本将储存在安全的 -80oC 冰箱中，随后可能用于基因检测，包括下一代和全基因组测序。 这种深度测序将使我们能够评估可能与免疫细胞表型变化同时发生的遗传变化。

还将从这些样本中收集血浆以评估循环因子，并通过市售试剂盒进行评估。

样品储存和转移

血液样本将由研究员 Alice Christensen 博士在 Barts 心脏中心采集，该中心将进行心脏核磁共振成像。 样品将储存在 NHS 冰箱中，直到转移到实验室。 Barts 心脏中心距离实验室所在的 William Harvey 研究所最多步行 10 分钟。 Christensen 博士将使用安全的样品转移箱将样品转移到实验室，然后将其带到实验室。 所有血液样本将在收集后一小时内处理。

安全报告

由于本研究的观察性质和设计，不会发生不良事件的安全报告。

监控和审计

发起人或代表保留审核任何研究、研究地点或中心设施的权利。 此外，研究的任何部分都可以在适用的情况下由资助者审计。

将根据研究监测计划进行现场监测。 监控将包括源数据验证。

中心的监测可由经过培训的研究监测员或监测员进行，以验证研究文件。