Il ruolo dell'integrità del glicocalice nella prevenzione primaria dei principali eventi cardiovascolari

La pressione arteriosa viene misurata in ogni soggetto con l'ausilio di uno sfigmomanometro digitale oscillometrico (TensioMed, Budapest Hungary, Ltd). Ogni soggetto riposa in una stanza tranquilla a 25°C per 30 minuti prima dell'esame. Il bracciale è posto nel braccio destro, mentre il soggetto è seduto. La diagnosi di ipertensione viene effettuata sulla base di: 1) pressione arteriosa sistolica ≥140 mmHg/pressione arteriosa diastolica ≥90 mmHg dopo 3 misurazioni consecutive o 2) il partecipante sta ricevendo un trattamento antipertensivo. Inoltre vengono prelevati campioni di sangue a digiuno per identificare la presenza di diabete mellito e iperlipidemia nel nostro campione. Nello specifico, il DM è determinato dalla glicemia plasmatica ≥ 126 mg/dl misurata mediante il test enzimatico in vitro (Roche, analizzatore clinico di chimica automatica) o dal trattamento con agenti antidiabetici. Allo stesso modo, l'iperlipidemia è stata definita da Colesterolo totale ≥230 mg/dl e/o LDL ≥160 mg/dl e/o TG ≥200 mg/dl misurati mediante spettrofotometria colorimetrica (Roche Diagnostics) o dall'uso di agenti ipolipemizzanti secondo le linee guida tenute durante l'esame iniziale. Inoltre, i fumatori sono considerati solo quei partecipanti che fumano attivamente al momento dell'iscrizione. Inoltre, la presenza di anamnesi familiare positiva per malattia coronarica è definita come malattia coronarica in un parente di primo grado di sesso femminile prima dei 65 anni o in un parente di sesso maschile prima dei 55 anni di età. Il BMI è calcolato come il rapporto tra il peso (kg) e il quadrato dell'altezza (m2). Inoltre, utilizziamo il sistema di stima SCORE per calcolare il rischio cardiovascolare a 10 anni per ciascun partecipante.

Per quanto riguarda l'etnia, un individuo non è considerato greco se è nato all'estero e ha anche almeno un genitore straniero o se è nato in Grecia ma entrambi i genitori erano stranieri. Inversamente, un soggetto era considerato greco se lui e contemporaneamente entrambi i genitori erano nati in Grecia.

I criteri di esclusione sono la storia di coronaropatia (CAD), arteriopatia periferica (PAD), insufficienza cardiaca (HF), ictus, insufficienza epatica o renale, neoplasia attiva e DM scarsamente controllato, definito come Hba1C>7%.

VALUTAZIONE DEL GLICOCALIX ENDOTELIALE Quantifichiamo la regione di confine perfusa (PBR, misurata in μm) della microvascolarizzazione sublinguale utilizzando Sideview Darkfield Imaging (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, UT, USA) . In breve, la fotocamera SDF utilizza la luce del diodo a emissione di luce (LED) riflessa verde (540 nm) dalle molecole di emoglobina per rappresentare gli spostamenti radiali dei globuli rossi all'interno dei microvasi. La telecamera viene inserita sotto la lingua e cattura più di 3000 segmenti vascolari di vasi con diametro compreso tra 5 μm e 25 μm. Le immagini sono ottenute automaticamente dal software Glycocheck. Successivamente il sistema controlla la qualità delle registrazioni e seleziona i fotogrammi validi (miglioramento del contrasto superiore al 60%), che verranno ulteriormente analizzati. La larghezza della colonna RBC, così come il diametro totale perfuso dei microvasi, è stimata dal software con elevata precisione. Quindi il PBR viene calcolato con la formula [diametro perfuso - larghezza della colonna RBC]/2. Il software fornisce anche il PBR dei vasi con diametro 5-9μm, 10-19μm, 20-25μm e la media 5-25μm Di conseguenza, PBR esprime l'area esterna del lume dei vasi che è vulnerabile alla penetrazione dei globuli rossi ed è coerente con l'integrità dello strato di glicocalice. Pertanto, valori elevati di PBR sono considerati un indicatore di glicocalice endoteliale danneggiato con proprietà di barriera compromesse, che consente un'elevata distribuzione spazio-temporale dei globuli rossi. D'altra parte, al contrario, bassi valori di PBR sono associati a un robusto e spesso strato di glicocalice. L'intera procedura dura circa 3 minuti, non richiede competenze elevate, è indipendente dall'operatore, ha una riproducibilità soddisfacente ed è quindi altamente raccomandata come tecnica validata per la valutazione della funzione del glicocalice endoteliale. Le misurazioni del PBR sono indipendenti dal riempimento di globuli rossi dei segmenti vasali (ematocrito), poiché il software include solo i segmenti vasali con una percentuale di riempimento superiore al 50%. Quindi, i segmenti vascolari vengono selezionati solo quando almeno 11 dei marcatori a 21 linee hanno un segnale positivo per la presenza di un eritrocita. Pertanto, i valori PBR sono indipendenti dall'ematocrito, riflettendo un glicocalice danneggiato che è più accessibile per gli eritrociti circolanti .

