Glycocalyx-integritetens rolle i den primære forebyggingen av store kardiovaskulære hendelser

Blodtrykket måles hos hvert individ ved hjelp av et digitalt oscillometrisk blodtrykksmåler (TensioMed, Budapest Hungary, Ltd). Hvert forsøksperson hviler i et stille rom ved 25°C i 30 minutter før eksamen. Mansjetten er plassert i høyre arm, mens motivet sitter. Diagnosen hypertensjon stilles på grunnlag av: 1) systolisk blodtrykk ≥140 mmHg/diastolisk blodtrykk ≥90 mmHg etter 3 påfølgende målinger eller 2) deltakeren får antihypertensiv behandling. I tillegg tas fastende blodprøver for å identifisere tilstedeværelsen av diabetes mellitus og hyperlipidemi i prøven vår. Spesifikt bestemmes DM ved enten plasmaglukose ≥ 126 mg/dl målt ved den enzymatiske in vitro-testen (Roche, automatisk kjemi-klinisk analysator) eller behandling med antidiabetiske midler. Tilsvarende ble hyperlipidemi definert av enten totalkolesterol ≥230 mg/dl, og/eller LDL ≥160 mg/dl, og/eller TGs ≥200 mg/dl målt ved kolorimetrisk spektrofotometri (Roche Diagnostics) eller bruk av lipidsenkende midler i henhold til kjøreretningslinjene som ble holdt under den innledende eksamen. I tillegg betraktes røykere bare de deltakerne som aktivt røyker på tidspunktet for påmelding. Tilstedeværelsen av positiv familiehistorie med koronararteriesykdom er også definert som koronarsykdom hos en førstegrads kvinnelig slektning før 65 år eller en mannlig slektning før 55 år. BMI beregnes som forholdet mellom vekt (kg) og kvadratet av høyde (m2). Videre bruker vi SCORE-estimeringssystemet for å beregne 10-års kardiovaskulær risiko for hver deltaker.

Når det gjelder etnisitet, regnes ikke en person som gresk i tilfelle han/hun er født i utlandet og også har minst en utenlandsk forelder, eller han/hun er født i Hellas, men begge foreldrene var utlendinger. Omvendt ble et emne ansett som gresk hvis de og begge foreldrene samtidig ble født i Hellas.

Eksklusjonskriterier er historie med koronararteriesykdom (CAD), perifer arteriell sykdom (PAD), hjertesvikt (HF), hjerneslag, lever- eller nyresvikt, aktiv neoplasi og dårlig kontrollert DM, definert som Hba1C>7 %.

ENDOTELIAL GLYCOCALYX EVALUERING Vi kvantifiserer den perfuserte grenseregionen (PBR, målt i μm) av den sublinguale mikrovaskulaturen ved å bruke Sideview Darkfield Imaging (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, UT, USA). Kort fortalt bruker SDF-kameraet grønt reflektert lysdiode (LED) lys (540 nm) fra hemoglobinmolekyler for å skildre de radielle forskyvningene av RBC i mikrokarene. Kameraet settes inn under tungen og fanger opp mer enn 3000 vaskulære segmenter av kar med diameter fra 5 μm til 25 μm. Bildene hentes automatisk av Glycocheck-programvaren. Etterpå sjekker systemet kvaliteten på opptakene og velger gyldige bilder (kontrastforbedring større enn 60%), som skal analyseres videre. RBC-kolonnebredden, så vel som den totale perfuserte diameteren til mikrokar estimeres av programvaren med høy nøyaktighet. Deretter beregnes PBR ved hjelp av formelen [Perfused Diameter- RBC column width]/2. Programvaren gir også PBR for kar med diameter 5-9μm, 10-19μm, 20-25μm og gjennomsnittlig 5-25μm Som et resultat, PBR uttrykker det ytre området av karets lumen som er sårbart for RBC-penetrasjon og er i samsvar med integriteten til glykokalyxlaget. Derfor betraktes høye PBR-verdier som en indikator på skadet endotelglykokalyx med påvirkede barriereegenskaper, noe som tillater høy spatio-temporal fordeling av RBC. På den annen side Omvendt er lave PBR-verdier assosiert med robust tykt glykokalyx-lag. Hele prosedyren varer i ca. 3 minutter, krever ikke høy ekspertise, er operatøruavhengig, har tilfredsstillende reproduserbarhet og anbefales derfor sterkt som en validert teknikk for vurdering av endotelglykokalyx-funksjon. PBR-målingene er uavhengige av røde blodlegemers fylling av karsegmentene (hematokrit), fordi programvaren kun inkluderer karsegmenter som har en fyllingsprosent på mer enn 50 %. Derfor velges karsegmenter bare når minst 11 av de 21-linjemarkørene har et positivt signal for tilstedeværelsen av en erytrocytt. Dermed er PBR-verdier uavhengige av hematokrit, og reflekterer en skadet glykokalyx som er mer tilgjengelig for sirkulerende erytrocytter.

