Sydämen ja immuunisolujen toiminta preeklampsiassa

Opintojen suunnittelu

Kliinisen havainnointitutkimuksen yleisenä tavoitteena on selvittää, voidaanko preeklampsiaa (PE) sairastavilla naisilla havaittu proinflammatorinen immuunisolufenotyyppi korreloida sydämen toimintaan raskauden aikana ja sen jälkeen sekä synnytyksen jälkeisenä aikana.

Tutkimusryhmä koostuu tohtori Alice Christensenistä (tohtorikandidaatti), joka hyväksyy tutkimusryhmän potilaita ja suorittaa tutkimuksen kliiniset ja laboratorionäkökohdat; Tohtori Suchita Nadkarni (ensisijainen ohjaaja), joka valvoo ja kouluttaa tohtori Christenseniä kaikista tutkimuksen perustieteellisistä näkökohdista; Professori Steve Thornton ja tohtori Elena Greco (kliiniset ohjaajat), jotka ovat tutkimuksen synnytysjohtajia; Konsulttikardiologeihin kuuluvat tohtori Neha Sekhri, joka on ensisijainen yhteyshenkilö kaikissa sydänongelmissa, tohtori Anna Herrey, joka valvoo tutkimuksen kuvantamisnäkökohtia, ja tohtori Kate Von Klemperer, joka on yhteydessä tohtori Christenseniin ja neuvoo häntä sekä The Royal Londonissa. ja Barts Hospitals koskien kaikukardiografiaa (kaiku). Tätä tarkoitusta varten noin 100 raskaana olevaa naista rekrytoidaan Royal London Hospitalista.

Tutkimuspopulaatio koostuu 3 ryhmästä:

1. Preeklampsiapotilaat (34 potilasta)
2. Raskauden aiheuttama hypertensio (PIH; 33 potilasta)
3. Terveet raskaana olevat naiset (33)

Normotensiiviset ja PIH-potilaat sovitetaan raskausiän mukaan PE-potilaiden kanssa. Kaikille tutkimukseen osallistuville potilaille tehdään kaikukardiografia ja ei-kontrastiset kardiovaskulaariset magneettiresonanssitutkimukset (CMR) ilmoittautumisen yhteydessä ja 3 kuukautta synnytyksen jälkeen olettaen, että kaikki raskauteen liittyvät fysiologiset sydän- ja verisuonimuutokset ovat ratkenneet siihen mennessä. Tohtori Anna Herrey, johtava raskaana olevien naisten CMR-asiantuntija, valvoo tutkimuksen kuva-analyysejä. Tohtori Herrey on äskettäin julkaissut asiakirjan, jossa hahmotellaan CMR-tutkimuksen turvallisuutta raskaana oleville naisille ja vertailevaa erottelukykyä ilman gadoliniumkontrastia (Herrey et al 2019). Sydämen toiminta arvioidaan kaikukardiografiatutkimuksella, jossa mitataan ejektiofraktio, venymä ja diastolinen toiminta (sekä pulssiaallon nopeus). Sydänlihaskudoksen ominaisuudet arvioidaan ei-kontrastisella CMR:llä (T1- ja T2-kartoitus ja täydellinen tilavuusarviointi, kultainen standardi LV-toiminnan analyysille (Bellenger et al 2000 ja Grothues et al 2002)). Jokainen tutkimusryhmän potilas, jolla on epänormaaleja sydämen muutoksia 3 kuukauden kuluttua synnytyksestä, ohjataan tohtori Sekhrille kuuden kuukauden seurantaan (tällä hetkellä NHS:n hoidossa). Kaikki sydämen skannaukset tehdään avohoidossa Bartsin sairaalassa paitsi naisille, joilla on vaikea PE, jossa kaikukardiografia tehdään sängyn vieressä osastolle saapumisen yhteydessä. Näin ollen näillä naisilla ei ole CMR-tutkimuksia ilmoittautumisen yhteydessä, mutta heidät kutsutaan seuraamaan kolmen kuukauden kuluttua CMR- ja kaikukardiografiatutkimuksista.

