Role integrity glykokalyxu v primární prevenci závažných kardiovaskulárních příhod

Krevní tlak se měří u každého subjektu pomocí digitálního oscilometrického sfygmomanometru (TensioMed, Budapest Hungary, Ltd). Každý subjekt před vyšetřením odpočívá v tiché místnosti při 25 °C po dobu 30 minut. Manžeta je umístěna na pravé paži, zatímco subjekt sedí. Diagnóza hypertenze je stanovena na základě: 1) systolického krevního tlaku ≥140 mmHg/diastolického krevního tlaku ≥90 mmHg po 3 po sobě jdoucích měřeních nebo 2) účastnící se antihypertenzní léčby. Kromě toho se odebírají vzorky krve nalačno, aby se zjistila přítomnost diabetes mellitus a hyperlipidémie v našem vzorku. Konkrétně je DM stanovena buď plazmatickou glukózou ≥ 126 mg/dl měřenou enzymatickým in vitro testem (Roche, automatický chemický klinický analyzátor) nebo léčbou antidiabetiky. Podobně byla hyperlipidémie definována buď celkovým cholesterolem ≥ 230 mg/dl a/nebo LDL ≥ 160 mg/dl a/nebo TG ≥ 200 mg/dl měřeným kolorimetrickou spektrofotometrií (Roche Diagnostics) nebo použitím látek snižujících hladinu lipidů podle průběžných směrnic přijatých během vstupního vyšetření. Za kuřáky jsou navíc považováni pouze ti účastníci, kteří v době zápisu aktivně kouří. Také přítomnost pozitivní rodinné anamnézy ischemické choroby srdeční je definována jako ischemická choroba u příbuzného ženy prvního stupně před 65 lety nebo u příbuzného muže před 55 lety věku. BMI se vypočítá jako poměr hmotnosti (kg) ke druhé mocnině výšky (m2). Dále používáme systém odhadu SCORE k výpočtu 10letého kardiovaskulárního rizika pro každého účastníka.

Pokud jde o etnickou příslušnost, za Řeka se nepovažuje jedinec, který se narodil v zahraničí a má také alespoň rodiče cizince nebo se narodil v Řecku, ale oba rodiče byli cizinci. Naopak, subjekt byl považován za Řeka, pokud se oni a současně oba rodiče narodili v Řecku.

Kritéria pro vyloučení jsou anamnéza ischemické choroby srdeční (CAD), onemocnění periferních arterií (PAD), srdečního selhání (HF), cévní mozkové příhody, selhání jater nebo ledvin, aktivní neoplazie a špatně kontrolovaný DM, definované jako Hba1C>7 %.

HODNOCENÍ ENDOTELIÁLNÍHO GLYKOKALYX Kvantifikujeme perfundovanou hraniční oblast (PBR, měřeno v μm) sublingvální mikrovaskulatury pomocí Sideview Darkfield Imaging (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, UT, USA). Stručně řečeno, SDF kamera využívá zelené odražené světlo emitující diody (LED) (540 nm) z molekul hemoglobinu k zobrazení radiálních posunů červených krvinek v mikrocévách. Kamera je vložena pod jazyk a snímá více než 3000 cévních segmentů cév o průměru od 5 μm do 25 μm. Obrázky jsou získávány automaticky softwarem Glycocheck. Poté systém zkontroluje kvalitu nahrávek a vybere platné snímky (zvýšení kontrastu větší než 60 %), které budou dále analyzovány. Šířku RBC kolony, stejně jako celkový perfundovaný průměr mikrocév, odhaduje software s vysokou přesností. Poté se PBR vypočítá podle vzorce [Perfused Diameter-RBC column width]/2. Software také poskytuje PBR cév s průměrem 5-9μm, 10-19μm, 20-25μm a průměrem 5-25μm Výsledkem je PBR vyjadřuje vnější oblast lumen cév, která je zranitelná vůči penetraci RBC a je v souladu s integritou vrstvy glykokalyx. Vysoké hodnoty PBR jsou tedy považovány za indikátor poškozeného endoteliálního glykokalyxu s ovlivněnými bariérovými vlastnostmi, což umožňuje vysokou časoprostorovou distribuci červených krvinek. Na druhou stranu, naopak nízké hodnoty PBR jsou spojeny s robustní silnou vrstvou glykokalyx. Celý postup trvá přibližně 3 minuty, nevyžaduje vysokou odbornost, je nezávislý na operátorovi, má uspokojivou reprodukovatelnost, a proto je vysoce doporučován jako ověřená technika pro hodnocení funkce endoteliálních glykokalyx. Měření PBR jsou nezávislá na plnění segmentů cév červenými krvinkami (hematokrit), protože software zahrnuje pouze segmenty cév, které mají procento plnění větší než 50 %. Cévní segmenty jsou tedy vybírány pouze tehdy, když alespoň 11 z 21-řádkových markerů má pozitivní signál na přítomnost erytrocytu. Hodnoty PBR jsou tedy nezávislé na hematokritu a odrážejí poškozenou glykokalyxu, která je dostupnější pro cirkulující erytrocyty.

