Fonction des cellules cardiaques et immunitaires dans la prééclampsie

Étudier le design

L'objectif global de l'étude observationnelle clinique est de déterminer si le phénotype des cellules immunitaires pro-inflammatoires observé chez les femmes atteintes de prééclampsie (PE) peut être corrélé à la fonction cardiaque pendant et après la grossesse et dans la période post-partum.

L'équipe d'étude comprendra le Dr Alice Christensen (candidat au doctorat), qui consentira les patients au sein du groupe d'étude et effectuera les aspects cliniques et de laboratoire de l'étude ; Dr Suchita Nadkarni (superviseur principal) qui supervisera et formera le Dr Christensen sur tous les aspects scientifiques fondamentaux de l'étude ; le professeur Steve Thornton et le Dr Elena Greco (superviseurs cliniques) qui seront les responsables obstétricaux de l'étude ; Les cardiologues consultants comprendront le Dr Neha Sekhri qui sera le contact principal pour tout problème cardiaque, le Dr Anna Herrey, qui supervisera les analyses de l'aspect imagerie de l'étude et le Dr Kate Von Klemperer qui assurera la liaison et conseillera le Dr Christensen au Royal London et Barts Hospitals concernant l'échocardiographie (écho). À cette fin, environ 100 femmes enceintes seront recrutées au Royal London Hospital.

La population étudiée comprendra 3 groupes :

1. Patientes prééclamptiques (34 patientes)
2. Hypertension induite par la grossesse (HPI ; 33 patientes)
3. Femmes enceintes en bonne santé (33)

Les patients normotendus et PIH seront appariés pour l'âge gestationnel avec les patients PE. Des études d'échocardiographie et de résonance magnétique cardiovasculaire (CMR) sans contraste seront réalisées chez tous les patients de l'étude lors de l'inscription et 3 mois après l'accouchement, en supposant que tout changement cardiovasculaire physiologique lié à la grossesse aura disparu d'ici là. Le Dr Anna Herrey - une experte de premier plan en CMR chez les femmes enceintes supervisera les analyses d'images dans l'étude. Le Dr Herrey a récemment publié un article décrivant la sécurité de la réalisation d'une RMC chez les femmes enceintes et la résolution comparative sans l'utilisation d'un contraste de gadolinium (Herrey et al 2019). La fonction cardiaque sera évaluée par un examen échocardiographique mesurant la fraction d'éjection, la tension et la fonction diastolique (ainsi que la vitesse de l'onde de pouls). Les caractéristiques du tissu myocardique seront évaluées avec une RMC sans contraste (cartographie T1 et T2 et évaluation volumétrique complète, l'étalon-or pour l'analyse de la fonction VG (Bellenger et al 2000 et Grothues et al 2002)). Toute patiente du groupe d'étude qui présente des changements cardiaques anormaux à 3 mois post-partum sera référée au Dr Sekhri pour un suivi de 6 mois (sous les soins du NHS à ce stade). Toutes les scintigraphies cardiaques seront effectuées en ambulatoire à l'hôpital Barts, sauf pour les femmes atteintes d'EP sévère où l'échocardiographie sera effectuée au chevet du patient, lors de l'admission dans le service. Ainsi, ces femmes n'auront pas d'études de CMR à l'inscription mais seront invitées à se présenter au suivi à 3 mois pour les études de CMR et d'échocardiographie.

Des échantillons de sang appariés dans le temps seront prélevés sur les patients pour évaluer les phénotypes des cellules immunitaires. Des échantillons de plasma seront collectés pour l'analyse des facteurs cardiaques spécifiques (BNP, troponine) ainsi que la mesure des hormones stéroïdes (progestérone et œstradiol) et des médiateurs inflammatoires et anti-inflammatoires solubles. Afin de limiter les biais au sein de l'étude, toutes les analyses d'images CMR (réalisées par le Dr Herrey) seront effectuées en aveugle. Le Dr Sekhri sera disponible pour un deuxième rapport afin d'évaluer la variabilité interobservateur des études CMR. Si une différence devait apparaître entre l'EP précoce et l'EP tardive (EP qui se développe avant et après 34 semaines de gestation, respectivement), des sous-groupes seront analysés au sein du groupe EP. Cette étude pilote initiale éclairera les calculs de puissance pour d'autres études sur les maladies à apparition précoce et tardive.

Procédures d'étude

Procédures de suivi

Tous les patients recrutés pour l'étude, à l'exception de ceux atteints d'EP sévère, seront suivis en ambulatoire au Royal London et seront invités à se rendre à l'hôpital Barts pour des études CMR.

Retrait du participant

Les participants auront la possibilité de soumettre une demande écrite pour se retirer de l'essai à tout moment. Les participants auront également la possibilité de retirer leur consentement à une participation ultérieure, auquel cas aucune autre donnée ne sera collectée pour inclusion. Dans le cas malheureux où un participant perdrait sa capacité, les informations recueillies continueront d'être utilisées mais aucune autre donnée ne sera enregistrée.

