Glycocalyx integritets roll i det primära förebyggandet av stora kardiovaskulära händelser

Blodtrycket mäts hos varje individ med hjälp av en digital oscillometrisk blodtrycksmätare (TensioMed, Budapest Hungary, Ltd). Varje försöksperson vilar i ett tyst rum vid 25°C i 30 minuter före undersökningen. Manschetten placeras i höger arm, medan motivet sitter. Diagnosen hypertoni ställs på basis av: 1) systoliskt blodtryck ≥140 mmHg/diastoliskt blodtryck ≥90 mmHg efter 3 på varandra följande mätningar eller 2) deltagaren får blodtryckssänkande behandling. Dessutom tas fastande blodprover för att identifiera förekomsten av diabetes mellitus och hyperlipidemi i vårt prov. Specifikt bestäms DM antingen av plasmaglukos ≥ 126 mg/dl mätt med det enzymatiska in vitro-testet (Roche, automatisk kemi-klinisk analysator) eller behandling med antidiabetiska medel. På liknande sätt definierades hyperlipidemi av antingen totalt kolesterol ≥230 mg/dl och/eller LDL ≥160 mg/dl och/eller TGs ≥200 mg/dl mätt med kolorimetrisk spektrofotometri (Roche Diagnostics) eller användning av lipidsänkande medel enligt de löpande riktlinjerna som hölls under den första tentamen. Dessutom anses rökare endast vara de deltagare som aktivt röker vid tidpunkten för inskrivningen. Dessutom definieras närvaron av positiv familjehistoria av kranskärlssjukdom som kranskärlssjukdom hos en kvinnlig släkting i första graden före 65 år eller en manlig släkting före 55 års ålder. BMI beräknas som förhållandet mellan vikt (kg) och kvadraten av höjd (m2). Dessutom använder vi SCORE-uppskattningssystemet för att beräkna den 10-åriga kardiovaskulära risken för varje deltagare.

När det gäller etnicitet anses en individ inte vara grek om han/hon är född utomlands och även har åtminstone en utländsk förälder eller han/hon är född i Grekland men båda föräldrarna var utlänningar. Omvänt betraktades ett ämne som grekiskt om de och båda föräldrarna samtidigt var födda i Grekland.

Uteslutningskriterier är historien om kranskärlssjukdom (CAD), perifer artärsjukdom (PAD), hjärtsvikt (HF), stroke, lever- eller njursvikt, aktiv neoplasi och dåligt kontrollerad DM, definierad som Hba1C>7%.

ENDOTELIAL GLYCOCALYX UTVÄRDERING Vi kvantifierar den perfunderade gränsregionen (PBR, mätt i μm) av den sublinguala mikrovaskulaturen genom att använda Sideview Darkfield Imaging (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, UT, USA). Kortfattat använder SDF-kameran grönt reflekterat lysdiod (LED) ljus (540 nm) från hemoglobinmolekyler för att avbilda de radiella förskjutningarna av RBC i mikrokärlen. Kameran sätts in under tungan och fångar mer än 3000 kärlsegment av kärl med en diameter från 5 μm till 25 μm. Bilderna erhålls automatiskt av programvaran Glycocheck. Efteråt kontrollerar systemet kvaliteten på inspelningarna och väljer giltiga bildrutor (kontrastförbättring större än 60%), som kommer att analyseras ytterligare. RBC-kolonnbredden, såväl som den totala perfunderade diametern för mikrokärl uppskattas av programvaran med hög noggrannhet. Sedan beräknas PBR med formeln [Perfused Diameter- RBC column width]/2. Programvaran tillhandahåller också PBR för kärl med diametern 5-9μm, 10-19μm, 20-25μm och medelvärdet 5-25μm Som ett resultat av detta, PBR uttrycker det yttre området av kärlens lumen som är känsligt för genomträngning av röda blodkroppar och överensstämmer med integriteten hos glykokalyxskiktet. Sålunda anses höga PBR-värden som en indikator på skadad endotelial glykokalyx med påverkade barriäregenskaper, vilket möjliggör hög spatio-temporal fördelning av RBC. Å andra sidan Omvänt är låga PBR-värden associerade med ett robust tjockt glykokalyxskikt. Hela proceduren varar i cirka 3 minuter, kräver ingen hög expertis, är operatörsoberoende, har tillfredsställande reproducerbarhet och rekommenderas därför starkt som en validerad teknik för bedömning av endotelglykokalyxfunktion. PBR-mätningarna är oberoende av röda blodkroppars fyllning av kärlsegmenten (hematokrit), eftersom programvaran endast inkluderar kärlsegment som har en fyllnadsprocent på mer än 50 %. Följaktligen väljs kärlsegment endast när minst 11 av markörerna med 21 linjer har en positiv signal för närvaron av en erytrocyt. Således är PBR-värden oberoende av hematokrit, vilket återspeglar en skadad glykokalyx som är mer tillgänglig för cirkulerande erytrocyter.