V naší studii se hodnocení PBR provádí mezi 9:00 a 11:00, po 8 hodinách hladovění a abstinence od alkoholu a kouření a také dočasné vysazení léků na 48 hodin před vyšetřením.

FOLLOW UP Sledování naší studijní kohorty provádíme 6 let po náboru prostřednictvím telefonického kontaktu a plánované návštěvy v ambulanci. Stručně řečeno, při přehodnocení jsou účastníci nebo jejich zákonní zástupci - v případě neschopnosti nebo smrti - dotazováni na výskyt závažných kardiovaskulárních příhod nebo úmrtí připisovaných jakékoli příčině. Primární složený výsledek závažných nežádoucích příhod sestává ze smrti, infarktu myokardu (MKN-10: DI20-22), cévní mozkové příhody (MKN-10: DI60-68; DG45) a hospitalizace pro srdeční selhání (MKN-10: DI50-51; DI42; DI11). Každá ze jmenovaných událostí je zdokumentována nemocničními lékařskými záznamy nebo dopisy od lékařů a potvrzena elektronickými záznamy národní bezpečnosti pomocí příslušného MKN10.

STATISTICKÁ ANALÝZA

Statistická analýza se provádí pomocí SPSS verze 25 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL) a Stata verze 16 (StataCorp LP, College Station, TX). Proměnné škály jsou prezentovány jako průměr ±SD v případě normálního rozdělení, jak je určeno testy normality Kolmogorov-Smirnov test a Shapiro-Wilk, nebo jako mediány a interkvartilové rozsahy v případě nenormálního rozdělení. Nominální proměnné jsou vyjádřeny jako četnosti a procenta. Proměnné škály se porovnávají pomocí nezávislých vzorků Studentovými t testy nebo Mann-Whitneyho testy, jak je uvedeno, zatímco kategorické proměnné se porovnávají pomocí Chí-kvadrát testů nebo Fisherových exaktních testů, podle potřeby. Kromě toho jsou pacienti dichotomizováni na základě středních hodnot PBR pro průměr sublingvální mikrocévy 5–25 μm, 5–9 μm, 10–19 μm a 20–25 μm. Pro každou proměnnou jsou sestaveny Coxovy proporcionální modely rizik, aby se rozhodlo, zda některá z průměrných hodnot výše uvedených kategorií PBR může sloužit jako nezávislý prediktor závažných kardiovaskulárních příhod nebo úmrtí na hladině významnosti p < 0,05. Kumulativní četnost příhod se vypočítá pomocí Kaplan-Meierovy analýzy přežití pro subjekty s nižší vs. vyšší střední hodnotou PBR. Pro srovnání těchto dvou skupin se používá log-rank test pro data od času do události vzhledem k celkovým událostem. Coxovy proporcionální modely rizik jsou sestaveny pro každý možný rizikový faktor ve vztahu ke koncovým bodům studie. Získají se odhadované poměry rizik a jejich příslušné 95% intervaly spolehlivosti. Hodnota P < 0,05 se považuje za významnou. Multivariační analýza zahrnuje faktory s prokázanou klinickou hodnotou nebo hodnotou p ≤ 0,1 při jednorozměrné analýze. Navíc porovnáváme chí-kvadrát hodnoty vícerozměrných modelů před a po úpravě o PBR. Změna chí kvadrát s hodnotou p < 0,05 je považována za významnou. Dále počítáme čistý reklasifikační index (NRI) a Harrellův C pro hodnocení zlepšení predikce rizika pomocí PBR a hodnota p<0,05 je považována za významnou.