子癇前症における心臓および免疫細胞の機能

研究デザイン

臨床観察研究の全体的な目的は、子癇前症 (PE) の女性で観察される炎症誘発性免疫細胞の表現型が、妊娠中および妊娠後および産後の心機能と相関できるかどうかを判断することです。

研究チームは、研究グループ内の患者に同意し、研究の臨床的および実験的側面を実行するアリス・クリステンセン博士（博士候補）で構成されます。研究のすべての基礎科学的側面についてChristensen博士を監督し、訓練するSuchita Nadkarni博士（主任監督者）;スティーブ・ソーントン教授とエレナ・グレコ博士（臨床監督者）は、研究の産科のリーダーとなります。コンサルタントの心臓専門医には、心臓の問題に関する主要な連絡先となる Neha Sekhri 博士、研究の画像分析の分析を監督する Anna Herrey 博士、および両方の The Royal London で Christensen 博士と連絡を取り、アドバイスを行う Kate Von Klemperer 博士が含まれます。心エコー検査（エコー）に関するバーツ病院。 この目的のために、ロイヤル ロンドン病院から 100 人の妊婦が募集されます。

研究対象集団は、次の 3 つのグループで構成されます。

1. 子癇前症患者 (34 人の患者)
2. 妊娠高血圧症 (PIH; 33 例)
3. 健康な妊婦 (33)

正常血圧およびPIH患者は、妊娠期間がPE患者と一致します。 心エコー検査および非造影心血管磁気共鳴（CMR）研究は、妊娠に関連する生理的心血管の変化がそれまでに解消されていることを前提として、登録時および産後3か月の研究のすべての患者で実施されます。 Dr Anna Herrey - 妊娠中の女性の CMR の第一人者である専門家が、この研究の画像分析を監督します。 Herrey 博士は最近、妊娠中の女性に CMR を実施することの安全性と、ガドリニウム造影剤を使用しない比較分解能について概説した論文を発表しました (Herrey et al 2019)。 心機能は、駆出率、緊張、および拡張機能（および脈波速度）を測定する心エコー検査によって評価されます。 心筋組織の特性は、非造影 CMR で評価されます (T1 および T2 マッピングと完全な体積評価、LV 機能分析のゴールド スタンダード (Bellenger et al 2000 and Grothues et al 2002))。 分娩後3か月で異常な心臓の変化を示す研究グループ内の患者は、6か月のフォローアップのためにSekhri博士に紹介されます（この時点でNHSのケアを受けています）。 すべての心臓スキャンは、病棟への入院時にベッドサイドで心エコー検査が実施される重度のPEの女性を除いて、バーツ病院の外来患者として実施されます。 したがって、これらの女性は登録時に CMR 検査を受けませんが、CMR および心エコー検査検査のために 3 か月後にフォローアップに参加するよう招待されます。

免疫細胞の表現型を評価するために、時間を合わせた血液サンプルが患者から採取されます。 血漿サンプルは、心臓特異的因子（BNP、トロポニン）の分析、ならびにステロイドホルモン（プロゲステロンおよびエストラジオール）、ならびに可溶性炎症性および抗炎症性メディエーターの測定のために収集されます。 研究内のバイアスを制限するために、すべての CMR 画像分析 (Dr Herrey によって行われる) は盲検化されます。 Sekhri 博士は、CMR 研究の観察者間の変動性を評価するための 2 回目の報告に利用できます。 早発性 PE と遅発性 PE (それぞれ妊娠 34 週の前後に発生する PE) の間で何らかの違いが明らかになった場合、サブグループは PE グループ内で分析されます。 この最初のパイロット研究は、早発性および遅発性疾患のさらなる研究のための検出力計算に情報を提供します。

研究手順

フォローアップ手順

重度のPE患者を除き、研究に募集されたすべての患者は、ロイヤルロンドンで外来患者としてフォローアップされ、CMR研究のためにバーツ病院での病院訪問に出席するよう求められます。

参加者の退会

参加者は、どの段階でも、トライアルからの撤回を求める書面による要求を提出することができます。 参加者は、今後の参加から同意を撤回することもできます。この場合、追加のデータが収集されることはありません。 参加者が容量を失ったという不幸な出来事では、収集された情報は引き続き使用されますが、それ以上のデータは記録されません.

