자간전증의 심장 및 면역 세포 기능

연구 설계

임상 관찰 연구의 전반적인 목적은 자간전증(PE)이 있는 여성에서 관찰되는 전염증성 면역 세포 표현형이 임신 중 및 산후 및 산후 기간의 심장 기능과 상관관계가 있는지 여부를 결정하는 것입니다.

연구 팀은 연구 그룹 내에서 환자의 동의를 얻고 연구의 임상 및 실험실 측면을 수행할 Alice Christensen 박사(박사 후보)로 구성됩니다. 연구의 모든 기초 과학 측면에서 Christensen 박사를 감독하고 교육할 Suchita Nadkarni 박사(주 감독관); 이 연구에서 산부인과를 이끌 Steve Thornton 교수와 Elena Greco 박사(임상 감독관); 컨설턴트 심장 전문의는 모든 심장 문제에 대한 주요 연락을 담당할 Dr Neha Sekhri, 연구의 이미징 측면 분석을 감독할 Anna Herrey 박사, The Royal London의 Christensen 박사와 연락하고 조언을 제공할 Kate Von Klemperer 박사를 포함합니다. 심초음파(에코)에 관한 Barts 병원. 이를 위해 Royal London Hospital에서 약 100명의 임산부를 모집할 예정입니다.

연구 모집단은 3개 그룹으로 구성됩니다.

1. 자간전증 환자(34명)
2. 임신성 고혈압(PIH; 33명)
3. 건강한 임산부 (33)

정상혈압 및 PIH 환자는 임신 주수에 대해 PE 환자와 일치됩니다. 심초음파 및 비조영 심혈관 자기 공명(CMR) 연구는 임신과 관련된 모든 생리적 심혈관 변화가 그때까지 해결될 것이라는 가정하에 등록 시 및 산후 3개월에 연구의 모든 환자에서 수행될 것입니다. 임산부의 CMR 분야의 선도적인 전문가인 Anna Herrey 박사는 연구에서 이미지 분석을 감독할 것입니다. Dr Herrey는 최근 임산부에서 CMR을 수행하는 안전성과 가돌리늄 조영제를 사용하지 않는 비교 해상도를 설명하는 논문을 발표했습니다(Herrey et al 2019). 심장 기능은 심박출률, 변형 및 확장기 기능(맥파 속도도 포함)을 측정하는 심초음파 검사로 평가됩니다. 심근 조직 특성은 비조영 CMR로 평가될 것입니다(T1 및 T2 매핑 및 전체 체적 평가, 좌심실 기능 분석의 황금 표준(Bellenger et al 2000 및 Grothues et al 2002)). 산후 3개월에 비정상적인 심장 변화를 보이는 연구 그룹 내의 모든 환자는 6개월 후속 조치를 위해 Sekhri 박사에게 의뢰됩니다(이 시점에서 NHS 관리 하에). 모든 심장 스캔은 심초음파가 병동 입원 시 침대 옆에서 수행되는 심한 PE가 있는 여성을 제외하고 Barts 병원에서 외래 환자로 수행됩니다. 따라서 이 여성들은 등록 시 CMR 연구를 받지 않지만 CMR 및 심초음파 연구를 위해 3개월 후 후속 조치에 참석하도록 초대됩니다.

면역 세포 표현형을 평가하기 위해 환자로부터 시간 일치 혈액 샘플을 채취합니다. 심장 특이 인자(BNP, 트로포닌) 분석과 스테로이드 호르몬(프로게스테론 및 에스트라디올), 용해성 염증 및 항염증 매개체 측정을 ​​위해 혈장 샘플을 수집합니다. 연구 내 편향을 제한하기 위해 모든 CMR 이미지 분석(Dr Herrey 수행)은 눈이 멀게 됩니다. Sekhri 박사는 CMR 연구의 관찰자 간 가변성을 평가하기 위해 두 번째 보고에 사용할 수 있습니다. 조기 발병 PE와 후기 발병 PE(각각 임신 34주 전후에 발생하는 PE) 사이에 차이가 분명해지면 하위 그룹은 PE 그룹 내에서 분석됩니다. 이 초기 파일럿 연구는 초기 및 후기 발병 질병에 대한 추가 연구를 위한 검정력 계산을 알려줄 것입니다.

연구 절차

후속 절차

중증 PE를 제외한 연구에 모집된 모든 환자는 The Royal London에서 외래 환자로 후속 조치를 취하고 CMR 연구를 위해 Barts 병원의 병원 방문에 참석하도록 요청받을 것입니다.

참가자 탈퇴

참가자는 어느 단계에서든 임상시험 철회 요청을 서면으로 제출할 수 있습니다. 참여자는 또한 포함을 위해 추가 데이터가 수집되지 않는 상황에서 추가 참여에 대한 동의를 철회할 수 있습니다. 불행하게도 참가자가 용량을 상실한 경우 수집된 정보는 계속 사용되지만 더 이상의 데이터는 기록되지 않습니다.

