Funkce srdečních a imunitních buněk u preeklampsie

Studovat design

Celkovým cílem klinické observační studie je zjistit, zda fenotyp prozánětlivých imunitních buněk pozorovaný u žen s preeklampsií (PE) může korelovat se srdeční funkcí během a po těhotenství a v poporodním období.

Studijní tým se bude skládat z Dr Alice Christensen (PhD kandidát), která bude souhlasit s pacienty ve studijní skupině a provede klinické a laboratorní aspekty studie; Dr. Suchita Nadkarni (primární supervizor), který bude dohlížet a školit Dr. Christensena ve všech základních vědeckých aspektech studie; Profesor Steve Thornton a Dr. Elena Greco (klinická supervizorka), kteří budou vedoucími porodníků ve studii; Konzultanty kardiologů budou Dr. Neha Sekhri, která bude primárním kontaktem pro jakékoli srdeční problémy, Dr. Anna Herrey, která bude dohlížet na analýzy zobrazovacích aspektů studie, a Dr. Kate Von Klemperer, která bude ve spojení s Dr. Christensenem a bude mu radit v The Royal London. a Barts Hospitals ohledně echokardiografie (echo). Za tímto účelem bude z The Royal London Hospital přijato přibližně 100 těhotných žen.

Studovaná populace se bude skládat ze 3 skupin:

1. Preeklamptičtí pacienti (34 pacientů)
2. Těhotenstvím indukovaná hypertenze (PIH; 33 pacientů)
3. Zdravé těhotné ženy (33)

Normotenzní pacientky a pacientky s PIH budou z hlediska gestačního věku shodné s pacientkami s PE. Echokardiografické a nekontrastní kardiovaskulární magnetické rezonance (CMR) budou provedeny u všech pacientek ve studii po zařazení a 3 měsíce po porodu za předpokladu, že do té doby budou vyřešeny jakékoli fyziologické kardiovaskulární změny související s těhotenstvím. Doktorka Anna Herrey - přední odbornice na CMR u těhotných žen bude dohlížet na analýzy obrazu ve studii. Dr. Herrey nedávno publikoval článek nastiňující bezpečnost provádění CMR u těhotných žen a srovnávací rozlišení bez použití kontrastu gadolinia (Herrey et al 2019). Srdeční funkce bude hodnocena echokardiografickým vyšetřením měřícím ejekční frakci, napětí a diastolickou funkci (a také rychlost pulzové vlny). Charakteristiky tkáně myokardu budou hodnoceny pomocí nekontrastní CMR (mapování T1 a T2 a úplné volumetrické hodnocení, zlatý standard pro analýzu funkce LK (Bellenger a kol. 2000 a Grothues a kol. 2002)). Každý pacient ve studijní skupině, který prokáže abnormální srdeční změny 3 měsíce po porodu, bude odeslán k Dr. Sekhri na 6měsíční sledování (v tomto časovém bodě pod péčí NHS). Všechna vyšetření srdce budou prováděna ambulantně v Bartsově nemocnici s výjimkou žen s těžkou PE, kde bude echokardiografie prováděna u lůžka při přijetí na oddělení. Tyto ženy tedy nebudou mít při zápisu studie CMR, ale budou pozvány, aby se zúčastnily tříměsíčního sledování pro CMR a echokardiografické studie.

Pacientům budou odebrány časově přizpůsobené krevní vzorky pro posouzení fenotypů imunitních buněk. Vzorky plazmy budou odebrány pro analýzy srdečních specifických faktorů (BNP, troponin) a také pro měření steroidních hormonů (progesteron a estradiol) a rozpustných zánětlivých a protizánětlivých mediátorů. Aby se omezilo zkreslení v rámci studie, budou všechny analýzy obrazu CMR (provedené Dr. Herreyem) zaslepeny. Dr. Sekhri bude k dispozici pro druhé hlášení pro posouzení variability studií CMR mezi pozorovateli. Pokud by se objevil jakýkoli rozdíl mezi časným a pozdním nástupem PE (PE, která se rozvine před a po 34. týdnu těhotenství, v tomto pořadí), podskupiny budou analyzovány v rámci skupiny PE. Tato počáteční pilotní studie poskytne informace o výpočtech výkonu pro další studie u časného a pozdního nástupu onemocnění.

Studijní postupy

Následné postupy

Všichni pacienti přijatí do studie, s výjimkou pacientů s těžkou PE, budou sledováni jako ambulantní pacienti v The Royal London a budou požádáni, aby se zúčastnili návštěvy nemocnice v Barts Hospital kvůli studiím CMR.