Potilailta otetaan aikasovitettuja verinäytteitä immuunisolufenotyyppien arvioimiseksi. Plasmanäytteitä kerätään sydänspesifisten tekijöiden (BNP, troponiini) analyyseja sekä steroidihormonien (progesteroni ja estradioli) sekä liukoisten tulehdus- ja anti-inflammatoristen välittäjien mittaamista varten. Tutkimuksen harhan rajoittamiseksi kaikki CMR-kuva-analyysit (teki tohtori Herrey) sokennetaan. Tohtori Sekhri on käytettävissä toista raportointia varten CMR-tutkimusten havaintojen välisen vaihtelun arvioimiseksi. Jos varhaisen ja myöhään alkavan PE:n välillä ilmenee eroa (PE, joka kehittyy ennen 34 raskausviikkoa ja sen jälkeen), alaryhmät analysoidaan PE-ryhmän sisällä. Tämä ensimmäinen pilottitutkimus antaa tietoja teholaskelmista varhaisen ja myöhäisen taudin lisätutkimuksia varten.

Opiskelumenettelyt

Seurantamenettelyt

Kaikki tutkimukseen värvätyt potilaat, paitsi ne, joilla on vaikea PE, seurataan avohoidossa The Royal Londonissa, ja heitä pyydetään osallistumaan sairaalakäynnille Bartsin sairaalassa CMR-tutkimuksia varten.

Osallistujan vetäytyminen

Osallistujilla on mahdollisuus esittää kirjallinen pyyntö vetäytyä kokeesta missä tahansa vaiheessa. Osallistujilla on myös mahdollisuus peruuttaa suostumus myöhempään osallistumiseen, jolloin muita tietoja ei kerätä osallistumista varten. Siinä tapauksessa, että osallistuja menettää kapasiteettinsa, kerättyjen tietojen käyttöä jatketaan, mutta muita tietoja ei tallenneta.

Tutkijat myös kysyvät osallistujilta, voivatko he säilyttää yhteystietonsa, jotta tutkijat voivat ottaa heihin yhteyttä osallistuakseen tulevaan tutkimukseen liittyen. Tätä pyyntöä kysytään suostumuslomakkeella.

Opintojen lopun määritelmä

Tutkimuksen loppu määritellään saavuttamalla ehdotetut potilasmäärät potilasryhmää kohden (kuvattu edellä).

Tilastolliset näkökohdat

Koska kyseessä on pilottitutkimus, tutkijat eivät voi tehdä teholaskelmia tarvittavien potilaiden lukumäärästä. kunkin potilasryhmän luvut on valittu niiden potilaiden realististen lukumäärän perusteella, jotka he uskovat voitavan rekrytoida ensimmäisellä 1 vuoden jaksolla ja näitä potilaita koskevien myöhempien seurantatutkimusten perusteella.

Analyysimenetelmä

Paikallisen NIHR:n bioinformatiikka- ja biotietovarastomme (http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository) tuella analysoidaan useita parametreja käyttämällä useita ryhmävertailut (ANOVA) tehon lisäämiseksi. Tutkimuksen vääristymisen rajoittamiseksi kaikki CMR-kuva-analyysit (jota ovat tehneet tohtori Herrey ja tohtori Sekhri) sokotetaan ja tarkkailijoiden välinen vaihtelu mitataan.

Tutkijat käyttävät virtaussytometriaa immuunisolufenotyypin analysointiin. Tämä on vakiintunut menetelmä. Tohtori Nadkarnin laboratoriossa on pääsy virtaussytometrian ydinlaitokseen, jossa on koneet, jotka voivat tunnistaa 12 fenotyyppistä merkkiä missä tahansa solussa. Lisäksi päätutkijalla, tohtori Nadkarnilla ja hänen ryhmällään on laaja kokemus immuunisolujen fenotyypistämisestä tällä menetelmällä. Tärkeimmät edut ovat:

1. Se on immuunisolujen fenotyypityksen kultastandardi
2. Tarvitaan pieni määrä verta (max 200μl)
3. Vasta-aineita on kaupallisesti saatavilla, ja me ja muut ovat ne laajalti validoineet
4. Tohtori Nadkarni on kehittänyt korkean suorituskyvyn menetelmän useiden näytteiden analysoimiseen kerralla, mikä minimoi käsittelyvirheet

Kaikki näytteet käsitellään ja analysoidaan tunnin sisällä näytteenoton jälkeen proteiinien hajoamisen minimoimiseksi immuunisolujen pinnalla.