조사관은 또한 조사관이 현재 연구와 관련된 향후 연구에 참여하기 위해 연락할 수 있도록 연락처 정보를 유지할 수 있는지 참가자에게 물어볼 것입니다. 이 요청은 동의서에 요청됩니다.

연구 종료 정의

연구의 끝은 환자 그룹당 제안된 환자 수(위에 요약됨)를 달성함으로써 정의됩니다.

통계적 고려 사항

이것은 파일럿 연구이므로 조사관은 필요한 환자 수에 대한 검정력 계산을 수행할 수 없습니다. 각 환자 그룹의 숫자는 초기 1년 동안 모집할 수 있다고 믿는 실제 환자 수와 이러한 환자에 대한 후속 후속 연구를 기반으로 선택되었습니다.

분석 방법

현지 NIHR 생물 정보학 및 생물 저장소 시설(http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository)의 지원으로 여러 매개변수가 여러 사용하여 분석됩니다. 검정력을 높이기 위한 그룹 비교(ANOVA). 연구 내 편향을 제한하기 위해 모든 CMR 이미지 분석(Herrey 박사와 Sekhri 박사가 수행)은 눈이 멀고 관찰자 간 변동성이 측정됩니다.

조사관은 면역 세포 표현형을 분석하기 위해 유동 세포 계측법을 사용할 것입니다. 이것은 잘 정립된 방법입니다. Nadkarni 박사의 연구실은 주어진 세포에서 12개의 표현형 마커를 식별할 수 있는 기계가 있는 유세포 분석 핵심 시설에 접근할 수 있습니다. 또한 수석 연구원인 Nadkarni 박사와 그녀의 그룹은 이 방법을 사용한 면역 세포 표현형 분석에 광범위한 경험을 가지고 있습니다. 주요 이점은 다음과 같습니다.

1. 이것은 면역 세포 표현형 분석을 위한 황금 표준입니다.
2. 최소량의 혈액이 필요합니다(최대 200μl).
3. 항체는 상업적으로 이용 가능하며 우리 자신과 다른 사람들에 의해 광범위하게 검증되었습니다.
4. Nadkarni 박사는 한 번에 많은 샘플을 분석하여 처리 오류를 최소화하는 고처리량 방법을 개발했습니다.

모든 샘플은 면역 세포 표면의 단백질 분해를 최소화하기 위해 샘플 수집 후 1시간 이내에 처리 및 분석됩니다.

조사관은 또한 혈장의 순환 인자를 조사할 것을 제안하고 이것은 상업적으로 이용 가능한 ELISA 키트를 사용하여 수행될 것입니다.

1차 종점은 정상적인 건강한 그룹과 PIH 그룹과 비교하여 자간전증 환자 코호트 내 비정상적인 면역 세포 표현형과 비정상적인 심장 기능 사이에 상관관계가 있는지 여부를 결정하는 것입니다. 또한 자간전증 및 PIH 환자 코호트 간의 통계적으로 유의미한 심장 기능 및 표현형 차이를 찾기 위해 분석을 수행하여 환자 그룹 간의 심장 기능에 대한 이해를 향상시킬 것입니다.

윤리학

현재 연구에 대한 신청은 제출 후 보류 중입니다. 위에서 설명한 대로 정보에 입각한 동의를 얻고 기록합니다. 특수 그룹에 대한 수당은 위에 자세히 설명되어 있습니다.

부수적 발견

연구 과정 중에 임상적으로 중요한 부수적인 결과가 발생하면 참가자 GP와 임상 치료 팀에게 알립니다. 등록 과정에서 GP에게 연락하는 것에 대한 동의를 구할 것입니다.

연간 안전 보고

CI는 REC "호의적인 의견" 기념일에 HRA 템플릿을 사용하여 REC와 스폰서에게 연간 경과 보고서를 보냅니다.

데이터 관리

생성된 모든 데이터는 임상 및 실험실 데이터를 결합한 Excel 스프레드시트 내에 저장됩니다. 스프레드시트는 보호된 컴퓨터의 보안 하드 드라이브에 암호로 보호되어 저장됩니다. 암호 및 데이터에 대한 액세스는 반드시 알아야 할 필요성에 따라 이루어집니다. 전체 감사 추적이 이루어집니다.

소스 데이터

이 연구의 소스 데이터는 자간전증 또는 임신으로 인한 고혈압의 초기 진단으로 구성되며, 이는 Royal London의 Elena Greco 박사가 이끄는 산부인과 진료 팀에서 얻을 것입니다. 이것은 혈액 검사 결과 및/또는 임신의 스캔 이미지의 형태가 될 것입니다.

후속 원본 데이터는 초기 시점(자간전증 및 임신 연령 일치 대조군의 진단)에서 촬영한 CMR 영상과 연구의 두 번째 시점(출산 후 3개월)에서 후속 CMR 영상 데이터가 될 것입니다. CMR 이미지 외에도 위에서 언급한 시점에서 환자로부터 채취한 혈액 샘플의 실험실 표현형 분석에서 원본 데이터를 얻을 수 있습니다.

