Szív- és immunsejtek működése preeclampsiában

Dizájnt tanulni

A klinikai megfigyeléses vizsgálat átfogó célja annak megállapítása, hogy a preeclampsiában (PE) szenvedő nőknél megfigyelt gyulladást elősegítő immunsejt-fenotípus összefüggésbe hozható-e a szívműködéssel a terhesség alatt és után, valamint a szülés utáni időszakban.

A vizsgálati csoport Dr. Alice Christensenből (PhD jelölt) áll majd, aki beleegyezik a vizsgálati csoportba tartozó betegekbe, és elvégzi a vizsgálat klinikai és laboratóriumi vonatkozásait; Dr. Suchita Nadkarni (elsődleges témavezető), aki felügyeli és képezi Dr. Christensent a tanulmány minden alapvető tudományos vonatkozásában; Prof Steve Thornton és Dr. Elena Greco (klinikai felügyelők), akik a vizsgálat szülészeti vezetői lesznek; A kardiológus tanácsadók között lesz Dr. Neha Sekhri, aki minden szívproblémával kapcsolatban az elsődleges kapcsolattartó lesz, Dr. Anna Herrey, aki felügyeli a vizsgálat képalkotó vonatkozású elemzéseit, valamint Dr. Kate Von Klemperer, aki kapcsolatot tart majd Dr. Christensennel és tanácsot ad majd neki a The Royal Londonban. és a Barts Hospitals az echokardiográfiával (echo) kapcsolatban. Ennek érdekében ~100 terhes nőt toboroznak a The Royal London Hospital-ból.

A vizsgált populáció 3 csoportból áll:

1. Preeclampsiás betegek (34 beteg)
2. Terhesség által kiváltott magas vérnyomás (PIH; 33 beteg)
3. Egészséges terhes nők (33)

Normotenzív és PIH betegeket a terhességi kor szerint egyeztetnek a PE betegekkel. Echokardiográfiás és nem kontrasztos kardiovaszkuláris mágneses rezonancia (CMR) vizsgálatokat végeznek a vizsgálatban részt vevő összes betegnél a felvételkor és 3 hónappal a szülés után, feltételezve, hogy a terhességgel összefüggő fiziológiás kardiovaszkuláris változások addigra rendeződnek. Dr. Anna Herrey – a terhes nők CMR-jének vezető szakértője – felülvizsgálja a tanulmány képelemzését. Dr. Herrey a közelmúltban publikált egy tanulmányt, amely felvázolja a CMR-vizsgálat terhes nőknél történő biztonságosságát és a gadolínium kontraszt alkalmazása nélküli összehasonlító felbontást (Herrey et al 2019). A szívműködést echokardiográfiás vizsgálattal értékelik, amely az ejekciós frakciót, a feszültséget és a diasztolés funkciót (valamint a pulzushullám sebességét) méri. A szívizom szöveti jellemzőit nem kontrasztos CMR-rel (T1 és T2 feltérképezéssel és teljes volumetrikus értékeléssel, a bal kamrai funkcióelemzés aranystandardjaként (Bellenger et al 2000 és Grothues et al 2002)) értékelik. A vizsgálati csoport minden olyan betegét, akinél kóros szívelváltozások mutatkoznak a szülés utáni 3 hónapban, Dr. Sekhrihez kell utalni egy 6 hónapos nyomon követésre (ebben az időpontban az NHS felügyelete alatt). Minden szívvizsgálatot ambulánsan végeznek el a Barts Kórházban, kivéve a súlyos PE-ben szenvedő nőket, akiknél az echokardiográfiát az ágy mellett, az osztályra való felvételkor végzik el. Így ezeknek a nőknek a beiratkozáskor nem végeznek CMR-vizsgálatot, de meghívást kapnak a 3 hónapos utánkövetésre a CMR és az echokardiográfiás vizsgálatok céljából.