Les enquêteurs demanderont également aux participants s'ils peuvent conserver leurs coordonnées afin que les enquêteurs puissent les contacter pour participer à de futures recherches liées à l'étude en cours. Cette demande sera demandée sur le formulaire de consentement.

Définition de fin d'étude

La fin de l'étude sera définie par la réalisation des nombres de patients proposés par groupe de patients (indiqués ci-dessus).

Considérations statistiques

Comme il s'agira d'une étude pilote, les enquêteurs ne peuvent pas effectuer de calculs de puissance sur le nombre de patients nécessaires. les nombres pour chaque groupe de patients ont été choisis en fonction du nombre réaliste de patients qu'ils pensent pouvoir être recrutés au cours de la période initiale d'un an et des études de suivi ultérieures sur ces patients.

Méthode d'analyse

Avec le soutien de notre installation locale de bioinformatique et de bio-dépôt du NIHR (http://www.whri.qmul.ac.uk/core-facilities/nihr-bioinformatics-and-bio-repository), plusieurs paramètres seront analysés à l'aide de plusieurs comparaisons de groupe (ANOVA) pour augmenter la puissance. Afin de limiter les biais au sein de l'étude, toutes les analyses d'images CMR (réalisées par le Dr Herrey et le Dr Sekhri) seront effectuées en aveugle et la variabilité interobservateur sera mesurée.

Les chercheurs utiliseront la cytométrie en flux pour analyser le phénotype des cellules immunitaires. C'est une méthode bien établie. Le laboratoire du Dr Nadkarni a accès à une installation centrale de cytométrie en flux, qui dispose de machines capables d'identifier jusqu'à 12 marqueurs phénotypiques sur une cellule donnée. De plus, le Dr Nadkarni, l'investigatrice en chef, et son groupe ont une vaste expérience du phénotypage des cellules immunitaires à l'aide de cette méthode. Les principaux avantages sont :

1. C'est l'étalon-or pour le phénotypage des cellules immunitaires
2. Une quantité minimale de sang est nécessaire (max 200μls)
3. Les anticorps sont disponibles dans le commerce et ont été largement validés par nous-mêmes et d'autres
4. Le Dr Nadkarni a développé une méthode à haut débit pour analyser de nombreux échantillons à la fois, minimisant ainsi les erreurs de manipulation

Tous les échantillons seront traités et analysés dans l'heure suivant le prélèvement de l'échantillon afin de minimiser la dégradation des protéines à la surface des cellules immunitaires.

Les chercheurs proposent également d'examiner les facteurs circulants dans le plasma et cela sera réalisé à l'aide de kits ELISA disponibles dans le commerce.

Le critère d'évaluation principal sera de déterminer s'il existe une corrélation entre les phénotypes aberrants des cellules immunitaires et la fonction cardiaque anormale au sein de notre cohorte de patients atteints de prééclampsie, par rapport aux groupes normaux sains et PIH. De plus, des analyses seront effectuées pour trouver des différences fonctionnelles et phénotypiques cardiaques statistiquement significatives entre nos cohortes de patients prééclamptiques et PIH, ce qui améliorera notre compréhension de la fonction cardiaque entre les groupes de patients.

Éthique

La candidature pour l'étude en cours est en attente après la soumission. Le consentement éclairé sera obtenu et enregistré comme décrit ci-dessus. Les allocations pour les groupes spéciaux sont détaillées ci-dessus.

Découvertes fortuites

Si des découvertes fortuites d'importance clinique surviennent au cours de l'étude, le médecin généraliste et l'équipe de soins cliniques des participants en seront informés. Le consentement à contacter le médecin généraliste sera demandé lors du processus d'inscription.

Rapport annuel sur la sécurité

Le CI enverra un rapport d'avancement annuel au CER et au sponsor en utilisant le modèle HRA à l'anniversaire de l'"avis favorable" du CER.

Gestion de données

Toutes les données générées seront stockées dans une feuille de calcul Excel combinant des données cliniques et de laboratoire. La feuille de calcul sera protégée par un mot de passe et stockée sur un disque dur sécurisé sur un ordinateur protégé. L'accès au mot de passe et aux données se fera sur la base du strict besoin d'en connaître. Une piste d'audit complète sera mise en place.

Données source

Les données sources de cette étude comprendront les diagnostics initiaux de prééclampsie ou d'hypertension induite par la grossesse, qui seront obtenus auprès de l'équipe de soins obstétriques, dirigée par le Dr Elena Greco au Royal London. Ceux-ci prendront la forme de résultats d'analyses sanguines et/ou d'images numérisées de la grossesse.

Les données sources ultérieures seront des images CMR prises au point de temps initial (diagnostics de prééclampsie et témoins correspondant à l'âge gestationnel) et des données d'image CMR de suivi au 2e point de temps de l'étude (3 mois après l'accouchement). En plus des images CMR, des données sources seront également obtenues à partir du phénotypage en laboratoire d'échantillons de sang prélevés sur des patients aux moments mentionnés ci-dessus.