研究者はまた、研究者が現在の研究に関連する将来の研究に参加するために彼らに連絡できるように、連絡先情報を保持できるかどうかを参加者に尋ねます。 この要求は、同意書で求められます。

試験終了の定義

研究の終了は、患者グループごとに提案された患者数を達成することによって定義されます（上記で概説）。

統計上の考慮事項

これはパイロット研究になるため、研究者は必要な患者数の検出力計算を実行できません。 各患者グループの数は、最初の 1 年間に募集できると彼らが信じる現実的な患者数と、これらの患者に関するその後の追跡調査に基づいて選択されています。

分析方法

地元の NIHR バイオインフォマティクスおよびバイオリポジトリ施設 (http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository) のサポートにより、複数のパラメーターを複数のパラメーターを使用して分析します。グループ比較 (ANOVA) を使用して検出力を高めます。 研究内のバイアスを制限するために、すべての CMR 画像分析 (Herrey 博士と Sekhri 博士によって行われた) は盲検化され、観察者間の変動性が測定されます。

研究者はフローサイトメトリーを使用して免疫細胞の表現型を分析します。 これは確立された方法です。 Nadkarni 博士の研究室は、任意の細胞で最大 12 の表現型マーカーを識別できる機械を備えたフローサイトメトリーのコア施設にアクセスできます。 さらに、主任研究者である Nadkarni 博士と彼女のグループは、この方法を使用した免疫細胞の表現型解析において豊富な経験を持っています。 主な利点は次のとおりです。

1. これは、免疫細胞表現型解析のゴールド スタンダードです。
2. 必要最小限の血液量（最大200μl）
3. 抗体は市販されており、私たち自身や他の人によって広く検証されています
4. Nadkarni 博士は、一度に多くのサンプルを分析するためのハイスループット法を開発し、それによって取り扱いエラーを最小限に抑えました。

すべてのサンプルは、免疫細胞の表面のタンパク質の分解を最小限に抑えるために、サンプル収集から 1 時間以内に処理および分析されます。

研究者らはまた、血漿中の循環因子を調べることを提案しており、これは市販の ELISA キットを使用して実施されます。

主要なエンドポイントは、異常な免疫細胞の表現型と異常な心機能との間に相関関係があるかどうかを判断することです。 さらに、分析を実施して、子癇前症患者コホートと PIH 患者コホートとの間の統計的に有意な心機能および表現型の違いを見つけます。これにより、患者グループ間の心機能の理解が向上します。

倫理

現在の研究の申請は、提出後に保留中です。 上記のように、インフォームドコンセントが得られ、記録されます。 特別グループの手当については、上記で詳しく説明しています。

偶発的な発見

研究の過程で臨床的に重要な偶発的な所見が生じた場合、参加者のGPおよび臨床ケアチームに通知されます。 GP に連絡するための同意は、登録プロセス中に求められます。

年次安全報告

CI は、REC の「好意的な意見」の記念日に、HRA テンプレートを使用して REC とスポンサーに年次進捗報告書を送信します。

データ管理

生成されたすべてのデータは、臨床データとラボ データを組み合わせた Excel スプレッドシート内に保存されます。 スプレッドシートはパスワードで保護され、保護されたコンピューターの安全なハード ドライブに保存されます。 パスワードとデータへのアクセスは、厳密に知る必要があります。 完全な監査証跡が整備されます。

ソースデータ

この研究のソースデータは、ロイヤルロンドンのエレナ・グレコ博士が率いる産科ケアチームから得られる子癇前症または妊娠誘発性高血圧症の初期診断で構成されます。 これらは、血液検査の結果および/または妊娠のスキャン画像の形になります。

後続のソース データは、最初の時点で撮影された CMR 画像 (子癇前症および妊娠年齢が一致したコントロールの診断) と、研究の 2 番目の時点 (産後 3 か月) でのフォローアップ CMR 画像データになります。 CMR 画像に加えて、ソース データは、上記の時点で患者から採取された血液サンプルの実験室での表現型からも取得されます。