I vår studie sker utvärderingen av PBR mellan 9:00 och 11:00, efter 8 timmars fasta och avhållsamhet från alkohol och rökning samt tillfälligt utsättande av mediciner under 48 timmar även före undersökningen.

UPPFÖLJNING Vi gör en uppföljning av vår studiekohort 6 år efter rekryteringen via telefonkontakt och planerad tid på polikliniken. Kortfattat, vid omvärderingen tillfrågas deltagarna eller deras juridiska företrädare - i händelse av oförmåga eller dödsfall - om förekomsten av allvarliga kardiovaskulära händelser eller dödsfall som kan tillskrivas någon orsak. Det primära sammansatta resultatet av allvarliga biverkningar består av död, hjärtinfarkt (ICD-10: DI20-22), stroke (ICD-10: DI60-68; DG45) och sjukhusvistelse för hjärtsvikt (ICD-10: DI50-51; DI42; DI11). Var och en av de ovannämnda händelserna dokumenteras av sjukhusjournaler eller behandlande läkarbrev och bekräftas av den nationella säkerhetsjournalen med hjälp av lämplig ICD10.

STATISTISK ANALYS

Statistisk analys utförs av SPSS version 25 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL) och Stata version 16 (StataCorp LP, College Station, TX). Skalvariabler presenteras som medelvärde ±SD vid normalfördelning, enligt normalitetstesterna Kolmogorov-Smirnov-testet och Shapiro-Wilk, eller som medianer och interkvartilintervall vid icke-normalfördelning. Nominella variabler uttrycks som frekvenser och procentsatser. Skalvariabler jämförs med hjälp av oberoende stickprov Students t-test eller Mann-Whitney-test enligt vad som anges, medan kategoriska variabler jämförs med Chi-kvadrat-test eller Fishers exakta test, allt efter vad som är lämpligt. Dessutom dikotomiseras patienterna baserat på medelvärdena för PBR för den sublinguala mikrokärlens diameter 5-25 μm, 5-9 μm, 10-19 μm och 20-25 μm. Cox proportional hazard-modeller byggs för varje variabel för att avgöra om något av medelvärdena av ovanstående PBR-kategorier kan fungera som en oberoende prediktor för stora kardiovaskulära händelser eller död vid en signifikansnivå av p-värde <0,05. Kumulativa händelsefrekvenser beräknas med Kaplan-Meiers överlevnadsanalys för försökspersoner med lägre jämfört med högre medelvärde för PBR. Log-rank-testet för tid-till-händelsedata med avseende på totala händelser används för jämförelse av dessa två grupper. Cox proportional hazard-modeller byggs för varje möjlig riskfaktor i förhållande till studiens effektmått. Uppskattade riskkvoter och deras respektive 95 % konfidensintervall erhålls. P-värde <0,05 anses vara signifikanta. Multivariat analys inkluderar faktorer med bevisat kliniskt värde eller p-värde ≤0,1 vid univariat analys. Dessutom jämför vi chi-kvadratvärden för multivariatmodeller före och efter justering för PBR. Chi-kvadratförändring med p-värde <0,05 anses signifikant. Vidare beräknar vi nettoomklassificeringsindexet (NRI) och Harrells C för att utvärdera förbättringen av riskprediktionen genom PBR och p-värde <0,05 anses signifikant.