De rol van Glycocalyx-integriteit bij de primaire preventie van ernstige cardiovasculaire gebeurtenissen

Bij elke proefpersoon wordt de bloeddruk gemeten met behulp van een digitale oscillometrische bloeddrukmeter (TensioMed, Budapest Hungary, Ltd). Elke proefpersoon rust voor het onderzoek 30 minuten in een stille kamer bij 25°C. De manchet wordt in de rechterarm geplaatst terwijl de proefpersoon zit. De diagnose hypertensie wordt gesteld op basis van: 1) systolische bloeddruk ≥140 mmHg/diastolische bloeddruk ≥90 mmHg na 3 opeenvolgende metingen of 2) de deelnemer krijgt een antihypertensieve behandeling. Bovendien worden nuchtere bloedmonsters genomen om de aanwezigheid van diabetes mellitus en hyperlipidemie in ons monster te identificeren. Specifiek wordt DM bepaald door ofwel plasmaglucose ≥ 126 mg/dl gemeten door de enzymatische in vitro test (Roche, automatische chemie klinische analysator) of behandeling met antidiabetica. Evenzo werd hyperlipidemie gedefinieerd door ofwel Totaal Cholesterol ≥230 mg/dl, en/of LDL ≥160 mg/dl, en/of TG's ≥200 mg/dl gemeten door de colorimetrische spectrofotometrie (Roche Diagnostics) of het gebruik van lipideverlagende middelen volgens de looprichtlijnen gehouden tijdens het initiële onderzoek. Bovendien worden rokers alleen beschouwd als deelnemers die actief roken op het moment van inschrijving. Ook wordt de aanwezigheid van een positieve familiegeschiedenis van coronaire hartziekte gedefinieerd als coronaire ziekte bij een eerstegraads vrouwelijk familielid vóór de leeftijd van 65 jaar of een mannelijk familielid vóór de leeftijd van 55 jaar. BMI wordt berekend als de verhouding van gewicht (kg) tot het kwadraat van lengte (m2). Verder gebruiken we het SCORE-schattingssysteem om het 10-jaars cardiovasculair risico voor elke deelnemer te berekenen.

Wat etniciteit betreft, wordt een persoon niet als Grieks beschouwd als hij/zij in het buitenland is geboren en ook ten minste een buitenlandse ouder heeft of als hij/zij in Griekenland is geboren maar beide ouders buitenlanders waren. Omgekeerd werd een onderwerp als Grieks beschouwd als zij en tegelijkertijd beide ouders in Griekenland waren geboren.

Uitsluitingscriteria zijn de voorgeschiedenis van coronaire hartziekte (CAD), perifere arteriële ziekte (PAD), hartfalen (HF), beroerte, lever- of nierfalen, actieve neoplasie en slecht gecontroleerde DM, gedefinieerd als Hba1C>7%.

ENDOTHELIALE GLYCOCALYX-EVALUATIE We kwantificeren het geperfuseerde grensgebied (PBR, gemeten in μm) van de sublinguale microvasculatuur met behulp van Sideview Darkfield Imaging (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, UT, VS). In het kort, SDF-camera maakt gebruik van groen gereflecteerd licht emitterende diode (LED) licht (540 nm) van hemoglobinemoleculen om de radiale verplaatsingen van RBC's in de microvaatjes weer te geven. De camera wordt onder de tong ingebracht en legt meer dan 3000 vasculaire segmenten van vaten vast met een diameter variërend van 5 μm tot 25 μm. De beelden worden automatisch verkregen door de Glycocheck-software. Daarna controleert het systeem de kwaliteit van de opnames en selecteert het de geldige frames (contrastverbetering groter dan 60%), die verder zullen worden geanalyseerd. De RBC-kolombreedte, evenals de totale geperfundeerde diameter van microvaatjes wordt door de software met hoge nauwkeurigheid geschat. Vervolgens wordt PBR berekend met de formule [Perfused Diameter-RBC column width]/2. De software levert ook de PBR van vaten met een diameter van 5-9μm, 10-19μm, 20-25μm en de gemiddelde 5-25μm. drukt het buitenste gebied van het lumen van de vaten uit dat kwetsbaar is voor RBC-penetratie en consistent is met de integriteit van de glycocalyxlaag. Hoge PBR-waarden worden dus beschouwd als een indicator van beschadigde endotheliale glycocalyx met aangetaste barrière-eigenschappen, wat een hoge spatio-temporele verdeling van RBC's mogelijk maakt. Aan de andere kant worden lage PBR-waarden geassocieerd met een robuuste dikke glycocalyxlaag. De hele procedure duurt ongeveer 3 minuten, vereist geen hoge expertise, is onafhankelijk van de operator, heeft voldoende reproduceerbaarheid en wordt daarom ten zeerste aanbevolen als een gevalideerde techniek voor de beoordeling van de endotheliale glycocalyxfunctie. De PBR-metingen zijn onafhankelijk van de rode bloedcelvulling van de vaatsegmenten (hematocriet), omdat de software alleen vaatsegmenten meet die een vullingspercentage hebben van meer dan 50%. Daarom worden bloedvatsegmenten alleen geselecteerd wanneer ten minste 11 van de 21-regelige markeringen een positief signaal hebben voor de aanwezigheid van een erytrocyt. PBR-waarden zijn dus onafhankelijk van hematocriet en weerspiegelen een beschadigde glycocalyx die beter toegankelijk is voor circulerende erytrocyten.