Odstoupení účastníka

Účastníci budou mít možnost podat písemnou žádost o stažení ze zkoušky v jakékoli fázi. Účastníci budou mít také možnost odvolat souhlas s další účastí, v případě, že nebudou shromažďovány žádné další údaje pro zařazení. V případě, že účastník ztratí kapacitu, budou shromážděné informace nadále používány, ale nebudou zaznamenány žádné další údaje.

Vyšetřovatelé se také zeptají účastníků, zda si mohou ponechat své kontaktní údaje, aby je mohli kontaktovat, aby se zúčastnili budoucího výzkumu souvisejícího s aktuální studií. Tato žádost bude dotázána na formuláři souhlasu.

Definice konce studia

Konec studie bude definován dosažením navrhovaného počtu pacientů na skupinu pacientů (viz výše).

Statistické úvahy

Vzhledem k tomu, že se bude jednat o pilotní studii, nemohou vyšetřovatelé provádět výpočty výkonu na počtu potřebných pacientů. počty pro každou skupinu pacientů byly zvoleny na základě realistického počtu pacientů, o kterých se domnívají, že mohou být přijati během počátečního období 1 roku a následných následných studií na těchto pacientech.

Metoda analýzy

S podporou našeho místního bioinformatického a biologického úložiště NIHR (http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository) bude několik parametrů analyzováno pomocí více skupinová srovnání (ANOVA) pro zvýšení výkonu. Aby se omezilo zkreslení v rámci studie, všechny analýzy obrazu CMR (provedené Dr. Herrey a Dr. Sekhri) budou zaslepeny a bude měřena variabilita mezi pozorovateli.

Výzkumníci použijí průtokovou cytometrii k analýze fenotypu imunitních buněk. Jedná se o zavedenou metodu. Laboratoř doktora Nadkarniho má přístup k základnímu zařízení pro průtokovou cytometrii, které má stroje, které dokážou identifikovat až 12 fenotypových markerů na jakékoli dané buňce. Dr. Nadkarni, hlavní řešitel, a její skupina mají navíc rozsáhlé zkušenosti s fenotypizací imunitních buněk pomocí této metody. Hlavní výhody jsou:

1. Je to zlatý standard pro fenotypizaci imunitních buněk
2. Je potřeba minimální množství krve (max 200 μls)
3. Protilátky jsou komerčně dostupné a byly rozsáhle ověřeny námi i ostatními
4. Dr. Nadkarni vyvinul vysoce výkonnou metodu pro analýzu mnoha vzorků najednou, čímž minimalizuje chyby při manipulaci

Všechny vzorky budou zpracovány a analyzovány do 1 hodiny po odběru vzorku, aby se minimalizovala degradace proteinů na povrchu imunitních buněk.

Výzkumníci také navrhují podívat se na cirkulující faktory v plazmě a to bude provedeno pomocí komerčně dostupných souprav ELISA.

Primárním cílem bude určit, zda existuje korelace mezi aberantními fenotypy imunitních buněk a abnormální srdeční funkcí v naší kohortě pacientů s preeklampsií ve srovnání s normálními zdravými a PIH skupinami. Dále budou provedeny analýzy k nalezení statisticky významných srdečních funkčních a fenotypových rozdílů mezi našimi preeklamptickými a PIH pacientskými kohortami, což zlepší naše chápání srdeční funkce mezi skupinami pacientů.

Etika

Přihláška do aktuální studie čeká po odeslání. Informovaný souhlas bude získán a zaznamenán, jak je popsáno výše. Povolenky pro zvláštní skupiny jsou podrobně popsány výše.

Náhodné nálezy

Pokud by se v průběhu studie objevily jakékoli náhodné nálezy klinického významu, bude o tom informován praktický lékař účastníků a tým klinické péče. Souhlas s kontaktováním praktického lékaře bude požadován během procesu zápisu.

Roční bezpečnostní zprávy

KI zašle výroční zprávu o pokroku EK a zadavateli pomocí šablony HRA v den výročí „příznivého stanoviska EK“.

Správa dat

Všechna vygenerovaná data budou uložena v excelové tabulce kombinující klinická a laboratorní data. Tabulka bude chráněna heslem uložená na zabezpečeném pevném disku v chráněném počítači. Přístup k heslu a údajům bude na základě striktní potřeby vědět. Bude zavedena úplná auditní stopa.

Zdrojová data

Zdrojová data pro tuto studii budou obsahovat počáteční diagnózy preeklampsie nebo těhotenstvím indukované hypertenze, které budou získány od týmu porodnické péče, který vede Dr. Elena Greco z Royal London. Ty budou ve formě výsledků krevních testů a/nebo skenovaných snímků těhotenství.

Následnými zdrojovými daty budou CMR snímky pořízené v počátečním časovém bodě (diagnózy preeklampsie a gestační věkově odpovídající kontroly) a následná data CMR snímků ve 2. časovém bodě studie (3 měsíce po porodu). Kromě CMR snímků budou zdrojová data získávána také z laboratorních fenotypizací krevních vzorků odebraných pacientům ve výše uvedených časových bodech.