研究に直接関与する研究者は、ソース データにアクセスできます。 場合によっては、患者とその継続的なケアにとって最善であると考えられる場合、臨床医は他の専門家にアドバイスを求めることがあり、そのためにソース データへのアクセスが必要になる場合があります。

守秘義務

治験責任医師は疑似無作為化を行い、それによって患者は病院番号によってのみ識別可能になります。 これは追跡調査であるため、調査員は患者を関連付ける必要があるため、この調査は完全に匿名化されません。

記録の保持とアーカイブ

研究データと文書は、関連する規制要件と施設の SOP に従ってアーカイブされます。

調査の開始時に、一意の英数字の患者 ID が各参加者に割り当てられます。 データは、一意の参加者識別子を使用して安全なデータベースに保存されます。 データはパソコンには保存されません。 機密文書は、安全な部屋にある施錠された戸棚に保管されます。 臨床メモは信頼プロトコルに従って処理されます。 データ保護法と NHS の機密保持に関する行動規範は、この調査全体を通じて順守されます。 進行中の臨床ケアを可能にするために、データを臨床チームのメンバーと共有することができます。

GCP ガイドラインでは、治験責任医師または医療機関が、すべての症例報告書と、各参加者から収集したデータを裏付けるすべてのソース ドキュメントとすべての治験ドキュメントを維持する必要があります。 これらの文書の偶発的または時期尚早の破棄を防ぐための措置が講じられます。 重要な文書は、少なくとも 20 年間保持する必要があります。 これらの文書を保持する必要がなくなった場合に治験責任医師に通知するのは、治験依頼者の責任です。 責任ある研究者が退職または施設を離れた場合、文書に対する責任は、彼らの管理を受け入れる人に移されなければなりません

サンプルの準備と収集

免疫細胞の表現型を評価するための血液サンプルは、情報シートを読み、同意書に署名した患者から収集されます。 心臓MRIの当日。 一度に患者から最大 15ml の量を採取し、クエン酸ナトリウムチューブに集めます。

検査手順

血液サンプルの大部分は、フローサイトメトリー法を使用して表現型分析を受けます。 簡単に言えば、50マイクロリットルの血液を、フローサイトメーターのレーザーで検出できる蛍光色素に結合した市販の抗体で標識します。 専用のソフトウェアにより、免疫細胞に発現する表現型マーカーの評価の分析が可能になります。

サンプルは、好中球やT細胞などの特定の免疫細胞についても分離され、安全な-80℃の冷凍庫に保管され、その後、次世代および全ゲノム配列決定を含む遺伝子検査に使用される可能性があります. このようなディープシーケンシングにより、免疫細胞の表現型の変化とともに発生する可能性のある遺伝的変化を評価することができます。

血漿もこれらのサンプルから採取して循環因子を評価し、市販のキットで評価します。

サンプルの保管と移送

血液サンプルは、心臓 MRI が実施される Barts Heart Centre の Research Fellow、Dr Alice Christensen によって採取されます。 サンプルは、研究所に移すまで NHS 冷蔵庫に保管されます。 Barts Heart Center は、研究所の拠点である William Harvey Research Institute まで徒歩最大 10 分です。 サンプルは、クリステンセン博士によって、安全なサンプル転送ボックスを使用して研究室に転送され、研究室に持ち込まれます。 すべての血液サンプルは、採取後 1 時間以内に処理されます。

安全報告

この研究の観察的性質とデザインにより、有害事象の安全性報告は行われません。

監視と監査

スポンサーまたは代理人は、研究、研究施設、または中央施設を監査する権利を保持します。 さらに、研究のどの部分も、該当する場合、資金提供者によって監査される場合があります。

オンサイトモニタリングは、研究モニタリング計画に従って実施されます。 モニタリングには、ソース データの検証が含まれます。

センターのモニタリングは、訓練を受けた研究モニターまたはモニターによって実施され、研究文書を検証します。