糖萼完整性在主要心血管事件一级预防中的作用

借助数字示波血压计（TensioMed，Budapest Hungary，Ltd）测量每位受试者的血压。 每个受试者在考试前在 25°C 的安静房间内休息 30 分钟。 袖带放在右臂上，受试者坐着。 高血压的诊断基于：1) 连续 3 次测量后收缩压≥140 mmHg/舒张压≥90 mmHg 或 2) 参与者正在接受抗高血压治疗。 此外，抽取空腹血样以确定样本中是否存在糖尿病和高脂血症。 具体而言，DM 由酶促体外试验（罗氏，自动化学临床分析仪）测量的血浆葡萄糖 ≥ 126 mg/dl 或抗糖尿病药物治疗确定。 同样，高脂血症的定义是总胆固醇≥230 mg/dl，和/或 LDL ≥160 mg/dl，和/或 TGs ≥200 mg/dl，通过比色分光光度法（Roche Diagnostics）或使用降脂剂测量根据初步考试期间举行的跑步指南。 此外，吸烟者仅被视为在登记时积极吸烟的参与者。 此外，冠状动脉疾病阳性家族史的存在被定义为 65 岁以下的一级女性亲属或 55 岁以下的男性亲属患有冠状动脉疾病。 BMI 计算为体重 (kg) 与身高 (m2) 平方的比值。 此外，我们使用 SCORE 估计系统来计算每个参与者的 10 年心血管风险。

就种族而言，如果一个人出生在国外并且至少有一个外国人父母，或者他/她出生在希腊但父母都是外国人，则不被视为希腊人。 相反，如果一个受试者和同时父母双方都出生在希腊，则该受试者被认为是希腊人。

排除标准是冠状动脉疾病 (CAD)、外周动脉疾病 (PAD)、心力衰竭 (HF)、中风、肝或肾功能衰竭、活动性肿瘤和控制不佳的 DM 病史，定义为 Hba1C>7%。

内皮糖萼评估 我们通过使用 Sideview Darkfield Imaging（Microscan、Glycocheck、Microvascular Health Solutions Inc.，美国犹他州盐湖城）对舌下微血管系统的灌注边界区域（PBR，以 μm 为单位）进行量化。 简而言之，SDF 相机利用来自血红蛋白分子的绿色反射发光二极管 (LED) 光 (540 nm) 来描绘红细胞在微血管内的径向位移。 摄像头插入舌下，可捕捉到3000多条直径从5μm到25μm的血管片段。 图像由 Glycocheck 软件自动获取。 之后系统会检查录制的质量并选择有效帧（对比度增强大于 60%），这些帧将被进一步分析。 RBC 列宽度以及微血管的总灌注直径由软件以高精度估计。 然后通过公式[灌注直径-RBC柱宽]/2计算PBR。软件还提供了直径为5-9μm、10-19μm、20-25μm的血管的PBR以及平均5-25μm的PBR结果，PBR表示易受 RBC 渗透影响的血管腔外区域，并且与糖萼层的完整性一致。 因此，高 PBR 值被认为是内皮糖萼受损且屏障特性受影响的指标，这允许红细胞的高时空分布。 另一方面，相反，低 PBR 值与坚固的厚糖萼层相关。 整个过程持续约 3 分钟，不需要很高的专业知识，独立于操作员，具有令人满意的重现性，因此强烈推荐作为评估内皮糖萼功能的有效技术。 PBR 测量独立于血管段的红细胞填充（血细胞比容），因为该软件仅包括填充百分比超过 50% 的血管段。 因此，仅当 21 行标记中的至少 11 行具有红细胞存在的阳性信号时，才选择血管段。 因此，PBR 值与血细胞比容无关，反映出循环红细胞更容易接近的受损糖萼。

在我们的研究中，PBR 的评估发生在 9:00 到 11:00 之间，在禁食 8 小时、戒烟戒酒以及检查前 48 小时暂时停药后。

跟进我们在招募后 6 年通过电话联系和计划在门诊诊所预约对我们的研究队列进行跟进。 简而言之，在重新评估时，参与者或其法定代表 - 在无能力或死亡的情况下 - 被要求提供主要心血管事件或归因于任何原因的死亡的发生率。 主要不良事件的主要复合结局包括死亡、心肌梗死（ICD-10：DI20-22）、中风（ICD-10：DI60-68；DG45）和因心力衰竭住院（ICD-10：DI50-51； DI42；DI11）。 每个已命名的事件都记录在医院病历或主治医师的信件中，并使用适当的 ICD10 由国家安全电子记录确认。

统计分析

统计分析由 SPSS 25 版（IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL）和 Stata 16 版（StataCorp LP, College Station, TX）执行。 在正态分布的情况下，尺度变量表示为均值±SD，由正态性检验 Kolmogorov-Smirnov 检验和 Shapiro-Wilk 确定，或者在非正态分布的情况下表示为中位数和四分位数范围。 标称变量表示为频率和百分比。 如图所示，使用独立样本学生 t 检验或 Mann-Whitney 检验比较尺度变量，而酌情使用卡方检验或 Fisher 精确检验比较分类变量。 此外，根据舌下微血管直径 5-25μm、5-9μm、10-19μm 和 20-25μm 的 PBR 平均值对患者进行二分类。 为每个变量建立 Cox 比例风险模型，以确定上述 PBR 类别的任何平均值是否可以作为主要心血管事件或死亡的独立预测因子，显着性水平为 p 值 <0.05。 使用 Kaplan-Meier 生存分析计算具有较低 vs 较高平均 PBR 值的受试者的累积事件率。 事件发生时间数据相对于总事件的对数秩检验用于比较这两组。 为与研究终点相关的每个可能的风险因素建立 Cox 比例风险模型。 获得估计的风险比及其各自的 95% 置信区间。 P值<0.05被认为是显着的。 多变量分析包括在单变量分析中具有临床价值或 p 值≤0.1 的因素。 此外，我们比较了调整 PBR 前后多变量模型的卡方值。 p 值<0.05 的卡方变化被认为是显着的。 此外，我们计算净重新分类指数 (NRI) 和 Harrell's C 以评估 PBR 对风险预测的改进，p 值 <0.05 被认为是显着的。