Ke zdrojovým datům budou mít přístup badatelé, kteří jsou přímo zapojeni do studie. V některých případech, kdy je to pro pacienta a jeho pokračující péči považováno za nejlepší, mohou lékaři požádat o radu jiné odborníky, což může vyžadovat jejich přístup ke zdrojovým datům.

Důvěrnost

Vyšetřovatelé provedou pseudorandomizaci, kdy je možné pacienta identifikovat pouze podle čísla nemocnice. Protože se bude jednat o navazující studii, vyšetřovatelé budou muset pacienta propojit, takže tato studie nebude zcela anonymizována.

Uchovávání a archivace záznamů

Údaje studie a dokumentace budou archivovány v souladu s příslušnými regulačními požadavky a SOP lokality.

Na začátku studie bude každému účastníkovi přidělen jedinečný alfanumerický identifikátor pacienta. Data budou uložena pomocí jedinečných identifikátorů účastníků v zabezpečené databázi. Data nebudou uložena na osobních počítačích. Důvěrné dokumenty budou uloženy v uzamčené skříni umístěné v zabezpečené místnosti. Klinické poznámky budou zpracovány podle protokolu důvěry. Během této studie bude dodržován zákon o ochraně osobních údajů a kodex důvěrnosti NHS. Data mohou být sdílena se členy klinického týmu, aby byla umožněna průběžná klinická péče.

Pokyny GCP vyžadují, aby zkoušející nebo instituce uchovávali všechny formuláře pro hlášení případů a všechny zdrojové dokumenty, které podporují data shromážděná od každého účastníka, a veškerou dokumentaci studie. Budou přijata opatření, která zabrání náhodnému nebo předčasnému zničení těchto dokumentů. Základní dokumenty musí být uchovávány po dobu nejméně 20 let. Je odpovědností zadavatele informovat zkoušejícího, když tyto dokumenty již není třeba uchovávat. Pokud odpovědný vyšetřovatel odejde nebo opustí instituci, odpovědnost za dokumentaci musí být převedena na osobu, která převezme jeho opatrovnictví

Příprava a odběr vzorků

Vzorky krve k posouzení fenotypů imunitních buněk budou odebrány pacientům, kteří si přečetli informační list a podepsali formulář souhlasu. v den MRI srdce. Pacientovi bude kdykoli odebrán maximální objem 15 ml a odebrán do zkumavek s citrátem sodným.

Laboratorní postupy

Většina vzorků krve bude podrobena fenotypové analýze pomocí metody průtokové cytometrie. Stručně řečeno, 50 mikrolitrů krve bude označeno komerčně dostupnými protilátkami, které jsou konjugovány s flurochromy, které lze detekovat lasery na průtokovém cytometru. Specializovaný software umožní analýzy hodnocení fenotypových markerů, které jsou exprimovány na imunitních buňkách.

Vzorky budou také izolovány pro specifickou imunitní buňku včetně neutrofilů a T-buněk, které budou uloženy v bezpečném mrazáku -80oC a mohou být následně použity pro genetické testování, včetně sekvenování nové generace a celého genomu. Takové hluboké sekvenování nám umožní posoudit genetické změny, které se mohou objevit vedle fenotypových změn v imunitních buňkách.

Z těchto vzorků bude také odebrána plazma pro posouzení cirkulujících faktorů, které budou hodnoceny komerčně dostupnými soupravami.

Uložení a přenos vzorku

Vzorky krve odebere výzkumná pracovnice Dr. Alice Christensen v Barts Heart Center, kde se mají provádět magnetická rezonance srdce. Vzorky budou až do přesunu do laboratoře uchovávány v chladničce NHS. Barts Heart Center je maximálně deset minut chůze od William Harvey Research Institute, kde sídlí laboratoř. Dr. Christensen přenese vzorky do laboratoře pomocí bezpečných přepravních boxů na vzorky, které mají být přeneseny do laboratoře. Všechny vzorky krve budou zpracovány do jedné hodiny od odběru.

Bezpečnostní hlášení

Vzhledem k observační povaze a uspořádání této studie nedojde k bezpečnostnímu hlášení nežádoucích účinků.

Monitorování a auditování

Sponzor nebo delegát si vyhrazuje právo provádět audit jakékoli studie, studijního místa nebo centrálního zařízení. Kromě toho může být jakákoli část studie v případě potřeby kontrolována sponzory.

Monitorování na místě bude prováděno podle plánu monitorování studie. Součástí monitoringu bude ověření zdrojových dat.

Monitorování centra může být prováděno vyškoleným monitorem studie nebo monitory, aby ověřili dokumentaci studie.