Időben egyeztetett vérmintákat vesznek a betegektől az immunsejtek fenotípusának felmérésére. A szívspecifikus faktorok (BNP, troponin), valamint a szteroid hormonok (progeszteron és ösztradiol), valamint az oldható gyulladásos és gyulladásgátló mediátorok mérésére plazmamintákat veszünk. A tanulmányon belüli torzítás korlátozása érdekében az összes CMR-képelemzést (Dr. Herrey végezte) vakon végezzük. Dr. Sekhri elérhető lesz a második jelentéshez, hogy felmérje a CMR-vizsgálatok megfigyelőközi variabilitását. Ha bármilyen különbség nyilvánvalóvá válik a korai és késői kezdetű PE (PE, amely a 34 hetes terhesség előtt, illetve után alakul ki) között, az alcsoportokat a PE csoporton belül elemzik. Ez a kezdeti kísérleti tanulmány a korai és késői betegséggel kapcsolatos további vizsgálatok teljesítményszámításaihoz nyújt tájékoztatást.

Tanulmányi eljárások

Nyomon követési eljárások

A vizsgálatba bevont összes beteget, kivéve a súlyos PE-ben szenvedőket, ambulánsként követik nyomon a The Royal Londonban, és felkérik őket, hogy vegyenek részt a Barts Kórház kórházi látogatásán a CMR-vizsgálatok céljából.

Résztvevő visszavonása

A résztvevőknek lehetőségük van írásos kérelmet benyújtani a tárgyalás bármely szakaszában történő visszavonására. A résztvevőknek lehetőségük van a további részvételhez adott hozzájárulásukat visszavonni, amely körülmény esetén a felvételhez nem gyűjtenek további adatokat. Abban a sajnálatos esetben, ha egy résztvevő elveszíti kapacitását, az összegyűjtött információkat továbbra is felhasználjuk, de további adatokat nem rögzítünk.

A vizsgálók azt is megkérdezik a résztvevőktől, hogy megőrizhetik-e elérhetőségeiket, hogy a nyomozók felvehessék velük a kapcsolatot, hogy részt vegyenek a jelenlegi vizsgálattal kapcsolatos jövőbeli kutatásokban. Ezt a kérelmet a hozzájárulási űrlapon kell feltenni.

A tanulmány végének meghatározása

A vizsgálat végét a (fentebb vázolt) betegcsoportonként javasolt betegszámok elérése határozza meg.

Statisztikai megfontolások

Mivel ez egy kísérleti vizsgálat lesz, a kutatók nem tudnak teljesítményszámításokat végezni a szükséges betegek számáról. az egyes betegcsoportokhoz tartozó számokat azon betegek reális száma alapján választották ki, akikről úgy gondolják, hogy a kezdeti 1 éves időszakban toborozhatók, és az ezekkel a betegekkel végzett későbbi követési vizsgálatok alapján.

Az elemzés módszere

Helyi NIHR bioinformatikai és biotároló létesítményünk (http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository) támogatásával több paramétert is elemeznek majd többszörös felhasználással. csoportos összehasonlítások (ANOVA-k) a teljesítmény növelése érdekében. A tanulmányon belüli torzítás korlátozása érdekében az összes (Dr. Herrey és Dr. Sekhri által végzett) CMR-képelemzést vakok, és a megfigyelők közötti variabilitást mérik.

A kutatók áramlási citometriát fognak használni az immunsejtek fenotípusának elemzésére. Ez egy jól bevált módszer. Dr. Nadkarni laboratóriumának hozzáférése van egy áramlási citometrikus maghoz, amely olyan gépekkel rendelkezik, amelyek 12 fenotípusos markert képesek azonosítani bármely adott sejten. Ráadásul Dr. Nadkarni, a főkutató és csoportja széles körű tapasztalattal rendelkezik az immunsejtek fenotipizálásában ezzel a módszerrel. A legfontosabb előnyök a következők:

1. Az immunsejtek fenotipizálásának aranystandardja
2. Minimális mennyiségű vérre van szükség (maximum 200 μl)
3. Az antitestek kereskedelmi forgalomban beszerezhetők, és mi magunk és mások széles körben validáltuk őket
4. Dr. Nadkarni kifejlesztett egy nagy áteresztőképességű módszert több minta egyidejű elemzésére, ezáltal minimalizálva a kezelési hibákat

Az összes mintát a mintavételt követő 1 órán belül feldolgozzák és elemzik, hogy minimalizálják a fehérjék lebomlását az immunsejtek felszínén.

