O Papel da Integridade do Glicocálice na Prevenção Primária de Grandes Eventos Cardiovasculares

A pressão arterial é medida em cada indivíduo com o auxílio de um esfigmomanômetro oscilométrico digital (TensioMed, Budapest Hungary, Ltd). Cada sujeito descansa em uma sala silenciosa a 25°C por 30 minutos antes do exame. O manguito é colocado no braço direito, enquanto o sujeito está sentado. O diagnóstico de hipertensão é feito com base em: 1) pressão arterial sistólica ≥140 mmHg/pressão arterial diastólica ≥90 mmHg após 3 medições consecutivas ou 2) o participante está recebendo tratamento anti-hipertensivo. Além disso, amostras de sangue em jejum são coletadas para identificar a presença de diabetes mellitus e hiperlipidemia em nossa amostra. Especificamente, o DM é determinado pela glicose plasmática ≥ 126 mg/dl medida pelo teste enzimático in vitro (Roche, analisador químico clínico automático) ou pelo tratamento com agentes antidiabéticos . Da mesma forma, a hiperlipidemia foi definida por colesterol total ≥230 mg/dl e/ou LDL ≥160 mg/dl e/ou TGs ≥200 mg/dl medidos por espectrofotometria colorimétrica (Roche Diagnostics) ou pelo uso de agentes hipolipemiantes de acordo com as diretrizes de execução realizadas durante o exame inicial. Além disso, são considerados fumantes apenas aqueles participantes que fumam ativamente no momento da inscrição. Além disso, a presença de história familiar positiva de doença arterial coronariana é definida como doença coronariana em parente de primeiro grau do sexo feminino antes dos 65 anos ou em parente do sexo masculino antes dos 55 anos de idade. O IMC é calculado como a razão entre o peso (kg) e o quadrado da altura (m2). Além disso, usamos o sistema de estimativa SCORE para calcular o risco cardiovascular de 10 anos para cada participante.

No que diz respeito à etnia, um indivíduo não é considerado grego caso tenha nascido no exterior e também tenha pelo menos um pai estrangeiro ou tenha nascido na Grécia, mas ambos os pais fossem estrangeiros. Inversamente, um sujeito era considerado grego se ele e simultaneamente ambos os pais tivessem nascido na Grécia.

Os critérios de exclusão são história de doença arterial coronariana (DAC), doença arterial periférica (DAP), insuficiência cardíaca (IC), acidente vascular cerebral, insuficiência hepática ou renal, neoplasia ativa e DM mal controlado, definido como Hba1C>7%.

AVALIAÇÃO DO GLICOCÁLICE ENDOTELIAL Quantificamos a região limítrofe perfundida (PBR, medida em μm) da microvasculatura sublingual usando Sideview Darkfield Imaging (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, UT, EUA). Resumidamente, a câmera SDF utiliza luz de diodo emissor de luz (LED) refletida verde (540 nm) de moléculas de hemoglobina para representar os deslocamentos radiais de hemácias dentro dos microvasos. A câmera é inserida sob a língua e captura mais de 3.000 segmentos vasculares de vasos com diâmetro variando de 5 μm a 25 μm. As imagens são obtidas automaticamente pelo software Glycocheck. Em seguida, o sistema verifica a qualidade das gravações e seleciona os quadros válidos (aumento de contraste maior que 60%), que serão posteriormente analisados. A largura da coluna de hemácias, bem como o diâmetro perfundido total dos microvasos, são estimados pelo software com alta precisão. Em seguida, o PBR é calculado pela fórmula [Perfused Diameter- RBC column width]/2. O software também fornece o PBR de vasos com diâmetro de 5-9μm, 10-19μm, 20-25μm e a média de 5-25μm Como resultado, PBR expressa a área externa do lúmen dos vasos que é vulnerável à penetração de hemácias e é consistente com a integridade da camada de glicocálix. Assim, altos valores de PBR são considerados como indicadores de glicocálice endotelial danificado com propriedades de barreira afetadas, o que permite alta distribuição espaço-temporal de hemácias. Por outro lado, valores baixos de PBR estão associados a uma espessa e robusta camada de glicocálix. Todo o procedimento dura aproximadamente 3 minutos, não requer grande especialização, é independente do operador, tem reprodutibilidade satisfatória e, portanto, é altamente recomendado como uma técnica validada para a avaliação da função do glicocálice endotelial. As medidas de PBR são independentes do enchimento de glóbulos vermelhos dos segmentos de vasos (hematócrito), pois o software inclui apenas segmentos de vasos com percentual de enchimento superior a 50%. Assim, os segmentos de vasos são selecionados apenas quando pelo menos 11 dos 21 marcadores de linha têm um sinal positivo para a presença de um eritrócito. Assim, os valores de PBR são independentes do hematócrito, refletindo um glicocálice danificado que é mais acessível para os eritrócitos circulantes.