Les chercheurs directement impliqués dans l'étude auront accès aux données sources. Dans certains cas, lorsque cela est jugé préférable pour le patient et ses soins continus, les cliniciens peuvent demander conseil à d'autres experts, ce qui peut nécessiter leur accès aux données sources.

Confidentialité

Les enquêteurs procéderont à une pseudo-randomisation, dans laquelle le patient ne sera identifiable que par son numéro d'hôpital. Comme il s'agira d'une étude de suivi, les investigateurs devront relier le patient et cette étude ne sera donc pas complètement anonymisée.

Conservation et archivage des dossiers

Les données et la documentation de l'étude seront archivées conformément aux exigences réglementaires pertinentes et aux SOP du site.

Un identifiant patient alphanumérique unique sera attribué à chaque participant au début de l'étude. Les données seront stockées à l'aide des identifiants uniques des participants dans une base de données sécurisée. Les données ne seront pas stockées sur des ordinateurs personnels. Les documents confidentiels seront conservés dans une armoire verrouillée située dans une pièce sécurisée. Les notes cliniques seront traitées selon le protocole de confiance. La loi sur la protection des données et le code de pratique de confidentialité du NHS seront respectés tout au long de cette étude. Les données peuvent être partagées avec les membres de l'équipe clinique pour permettre des soins cliniques continus.

Les directives GCP exigent que l'investigateur ou l'institution conserve tous les formulaires de rapport de cas et tous les documents sources qui appuient les données recueillies auprès de chaque participant ainsi que toute la documentation de l'essai. Des mesures seront prises pour éviter la destruction accidentelle ou prématurée de ces documents. Les documents essentiels doivent être conservés pendant au moins 20 ans. Il est de la responsabilité du promoteur d'informer l'investigateur lorsque ces documents ne doivent plus être conservés. Si l'enquêteur responsable prend sa retraite ou quitte l'établissement, la responsabilité de la documentation doit être transférée à une personne qui acceptera sa garde

Préparation et prélèvement d'échantillons

Des échantillons de sang pour évaluer les phénotypes des cellules immunitaires seront prélevés chez les patients qui ont lu la fiche d'information et signé le formulaire de consentement. le jour de l'IRM cardiaque. Un volume maximum de 15 ml sera prélevé sur le patient à tout moment et collecté dans des tubes de citrate de sodium.

Procédures de laboratoire

La majorité des échantillons de sang subira des analyses phénotypiques en utilisant la méthode de cytométrie en flux. En bref, 50 microlitres de sang seront marqués avec des anticorps disponibles dans le commerce qui sont conjugués à des flurochromes qui peuvent être détectés par des lasers sur le cytomètre en flux. Des logiciels spécialisés permettront d'analyser l'évaluation des marqueurs phénotypiques qui s'expriment sur les cellules immunitaires.

Les échantillons seront également isolés pour des cellules immunitaires spécifiques, y compris les neutrophiles et les cellules T, qui seront stockées dans un congélateur sécurisé à -80 ° C et pourront ensuite être utilisées pour des tests génétiques, y compris la prochaine génération et le séquençage du génome entier. Un tel séquençage approfondi nous permettra d'évaluer les changements génétiques qui peuvent survenir parallèlement aux changements phénotypiques dans les cellules immunitaires.

Le plasma sera également collecté à partir de ces échantillons pour évaluer les facteurs circulants, à évaluer par des kits disponibles dans le commerce.

Stockage et transfert d'échantillons

Des échantillons de sang seront prélevés par la chercheuse, le Dr Alice Christensen, au Barts Heart Center, où les IRM cardiaques doivent être effectuées. Les échantillons seront conservés dans un réfrigérateur du NHS jusqu'à leur transfert au laboratoire. Le Barts Heart Center se trouve à dix minutes à pied maximum de l'Institut de recherche William Harvey où se trouve le laboratoire. Les échantillons seront transférés par le Dr Christensen au laboratoire à l'aide de boîtes de transfert d'échantillons sécurisées à apporter au laboratoire. Tous les échantillons de sang seront traités dans l'heure suivant le prélèvement.

Rapports de sécurité

En raison de la nature observationnelle et de la conception de cette étude, il n'y aura pas de rapport d'innocuité des événements indésirables.

Surveillance et audit

Le commanditaire ou son délégué se réserve le droit de vérifier toute étude, site d'étude ou installation centrale. En outre, toute partie de l'étude peut être auditée par les bailleurs de fonds, le cas échéant.

La surveillance sur place sera effectuée conformément au plan de surveillance de l'étude. La surveillance comprendra la vérification des données sources.

La surveillance du centre peut être effectuée par un ou plusieurs moniteurs d'étude formés, afin de vérifier la documentation de l'étude.