연구에 직접 관련된 조사자는 소스 데이터에 액세스할 수 있습니다. 환자와 지속적인 치료에 최선이라고 판단되는 경우 임상의는 소스 데이터에 대한 액세스가 필요할 수 있는 다른 전문가의 조언을 구할 수 있습니다.

기밀성

조사관은 환자가 병원 번호로만 식별할 수 있는 의사 무작위화를 수행합니다. 이것은 후속 연구가 될 것이기 때문에 조사관은 환자를 연결해야 하므로 이 연구는 완전히 익명으로 처리되지 않습니다.

기록 보존 및 보관

연구 데이터 및 문서는 관련 규제 요건 및 현장 SOP에 따라 보관됩니다.

연구 시작 시 각 참가자에게 고유한 영숫자 환자 식별자가 할당됩니다. 데이터는 보안 데이터베이스에 고유한 참가자 식별자를 사용하여 저장됩니다. 데이터는 개인용 컴퓨터에 저장되지 않습니다. 기밀 문서는 보안실에 있는 잠긴 찬장에 보관됩니다. 임상 기록은 신뢰 프로토콜에 따라 처리됩니다. 데이터 보호법 및 NHS 기밀성 실행 강령은 본 연구 전반에 걸쳐 준수될 것입니다. 진행 중인 임상 치료를 위해 임상 팀원과 데이터를 공유할 수 있습니다.

GCP 가이드라인에서는 조사자 또는 기관이 모든 사례 보고서 양식과 각 참여자로부터 수집된 데이터를 지원하는 모든 소스 문서와 모든 시험 문서를 유지 관리할 것을 요구합니다. 이러한 문서의 우발적 또는 조기 폐기를 방지하기 위한 조치가 취해질 것입니다. 필수 문서는 최소 20년 동안 보관해야 합니다. 이러한 문서를 더 이상 보관할 필요가 없을 때 조사자에게 알리는 것은 후원자의 책임입니다. 담당 조사관이 은퇴하거나 기관을 떠나는 경우 문서에 대한 책임은 그들의 양육권을 수락할 사람에게 이전되어야 합니다.

샘플 준비 및 수집

면역 세포 표현형을 평가하기 위한 혈액 샘플은 정보 시트를 읽고 동의서에 서명한 환자로부터 수집됩니다. 심장 MRI 당일. 환자에게서 한 번에 최대 15ml를 채취하여 구연산 나트륨 튜브에 수집합니다.

실험실 절차

대부분의 혈액 샘플은 유세포 분석법을 사용하여 표현형 분석을 거칩니다. 간단히 말해, 혈액 50마이크로리터는 유세포 분석기의 레이저로 감지할 수 있는 형광색소에 결합된 상업적으로 이용 가능한 항체로 라벨링됩니다. 특화된 소프트웨어는 면역 세포에서 발현되는 표현형 마커의 평가 분석을 가능하게 합니다.

샘플은 또한 호중구 및 T 세포를 포함한 특정 면역 세포에 대해 분리되며 안전한 -80oC 냉동고에 보관되고 이후 차세대 및 전체 게놈 시퀀싱을 포함한 유전자 검사에 사용될 수 있습니다. 이러한 딥 시퀀싱을 통해 면역 세포의 표현형 변화와 함께 발생할 수 있는 유전적 변화를 평가할 수 있습니다.

시중에서 구할 수 있는 키트로 평가할 순환 요인을 평가하기 위해 이러한 샘플에서 혈장도 수집됩니다.

시료 보관 및 이송

혈액 샘플은 심장 MRI가 수행되는 Barts Heart Centre의 연구원인 Alice Christensen 박사가 채취합니다. 샘플은 실험실로 옮길 때까지 NHS 냉장고에 보관됩니다. Barts Heart Center는 연구소가 위치한 William Harvey 연구소에서 도보로 최대 10분 거리에 있습니다. 샘플은 보안 샘플 전송 상자를 사용하여 Dr Christensen에 의해 실험실로 옮겨질 것입니다. 모든 혈액 샘플은 수집 후 1시간 이내에 처리됩니다.

안전 보고

이 연구의 관찰적 특성과 설계로 인해 부작용에 대한 안전성 보고는 발생하지 않습니다.

모니터링 및 감사

후원자 또는 대리인은 모든 연구, 연구 장소 또는 중앙 시설을 감사할 권리를 보유합니다. 또한 연구의 모든 부분은 해당되는 경우 기금 제공자가 감사할 수 있습니다.

현장 모니터링은 연구 모니터링 계획에 따라 수행됩니다. 모니터링에는 소스 데이터 확인이 포함됩니다.

센터 모니터링은 연구 문서를 확인하기 위해 훈련된 연구 모니터 또는 모니터에 의해 수행될 수 있습니다.