Tutkijat ehdottavat myös plasmassa kiertävien tekijöiden tarkastelua, ja tämä tehdään käyttämällä kaupallisesti saatavia ELISA-pakkauksia.

Ensisijainen päätetapahtuma on määrittää, onko poikkeavien immuunisolufenotyyppien ja epänormaalin sydämen toiminnan välillä korrelaatiota preeklampsiapotilasryhmässämme verrattuna normaaleihin terveisiin ja PIH-ryhmiin. Lisäksi tehdään analyyseja, joilla löydetään tilastollisesti merkittäviä sydämen toiminnallisia ja fenotyyppisiä eroja preeklampsia ja PIH-potilasryhmiemme välillä, mikä parantaa ymmärrystämme sydämen toiminnasta potilasryhmien välillä.

Etiikka

Hakemus nykyiseen tutkimukseen on vireillä lähetyksen jälkeen. Tietoinen suostumus hankitaan ja tallennetaan yllä kuvatulla tavalla. Erityisryhmien korvaukset on kuvattu yllä.

Satunnaiset havainnot

Jos tutkimuksen aikana ilmenee kliinisesti merkittäviä satunnaisia ​​löydöksiä, siitä ilmoitetaan osallistuville yleislääkärille ja hoitotiimille. Suostumus ottaa yhteyttä yleislääkäriin pyydetään ilmoittautumisen yhteydessä.

Vuosittainen turvallisuusraportti

CI lähettää vuosittaisen edistymisraportin REC:lle ja sponsorille käyttämällä HRA-mallia REC:n "myönteisen lausunnon" vuosipäivänä.

Tiedonhallinta

Kaikki luodut tiedot tallennetaan Excel-taulukkoon, jossa yhdistyvät kliiniset ja laboratoriotiedot. Laskentataulukko on suojattu salasanalla, ja se tallennetaan suojatun tietokoneen suojatulle kiintolevylle. Pääsy salasanaan ja tietoihin on ehdottoman välttämätöntä. Täydellinen kirjausketju otetaan käyttöön.

Lähdetiedot

Tämän tutkimuksen lähdetiedot sisältävät preeklampsian tai raskauden aiheuttaman verenpainetaudin alkudiagnoosit, jotka saadaan synnytyshoitoryhmältä, jota johtaa tri Elena Greco Lontoon kuninkaallisessa rakennuksessa. Nämä ovat verikoetulosten ja/tai raskauden skannauskuvien muodossa.

Myöhemmät lähdetiedot ovat CMR-kuvia, jotka on otettu ensimmäisellä aikapisteellä (preeklampsian diagnoosit ja raskauden iän mukaiset kontrollit) ja seuranta-CMR-kuvadataa tutkimuksen 2. ajankohtana (3 kuukautta synnytyksen jälkeen). Lähdetietoa saadaan CMR-kuvien lisäksi myös potilailta edellä mainittuina ajankohtina otettujen verinäytteiden laboratoriofenotyypistämisestä.

Tutkijoilla, jotka ovat suoraan mukana tutkimuksessa, on pääsy lähdetietoihin. Joissakin tapauksissa, joissa se katsotaan potilaan ja hänen jatkuvan hoidon kannalta parhaaksi, kliinikot voivat pyytää neuvoja muilta asiantuntijoilta, mikä saattaa edellyttää heidän pääsyä lähdetietoihin.

Luottamuksellisuus

Tutkijat tekevät näennäissatunnaistuksen, jossa potilas voidaan tunnistaa vain hänen sairaalanumeronsa perusteella. Koska tämä on seurantatutkimus, tutkijoiden on yhdistettävä potilas, joten tätä tutkimusta ei tehdä täysin anonymisoiduksi.

Tietueiden säilyttäminen ja arkistointi

Tutkimustiedot ja -asiakirjat arkistoidaan asiaankuuluvien säännösten ja paikan SOP-ohjeiden mukaisesti.

Jokaiselle osallistujalle annetaan yksilöllinen aakkosnumeerinen potilastunniste tutkimuksen alussa. Tiedot tallennetaan käyttämällä ainutlaatuisia osallistujatunnisteita suojattuun tietokantaan. Tietoja ei tallenneta henkilökohtaisiin tietokoneisiin. Luottamukselliset asiakirjat säilytetään lukitussa kaapissa, joka sijaitsee suojatussa huoneessa. Kliiniset huomautukset käsitellään luottamusprotokollan mukaisesti. Tietosuojalakia ja NHS:n salassapitosäännöstöä noudatetaan koko tutkimuksen ajan. Tietoja voidaan jakaa kliinisen tiimin jäsenten kanssa jatkuvan kliinisen hoidon mahdollistamiseksi.

