Функция сердечных и иммунных клеток при преэклампсии

Дизайн исследования

Общая цель клинического обсервационного исследования состоит в том, чтобы определить, может ли фенотип провоспалительных иммунных клеток, наблюдаемый у женщин с преэклампсией (ПЭ), коррелировать с функцией сердца во время и после беременности и в послеродовом периоде.

Исследовательская группа будет состоять из доктора Элис Кристенсен (кандидат наук), которая будет давать согласие пациентам в рамках исследовательской группы и выполнять клинические и лабораторные аспекты исследования; д-р Сучита Надкарни (главный научный руководитель), которая будет курировать и обучать д-ра Кристенсена всем фундаментальным научным аспектам исследования; профессор Стив Торнтон и д-р Елена Греко (клинические руководители), которые будут руководить акушерством в исследовании; В число консультантов-кардиологов войдут д-р Неха Сехри, которая будет основным контактным лицом по любым проблемам с сердцем, д-р Анна Херри, которая будет наблюдать за анализом визуализирующего аспекта исследования, и д-р Кейт фон Клемперер, которая будет поддерживать связь и консультировать д-ра Кристенсена в Королевском Лондоне. и Barts Hospitals относительно эхокардиографии (эхо). С этой целью будет набрано около 100 беременных женщин из Королевского лондонского госпиталя.

Исследуемая популяция будет состоять из 3 групп:

1. Пациенты с преэклампсией (34 пациента)
2. Гипертензия, вызванная беременностью (PIH; 33 пациента)
3. Здоровые беременные женщины (33)

Пациенты с нормотензией и ПВГ будут соответствовать по гестационному возрасту пациентам с ПЭ. Эхокардиографию и неконтрастное сердечно-сосудистое магнитно-резонансное исследование (CMR) будут проводить всем пациенткам, участвующим в исследовании, при включении в исследование и через 3 месяца после родов, при условии, что к тому времени любые физиологические сердечно-сосудистые изменения, связанные с беременностью, исчезнут. Доктор Анна Херри, ведущий специалист по CMR у беременных женщин, будет наблюдать за анализом изображений в исследовании. Доктор Херри недавно опубликовал статью, в которой описывается безопасность проведения МРТ у беременных женщин и сравнительное разрешение без использования гадолиниевого контраста (Herrey et al 2019). Сердечная функция оценивается с помощью эхокардиографии с измерением фракции выброса, напряжения и диастолической функции (а также скорости пульсовой волны). Характеристики ткани миокарда будут оцениваться с помощью неконтрастной МРТ (картирование Т1 и Т2 и полная объемная оценка, золотой стандарт анализа функции ЛЖ (Bellenger et al 2000 и Grothues et al 2002)). Любая пациентка в исследуемой группе, у которой через 3 месяца после родов обнаруживаются аномальные сердечные изменения, будет направлена ​​к доктору Сехри для последующего наблюдения в течение 6 месяцев (на данный момент под наблюдением NHS). Все виды сканирования сердца будут проводиться амбулаторно в больнице Бартс, за исключением женщин с тяжелой ТЭЛА, которым эхокардиография будет проводиться у постели больного при поступлении в палату. Таким образом, эти женщины не будут проходить исследования МРТ при включении в исследование, но им будет предложено пройти контрольное наблюдение через 3 месяца для исследований МРТ и эхокардиографии.

У пациентов будут взяты образцы крови, соответствующие времени, для оценки фенотипов иммунных клеток. Образцы плазмы будут взяты для анализа специфических сердечных факторов (BNP, тропонин), а также для измерения стероидных гормонов (прогестерон и эстрадиол) и растворимых воспалительных и противовоспалительных медиаторов. Чтобы ограничить систематическую ошибку в рамках исследования, все анализы изображений CMR (выполненные доктором Херри) будут слепыми. Д-р Sekhri будет доступен для второго отчета, чтобы оценить межнаблюдательную изменчивость исследований CMR. Если станет очевидной какая-либо разница между ранней и поздней ПЭ (ПЭ, которая развивается до и после 34 недель беременности соответственно), подгруппы будут проанализированы в группе ПЭ. Это первоначальное экспериментальное исследование будет использовано для расчетов мощности для дальнейших исследований раннего и позднего начала заболевания.

Процедуры исследования

Последующие процедуры

Все пациенты, включенные в исследование, за исключением пациентов с тяжелой ТЭЛА, будут находиться под амбулаторным наблюдением в The Royal London, и им будет предложено посетить больницу Barts Hospital для исследований CMR.