A kutatók azt is javasolják, hogy vizsgálják meg a plazmában keringő faktorokat, és ezt a kereskedelemben kapható ELISA készletekkel fogják elvégezni.

Az elsődleges végpont annak meghatározása lesz, hogy van-e összefüggés az aberráns immunsejt-fenotípusok és a kóros szívműködés között a preeclampsiás betegcsoportunkon belül, összehasonlítva a normál egészséges és PIH csoportokkal. Ezen túlmenően elemzéseket végzünk, hogy statisztikailag szignifikáns szívműködési és fenotípusos különbségeket találjunk preeklampsiás és PIH betegcsoportjaink között, ami javítani fogja a szívműködés megértését a betegcsoportok között.

Etika

A jelenlegi tanulmányra való jelentkezés a benyújtást követően függőben van. A tájékozott beleegyezés megszerzése és rögzítése a fent leírtak szerint történik. A speciális csoportok juttatásait fent részletezzük.

Véletlen leletek

Ha a vizsgálat során bármilyen klinikai jelentőségű véletlenszerű lelet merül fel, a résztvevő háziorvost és a klinikai gondozási csoportot tájékoztatni kell. A beiratkozás során kérik a háziorvossal való kapcsolatfelvételhez való hozzájárulást.

Éves biztonsági jelentés

A CI a HRA-sablon használatával éves előrehaladási jelentést küld a REC-nek és a szponzornak a REC „kedvező véleményének” évfordulóján.

Adatkezelés

Az összes generált adatot egy Excel-táblázatban tároljuk, amely kombinálja a klinikai és laboratóriumi adatokat. A táblázatot jelszóval védjük, biztonságos merevlemezen tároljuk egy védett számítógépen. A jelszóhoz és az adatokhoz való hozzáférés szigorúan kötelező érvényű lesz. Teljes ellenőrzési nyomvonal lesz érvényben.

Forrásadatok

A tanulmány forrásadatai a preeclampsia vagy a terhesség által kiváltott magas vérnyomás kezdeti diagnózisaiból állnak, amelyeket a londoni királyi intézetben Dr. Elena Greco által vezetett szülészeti gondozási csapattól szereznek be. Ezek vérvizsgálati eredmények és/vagy a terhességről készült szkennelt képek formájában lesznek.

A későbbi forrásadatok a kezdeti időpontban készített CMR-képek (preeclampsia diagnózisa és a terhességi korhoz igazított kontrollok), valamint a vizsgálat 2. időpontjában (3 hónappal a szülés után) követő CMR-képadatok. A CMR-képek mellett a betegektől a fent említett időpontokban vett vérminták laboratóriumi fenotipizálásából is származnak majd forrásadatok.

A vizsgálatban közvetlenül részt vevő nyomozók hozzáférhetnek a forrásadatokhoz. Egyes esetekben, amikor a páciens és a folyamatos ellátása szempontjából a legjobbnak ítélik, a klinikusok tanácsot kérhetnek más szakértőktől, amelyekhez hozzáférést kell kérniük a forrásadatokhoz.

Titoktartás

A kivizsgálók pszeudorandomizálást végeznek, melynek során a beteg csak a kórházi száma alapján azonosítható. Mivel ez egy nyomon követési vizsgálat lesz, a vizsgálóknak össze kell kapcsolniuk a pácienst, így ez a vizsgálat nem lesz teljesen anonim.

A felvételek megőrzése és archiválása

A vizsgálati adatokat és dokumentációt a vonatkozó szabályozási követelményeknek és a helyszíni SOP-nak megfelelően archiváljuk.

A vizsgálat kezdetekor minden résztvevőnek egyedi alfanumerikus betegazonosító kerül kiosztásra. Az adatok az egyedi résztvevői azonosítók használatával kerülnek tárolásra egy biztonságos adatbázisban. Az adatok nem kerülnek tárolásra személyi számítógépeken. A bizalmas dokumentumokat egy zárt szekrényben, biztonságos helyiségben tárolják. A klinikai feljegyzéseket a megbízhatósági protokoll szerint kezeljük. Az adatvédelmi törvényt és az NHS titoktartási szabályzatát a tanulmány során végig betartjuk. Az adatok megoszthatók a klinikai csapat tagjaival a folyamatos klinikai ellátás érdekében.