Nel nostro studio la valutazione del PBR avviene tra le 9:00 e le 11:00, dopo 8 ore di digiuno e astinenza da alcol e fumo e anche temporanea sospensione dei farmaci per 48 ore prima dell'esame.

FOLLOW UP Eseguiamo un follow up della nostra coorte di studio 6 anni dopo l'arruolamento tramite contatto telefonico e appuntamento programmato presso l'ambulatorio. In sintesi, in sede di rivalutazione viene chiesta ai partecipanti o ai loro rappresentanti legali - in caso di inabilità o morte - l'incidenza di eventi cardiovascolari maggiori o morte attribuita a qualsiasi causa. L'esito composito primario degli eventi avversi maggiori è costituito da morte, infarto del miocardio (ICD-10: DI20-22), ictus (ICD-10: DI60-68; DG45) e ospedalizzazione per scompenso cardiaco (ICD-10: DI50-51; DI42; DI11). Ciascuno dei suddetti eventi è documentato da cartelle cliniche ospedaliere o lettere dei medici curanti e confermato dalle cartelle elettroniche di sicurezza nazionale utilizzando l'apposito ICD10.

ANALISI STATISTICA

L'analisi statistica viene eseguita da SPSS versione 25 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL) e Stata versione 16 (StataCorp LP, College Station, TX). Le variabili di scala sono presentate come media ± DS in caso di distribuzione normale, come determinato dai test di normalità Kolmogorov-Smirnov test e Shapiro-Wilk, o come mediane e intervalli interquartili in caso di distribuzione non normale. Le variabili nominali sono espresse come frequenze e percentuali. Le variabili di scala vengono confrontate utilizzando campioni indipendenti test t di Student o test di Mann-Whitney come indicato, mentre le variabili categoriali vengono confrontate utilizzando test chi-quadrato o test esatti di Fisher, a seconda dei casi. Inoltre, i pazienti sono dicotomizzati in base ai valori medi di PBR per il diametro dei microvasi sublinguali 5-25 μm, 5-9 μm, 10-19 μm e 20-25 μm. I modelli di rischio proporzionale di Cox sono costruiti per ciascuna variabile per decidere se uno qualsiasi dei valori medi delle suddette categorie PBR può servire come predittore indipendente di eventi cardiovascolari maggiori o morte a un livello di significatività di valore p<0,05. I tassi di eventi cumulativi sono calcolati utilizzando l'analisi di sopravvivenza di Kaplan-Meier per i soggetti con valore PBR medio inferiore rispetto a quello superiore. Il log-rank test per i dati time-to-event rispetto agli eventi totali viene utilizzato per il confronto di questi due gruppi. I modelli di rischio proporzionale di Cox sono costruiti per ogni possibile fattore di rischio in relazione agli endpoint dello studio. Si ottengono i rapporti di rischio stimati e i rispettivi intervalli di confidenza al 95%. Il valore P <0,05 è considerato significativo. L'analisi multivariata include fattori con valore clinico comprovato o valore p ≤0,1 all'analisi univariata. Inoltre, confrontiamo i valori chi-quadrato dei modelli multivariati prima e dopo l'aggiustamento per PBR. La variazione del chi quadro con valore p<0,05 è considerata significativa. Inoltre, calcoliamo l'indice di riclassificazione netto (NRI) e il C di Harrell per valutare il miglioramento della previsione del rischio mediante PBR e il valore p<0,05 è considerato significativo.