Em nosso estudo a avaliação do PBR ocorre entre 9:00 e 11:00, após 8 horas de jejum e abstinência de álcool e fumo e suspensão temporária de medicamentos também por 48 horas antes do exame.

ACOMPANHAMENTO Realizamos um acompanhamento de nossa coorte de estudo 6 anos após o recrutamento por contato telefônico e consulta agendada no ambulatório. Resumidamente, na reavaliação, os participantes ou seus representantes legais - em caso de incapacidade ou morte - são questionados sobre a incidência de eventos cardiovasculares maiores ou morte atribuída a qualquer causa. O desfecho composto primário de eventos adversos maiores consiste em morte, infarto do miocárdio (CID-10: DI20-22), acidente vascular cerebral (CID-10: DI60-68; DG45) e hospitalização por insuficiência cardíaca (CID-10: DI50-51; DI42; DI11). Cada um dos eventos mencionados acima é documentado por registros médicos do hospital ou cartas dos médicos assistentes e confirmado pelos registros eletrônicos de segurança nacional usando o CID10 apropriado.

ANÁLISE ESTATÍSTICA

A análise estatística é realizada por SPSS versão 25 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL) e Stata versão 16 (StataCorp LP, College Station, TX). As variáveis ​​da escala são apresentadas como média ± DP no caso de distribuição normal, conforme determinado pelos testes de normalidade Kolmogorov-Smirnov e Shapiro-Wilk, ou como medianas e intervalos interquartis no caso de distribuição não normal. As variáveis ​​nominais são expressas como frequências e porcentagens. As variáveis ​​de escala são comparadas usando testes t de Student de amostras independentes ou testes de Mann-Whitney, conforme indicado, enquanto as variáveis ​​categóricas são comparadas usando testes qui-quadrado ou testes exatos de Fisher, conforme apropriado. Além disso, os pacientes são dicotomizados com base nos valores médios de PBR para o diâmetro do microvaso sublingual 5-25μm, 5-9 μm, 10-19 μm e 20-25 μm. Os modelos de risco proporcional de Cox são construídos para cada variável para decidir se algum dos valores médios das categorias de PBR acima pode servir como um preditor independente de eventos cardiovasculares maiores ou morte em um nível de significância de valor p<0,05. As taxas de eventos cumulativos são calculadas usando a análise de sobrevivência Kaplan-Meier para indivíduos com valor médio de PBR menor versus maior. O teste de log-rank para dados de tempo até o evento em relação ao total de eventos é usado para comparação desses dois grupos. Os modelos de risco proporcional de Cox são construídos para cada fator de risco possível em relação aos parâmetros do estudo. As taxas de risco estimadas e seus respectivos intervalos de confiança de 95% são obtidos. Valor de P<0,05 são considerados significativos. A análise multivariada inclui fatores com valor clínico comprovado ou valor p ≤0,1 na análise univariada. Além disso, comparamos os valores qui-quadrado de modelos multivariados antes e depois do ajuste para PBR. A alteração do qui-quadrado com valor de p<0,05 é considerada significativa. Além disso, calculamos o índice de reclassificação líquida (NRI) e o C de Harrell para avaliar a melhora na predição de risco por PBR e o valor de p<0,05 é considerado significativo.