Выход участника

Участники будут иметь возможность подать письменный запрос на вывод из испытания на любом этапе. У участников также будет возможность отозвать согласие на дальнейшее участие, при этом никакие дополнительные данные не будут собираться для включения. В том случае, если участник потеряет способность, собранная информация будет продолжать использоваться, но дальнейшие данные записываться не будут.

Исследователи также спросят участников, могут ли они сохранить свою контактную информацию, чтобы исследователи могли связаться с ними для участия в будущих исследованиях, связанных с текущим исследованием. Этот запрос будет задан в форме согласия.

Окончание исследования Определение

Окончание исследования будет определяться достижением предложенного количества пациентов в каждой группе пациентов (указанного выше).

Статистические соображения

Поскольку это будет пилотное исследование, исследователи не могут выполнять расчет мощности для необходимого количества пациентов. числа для каждой группы пациентов были выбраны на основе реалистичного числа пациентов, которые, по их мнению, могут быть набраны в течение начального 1-летнего периода и последующих исследований этих пациентов.

Метод анализа

При поддержке нашего местного центра биоинформатики и биорепозитория NIHR (http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository) несколько параметров будут проанализированы с использованием нескольких групповые сравнения (ANOVA) для увеличения мощности. Чтобы ограничить систематическую ошибку в рамках исследования, все анализы изображений CMR (выполненные доктором Херри и доктором Сехри) будут ослеплены, и будет измеряться изменчивость между наблюдателями.

Исследователи будут использовать проточную цитометрию для анализа фенотипа иммунных клеток. Это хорошо зарекомендовавший себя метод. Лаборатория доктора Надкарни имеет доступ к основному центру проточной цитометрии, в котором есть машины, способные идентифицировать до 12 фенотипических маркеров на любой конкретной клетке. Кроме того, д-р Надкарни, главный исследователь, и ее группа имеют большой опыт фенотипирования иммунных клеток с использованием этого метода. Ключевые преимущества:

1. Это золотой стандарт для фенотипирования иммунных клеток.
2. Требуется минимальное количество крови (максимум 200 мкл)
3. Антитела коммерчески доступны и были тщательно проверены нами и другими исследователями.
4. Д-р Надкарни разработал высокопроизводительный метод анализа множества образцов одновременно, что сводит к минимуму ошибки обработки.

Все образцы будут обработаны и проанализированы в течение 1 часа после сбора образцов, чтобы свести к минимуму деградацию белков на поверхности иммунных клеток.

Исследователи также предлагают изучить циркулирующие факторы в плазме, и это будет осуществляться с использованием имеющихся в продаже наборов ELISA.

Первичной конечной точкой будет определение того, существует ли корреляция между аберрантными фенотипами иммунных клеток и аномальной сердечной функцией в нашей когорте пациентов с преэклампсией по сравнению с нормальными здоровыми группами и группами с ПВГ. Кроме того, будут проведены анализы для выявления статистически значимых функциональных и фенотипических различий между нашими группами пациентов с преэклампсией и ПВГ, что улучшит наше понимание сердечной функции между группами пациентов.

Этика

Заявка на текущее исследование находится на рассмотрении после подачи. Информированное согласие будет получено и зарегистрировано, как описано выше. Надбавки для особых групп подробно описаны выше.

Случайные находки

Если в ходе исследования возникнут какие-либо случайные находки, имеющие клиническое значение, терапевт и группа клинического ухода будут проинформированы об этом. Согласие на обращение к врачу общей практики будет запрошено в процессе регистрации.

Ежегодная отчетность по безопасности

CI направит ежегодный отчет о ходе работы в REC и спонсору, используя шаблон HRA, в годовщину «одобрительного заключения» REC.

Управление данными

Все сгенерированные данные будут храниться в электронной таблице Excel, объединяющей клинические и лабораторные данные. Электронная таблица будет защищена паролем и хранится на защищенном жестком диске защищенного компьютера. Доступ к паролю и данным будет осуществляться только в случае необходимости. Будет вестись полный аудиторский след.

Источник данных

Исходные данные для этого исследования будут включать первоначальные диагнозы преэклампсии или гипертензии, вызванной беременностью, которые будут получены от группы акушерской помощи под руководством доктора Елены Греко в Королевском Лондоне. Они будут представлены в виде результатов анализа крови и/или сканированных изображений беременности.

Последующими исходными данными будут изображения МРТ, полученные в начальный момент времени (диагнозы преэклампсии и контрольные группы соответствующего гестационного возраста), и последующие данные изображений МРТ во 2-й момент времени исследования (через 3 месяца после родов). В дополнение к изображениям CMR исходные данные также будут получены в результате лабораторного фенотипирования образцов крови, взятых у пациентов в указанные выше моменты времени.