GCP-ohjeet edellyttävät, että tutkija tai oppilaitos ylläpitää kaikkia tapausraporttilomakkeita ja kaikkia lähdeasiakirjoja, jotka tukevat jokaiselta osallistujalta kerättyä dataa sekä kaikkia kokeiludokumentaatioita. Toimenpiteisiin ryhdytään näiden asiakirjojen vahingossa tapahtuvan tai ennenaikaisen tuhoutumisen estämiseksi. Olennaisia ​​asiakirjoja on säilytettävä vähintään 20 vuotta. Toimeksiantajan vastuulla on ilmoittaa tutkijalle, kun näitä asiakirjoja ei enää tarvitse säilyttää. Jos vastuullinen tutkija jää eläkkeelle tai lähtee laitoksesta, vastuu asiakirjoista on siirrettävä henkilölle, joka ottaa hänen huostaan

Näytteen valmistelu ja keräys

Verinäytteet immuunisolufenotyyppien arvioimiseksi otetaan potilailta, jotka ovat lukeneet tietolomakkeen ja allekirjoittaneet suostumuslomakkeen. sydämen MRI-päivänä. Potilaalta otetaan kerrallaan enintään 15 ml tilavuus ja kerätään natriumsitraattiputkiin.

Laboratoriomenettelyt

Suurimmalle osalle verinäytteistä tehdään fenotyyppianalyysit virtaussytometriamenetelmällä. Lyhyesti sanottuna 50 mikrolitraa verta leimataan kaupallisesti saatavilla olevilla vasta-aineilla, jotka on konjugoitu fluorokromeihin, jotka voidaan havaita lasereilla virtaussytometrillä. Erikoisohjelmistot mahdollistavat immuunisoluissa ilmentyvien fenotyyppisten markkerien arvioinnin analyysit.

Näytteet eristetään myös spesifisille immuunisoluille, mukaan lukien neutrofiilit ja T-solut, joita säilytetään turvallisessa -80 oC:n pakastimessa ja niitä voidaan myöhemmin käyttää geneettiseen testaukseen, mukaan lukien seuraavan sukupolven ja koko genomin sekvensointi. Tällainen syvä sekvensointi antaa meille mahdollisuuden arvioida geneettisiä muutoksia, joita voi esiintyä immuunisolujen fenotyyppisten muutosten rinnalla.

Näistä näytteistä kerätään myös plasmaa verenkiertotekijöiden arvioimiseksi, ja ne arvioidaan kaupallisesti saatavilla olevilla sarjoilla.

Näytteiden säilytys ja siirto

Tutkija, tohtori Alice Christensen ottaa verinäytteitä Barts Heart Centrestä, jossa sydämen MRI:t tehdään. Näytteitä säilytetään NHS:n jääkaapissa laboratorioon siirtämiseen asti. Barts Heart Center on enintään kymmenen minuutin kävelymatkan päässä William Harvey Research Institutesta, jossa laboratorio sijaitsee. Tohtori Christensen siirtää näytteet laboratorioon turvallisilla näytesiirtolaatikoilla, jotka tuodaan laboratorioon. Kaikki verinäytteet käsitellään tunnin sisällä keräämisestä.

Turvallisuusraportointi

Tämän tutkimuksen havainnointiluonteen ja suunnittelun vuoksi haittatapahtumien turvallisuusraportointia ei tapahdu.

Valvonta ja auditointi

Sponsorilla tai edustajalla on oikeus tarkastaa mitä tahansa tutkimusta, tutkimuspaikkaa tai keskusyksikköä. Lisäksi rahoittajat voivat tarvittaessa tarkastaa tutkimuksen minkä tahansa osan.

Paikan päällä tapahtuva seuranta suoritetaan tutkimusseurantasuunnitelman mukaisesti. Seuranta sisältää lähdetietojen todentamisen.

Keskuksen seurannan voi suorittaa koulutettu tutkimusmonitori tai -seuraajat tutkimusasiakirjojen tarkistamiseksi.