In onze studie vindt de evaluatie van PBR plaats tussen 9.00 en 11.00 uur, na 8 uur vasten en onthouding van alcohol en roken en het tijdelijk staken van medicatie gedurende 48 uur voor het onderzoek.

FOLLOW-UP We voeren een follow-up uit van ons studiecohort 6 jaar na de werving via telefonisch contact en geplande afspraak op de polikliniek. In het kort, bij de herevaluatie wordt de deelnemers of hun wettelijke vertegenwoordigers - in geval van onvermogen of overlijden - gevraagd naar de incidentie van ernstige cardiovasculaire gebeurtenissen of overlijden toegeschreven aan welke oorzaak dan ook. De primaire samengestelde uitkomst van ernstige bijwerkingen bestaat uit overlijden, myocardinfarct (ICD-10: DI20-22), beroerte (ICD-10: DI60-68; DG45) en ziekenhuisopname wegens hartfalen (ICD-10: DI50-51; DI42; DI11). Elk van de voorgenoemde gebeurtenissen wordt gedocumenteerd door medische dossiers van het ziekenhuis of brieven van behandelende artsen en bevestigd door de elektronische dossiers van de nationale veiligheid met behulp van de juiste ICD10.

STATISTISCHE ANALYSE

Statistische analyse wordt uitgevoerd door SPSS versie 25 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL) en Stata versie 16 (StataCorp LP, College Station, TX). Schaalvariabelen worden gepresenteerd als gemiddelde ±SD in geval van normale verdeling, zoals bepaald door de normaliteitstests Kolmogorov-Smirnov-test en Shapiro-Wilk, of als medianen en interkwartielbereiken in geval van niet-normale verdeling. Nominale variabelen worden uitgedrukt in frequenties en percentages. Schaalvariabelen worden vergeleken met behulp van Student's t-testen of Mann-Whitney-testen met onafhankelijke steekproeven, zoals aangegeven, terwijl categorische variabelen worden vergeleken met behulp van Chi-kwadraattesten of Fisher's exact-testen, al naar gelang het geval. Bovendien worden patiënten gedichotomiseerd op basis van de gemiddelde waarden van PBR voor de sublinguale microvaatjes met een diameter van 5-25 μm, 5-9 μm, 10-19 μm en 20-25 μm . Cox-modellen voor proportioneel risico worden voor elke variabele gebouwd om te beslissen of een van de gemiddelde waarden van de bovenstaande PBR-categorieën kan dienen als een onafhankelijke voorspeller van ernstige cardiovasculaire gebeurtenissen of overlijden bij een significantieniveau van p-waarde <0,05. Cumulatieve gebeurtenispercentages worden berekend met behulp van de Kaplan-Meier-overlevingsanalyse voor proefpersonen met lagere versus hogere gemiddelde PBR-waarde. De log-rank-test voor tijd-tot-gebeurtenisgegevens met betrekking tot het totale aantal gebeurtenissen wordt gebruikt voor vergelijking van deze twee groepen. Er worden Cox-modellen voor proportioneel gevaar gebouwd voor elke mogelijke risicofactor in relatie tot de onderzoekseindpunten. Geschatte hazard ratio's en hun respectievelijke 95% betrouwbaarheidsintervallen worden verkregen. P-waarde <0,05 wordt als significant beschouwd. Multivariate analyse omvat factoren met bewezen klinische waarde of p-waarde ≤0,1 bij univariate analyse. Bovendien vergelijken we chikwadraatwaarden van multivariate modellen voor en na correctie voor PBR. Chi-kwadraatverandering met p-waarde <0,05 wordt als significant beschouwd. Verder berekenen we de netto herclassificatie-index (NRI) en Harrell's C om verbetering in risicovoorspelling door PBR te evalueren en p-waarde <0,05 wordt als significant beschouwd.