Исследователи, непосредственно участвующие в исследовании, будут иметь доступ к исходным данным. В некоторых случаях, когда это считается наилучшим для пациента и его текущего ухода, клиницисты могут обратиться за советом к другим экспертам, что может потребовать их доступа к исходным данным.

Конфиденциальность

Исследователи проведут псевдорандомизацию, при которой пациента можно будет идентифицировать только по номеру больницы. Поскольку это будет последующее исследование, исследователям необходимо будет связать пациента, поэтому это исследование не будет полностью анонимным.

Хранение записей и архивирование

Данные исследования и документация будут заархивированы в соответствии с соответствующими нормативными требованиями и СОП объекта.

В начале исследования каждому участнику будет присвоен уникальный буквенно-цифровой идентификатор пациента. Данные будут храниться с использованием уникальных идентификаторов участников в защищенной базе данных. Данные не будут храниться на персональных компьютерах. Конфиденциальные документы будут храниться в запираемом шкафу, расположенном в охраняемой комнате. Клинические записи будут обрабатываться в соответствии с протоколом доверия. На протяжении всего исследования будут соблюдаться Закон о защите данных и кодекс практики конфиденциальности NHS. Данные могут быть переданы членам клинической бригады, чтобы обеспечить постоянную клиническую помощь.

Руководящие принципы GCP требуют, чтобы исследователь или учреждение хранили все формы отчетов о случаях и все исходные документы, подтверждающие данные, полученные от каждого участника, а также всю документацию по исследованию. Будут приняты меры для предотвращения случайного или преждевременного уничтожения этих документов. Основные документы должны храниться не менее 20 лет. Спонсор несет ответственность за информирование исследователя, когда эти документы больше не нужно хранить. Если ответственный следователь уходит в отставку или покидает учреждение, ответственность за документацию должна быть передана лицу, которое примет их хранение.

Подготовка и сбор проб

Образцы крови для оценки фенотипов иммунных клеток будут взяты у пациентов, которые прочитали информационный лист и подписали форму согласия. в день МРТ сердца. Максимальный объем 15 мл будет взят у пациента за один раз и собран в пробирки с цитратом натрия.

Лабораторные процедуры

Большинство образцов крови будет подвергнуто фенотипическому анализу методом проточной цитометрии. Вкратце, 50 мкл крови будут помечены имеющимися в продаже антителами, конъюгированными с флуорохромами, которые можно обнаружить с помощью лазеров на проточном цитометре. Специализированное программное обеспечение позволит проводить анализ оценки фенотипических маркеров, которые экспрессируются на иммунных клетках.

Образцы также будут выделены для определения специфических иммунных клеток, включая нейтрофилы и Т-клетки, которые будут храниться в безопасном морозильнике при температуре -80°C и впоследствии могут быть использованы для генетического тестирования, включая секвенирование следующего поколения и всего генома. Такое глубокое секвенирование позволит нам оценить генетические изменения, которые могут происходить наряду с фенотипическими изменениями в иммунных клетках.

Плазма также будет собираться из этих образцов для оценки циркулирующих факторов с помощью имеющихся в продаже наборов.

Хранение и передача образцов

Образцы крови будут взяты научным сотрудником доктором Элис Кристенсен в кардиологическом центре Бартса, где будет проводиться МРТ сердца. Образцы будут храниться в холодильнике NHS до передачи в лабораторию. Кардиологический центр Бартса находится максимум в десяти минутах ходьбы от Научно-исследовательского института Уильяма Харви, где находится лаборатория. Образцы будут доставлены доктором Кристенсеном в лабораторию с использованием безопасных коробок для передачи образцов, которые будут доставлены в лабораторию. Все образцы крови будут обработаны в течение одного часа после сбора.

Отчетность по безопасности

В связи с наблюдательным характером и дизайном этого исследования не будут сообщаться о нежелательных явлениях, связанных с безопасностью.

Мониторинг и аудит

Спонсор или делегат сохраняет за собой право проводить аудит любого исследования, исследовательского центра или центрального учреждения. Кроме того, любая часть исследования может быть проверена спонсорами, если это применимо.

Мониторинг на месте будет проводиться в соответствии с планом мониторинга исследования. Мониторинг будет включать проверку исходных данных.

Мониторинг центра может осуществляться обученным наблюдателем или наблюдателями за исследованием для проверки документации исследования.