A GCP irányelvei megkövetelik, hogy a vizsgáló vagy az intézmény karbantartson minden esetjelentési űrlapot és minden forrásdokumentumot, amely alátámasztja az egyes résztvevőktől gyűjtött adatokat, valamint az összes próbadokumentációt. Intézkedéseket tesznek a dokumentumok véletlen vagy idő előtti megsemmisülésének megakadályozására. A lényeges dokumentumokat legalább 20 évig meg kell őrizni. A megbízó felelőssége, hogy tájékoztassa a vizsgálót, amikor ezeket a dokumentumokat már nem kell megőrizni. Ha a felelős vizsgáló nyugdíjba vonul vagy elhagyja az intézményt, a dokumentációért a felelősséget át kell ruházni egy olyan személyre, aki elfogadja a felügyeletet.

Mintaelőkészítés és -gyűjtés

Az immunsejtek fenotípusának felméréséhez vérmintákat vesznek azoktól a betegektől, akik elolvasták az adatlapot és aláírták a beleegyező nyilatkozatot. a szív MRI napján. Egyszerre legfeljebb 15 ml térfogatot vesznek ki a páciensből, és nátrium-citrát csövekbe gyűjtik.

Laboratóriumi eljárások

A vérminták többségét fenotípusos elemzésnek vetik alá áramlási citometriás módszerrel. Röviden, 50 mikroliter vért jelölnek meg kereskedelemben kapható antitestekkel, amelyek fluorokrómokhoz vannak konjugálva, és amelyek lézerrel kimutathatók az áramlási citométeren. A speciális szoftver lehetővé teszi az immunsejteken expresszálódó fenotípusos markerek értékelésének elemzését.

A mintákat specifikus immunsejtek, köztük a neutrofilek és a T-sejtek számára is izolálják, amelyeket biztonságos -80 oC-os fagyasztóban tárolnak, és később felhasználhatók genetikai vizsgálatokhoz, beleértve a következő generációs és a teljes genom szekvenálását. Az ilyen mély szekvenálás lehetővé teszi számunkra, hogy felmérjük azokat a genetikai változásokat, amelyek az immunsejtek fenotípusos változásai mellett előfordulhatnak.

Ezekből a mintákból plazmát is gyűjtenek a keringési faktorok értékelésére, amelyeket kereskedelmi forgalomban kapható kitekkel kell értékelni.

Mintatárolás és átvitel

A vérmintákat Dr. Alice Christensen kutató veszi a Barts Heart Centre-ben, ahol a szív MRI-t is elvégzik. A mintákat NHS hűtőszekrényben tárolják a laboratóriumba való átvitelig. A Barts Heart Center legfeljebb tíz perces sétára található a William Harvey Kutatóintézettől, ahol a laboratórium található. A mintákat Dr. Christensen biztonságos mintatovábbító dobozok segítségével szállítja a laboratóriumba, hogy azokat a laboratóriumba szállítsák. Minden vérmintát a gyűjtést követő egy órán belül feldolgoznak.

Biztonsági jelentés

A tanulmány megfigyeléses jellege és felépítése miatt a nemkívánatos eseményekről szóló biztonsági jelentés nem történik meg.

Monitoring és auditálás

A Szponzor vagy a Megbízott fenntartja a jogot bármely tanulmány, tanulmányi helyszín vagy központi létesítmény ellenőrzésére. Ezenkívül adott esetben a finanszírozók a tanulmány bármely részét ellenőrizhetik.

A helyszíni monitorozás a vizsgálati monitoringterv szerint történik. A megfigyelés magában foglalja a forrásadatok ellenőrzését.

A központ megfigyelését egy képzett vizsgálati monitor vagy monitorok végezhetik a vizsgálati dokumentáció ellenőrzése érdekében.