I vår studie foregår evalueringen av PBR mellom 9:00 og 11:00, etter 8 timers faste og avholdenhet fra alkohol og røyking og midlertidig seponering av medisiner i 48 timer før undersøkelsen også.

OPPFØLGING Vi utfører oppfølging av vårt studiekull 6 år etter rekrutteringen via telefonisk kontakt og planlagt time på poliklinikken. Kort fortalt, ved revurderingen blir deltakerne eller deres juridiske representanter - i tilfelle manglende evne eller død - spurt om forekomsten av alvorlige kardiovaskulære hendelser eller dødsfall som kan tilskrives en hvilken som helst årsak. Det primære sammensatte utfallet av alvorlige uønskede hendelser består av død, hjerteinfarkt (ICD-10: DI20-22), hjerneslag (ICD-10: DI60-68; DG45) og sykehusinnleggelse for hjertesvikt (ICD-10: DI50-51; DI42; DI11). Hver av hendelsene med fornavn er dokumentert av sykehusjournaler eller behandlende legebrev og bekreftet av de elektroniske journalene for nasjonal sikkerhet ved bruk av riktig ICD10.

STATISTISK ANALYSE

Statistisk analyse utføres av SPSS versjon 25 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL) og Stata versjon 16 (StataCorp LP, College Station, TX). Skalavariabler presenteres som gjennomsnitt ±SD ved normalfordeling, bestemt av normalitetstestene Kolmogorov-Smirnov-testen og Shapiro-Wilk, eller som medianer og interkvartilområder ved ikke-normalfordeling. Nominelle variabler uttrykkes som frekvenser og prosenter. Skalavariabler sammenlignes ved å bruke uavhengige prøver Students t-tester eller Mann-Whitney-tester som angitt, mens kategoriske variabler sammenlignes ved bruk av Chi-kvadrat-tester eller Fishers eksakte tester, etter behov. I tillegg dikotomiseres pasientene basert på gjennomsnittsverdiene av PBR for den sublinguale mikrokardiameteren 5-25 μm, 5-9 μm, 10-19 μm og 20-25 μm. Cox proporsjonale faremodeller er bygget for hver variabel for å avgjøre om noen av gjennomsnittsverdiene for de ovennevnte PBR-kategoriene kan tjene som en uavhengig prediktor for store kardiovaskulære hendelser eller død ved et signifikansnivå på p-verdi <0,05. Kumulative hendelsesrater beregnes ved å bruke Kaplan-Meier-overlevelsesanalysen for forsøkspersoner med lavere kontra høyere gjennomsnittlig PBR-verdi. Logg-rangeringstesten for tid-til-hendelse-data med hensyn til de totale hendelsene brukes for sammenligning av disse to gruppene. Cox proporsjonale faremodeller er bygget for hver mulig risikofaktor i forhold til studiens endepunkt. Estimerte fareforhold og deres respektive 95 % konfidensintervaller oppnås. P-verdi <0,05 anses som signifikant. Multivariat analyse inkluderer faktorer med bevist klinisk verdi eller p-verdi ≤0,1 ved univariat analyse. Dessuten sammenligner vi kjikvadratverdier av multivariate modeller før og etter justering for PBR. Chi-kvadrat-endring med p-verdi <0,05 anses som signifikant. Videre beregner vi netto reklassifiseringsindeksen (NRI) og Harrells C for å evaluere forbedring i risikoprediksjon ved PBR og p-verdi <0,05 anses som signifikant.