Glycocalyxin eheyden rooli suurten sydän- ja verisuonitapahtumien ensisijaisessa ehkäisyssä

Jokaiselta koehenkilöltä mitataan verenpaine digitaalisella oskillometrisellä sfygmomanometrillä (TensioMed, Budapest Hungary, Ltd). Jokainen koehenkilö lepää hiljaisessa huoneessa 25°C:ssa 30 minuuttia ennen tutkimusta. Mansetti asetetaan oikeaan käsivarteen kohteen istuessa. Hypertension diagnoosi tehdään seuraavien perusteella: 1) systolinen verenpaine ≥140 mmHg/diastolinen verenpaine ≥90 mmHg kolmen peräkkäisen mittauksen jälkeen tai 2) osallistuja saa verenpainetta alentavaa hoitoa. Lisäksi otetaan paastoverinäytteitä diabeteksen ja hyperlipidemian esiintymisen tunnistamiseksi näytteestämme. Tarkemmin sanottuna DM määritetään joko plasman glukoosilla ≥ 126 mg/dl mitattuna entsymaattisella in vitro -testillä (Roche, automaattinen kemian kliininen analysaattori) tai hoidolla diabeteslääkkeillä. Vastaavasti hyperlipidemia määritettiin joko kokonaiskolesteroliarvoilla ≥ 230 mg/dl ja/tai LDL:llä ≥ 160 mg/dl ja/tai TG:llä ≥ 200 mg/dl kolorimetrisellä spektrofotometrialla (Roche Diagnostics) tai lipidejä alentavien aineiden käytöllä. alkutarkastuksen aikana pidettyjen juoksuohjeiden mukaan. Lisäksi tupakoitsijoiksi lasketaan vain ne osallistujat, jotka tupakoivat aktiivisesti ilmoittautumisajankohtana. Myös positiivisen sepelvaltimotaudin esiintyminen suvussa määritellään sepelvaltimotaudiksi ensimmäisen asteen naissukulaisena ennen 65 vuotta tai miessukulaisen ennen 55 vuoden ikää. BMI lasketaan painon (kg) ja pituuden neliön (m2) suhteena. Lisäksi käytämme SCORE-arviointijärjestelmää laskeaksemme jokaisen osallistujan 10 vuoden kardiovaskulaarisen riskin.

Etnisen alkuperän osalta henkilöä ei pidetä kreikkalaisena, jos hän on syntynyt ulkomailla ja hänellä on myös vähintään ulkomaalainen vanhempi tai hän on syntynyt Kreikassa, mutta molemmat vanhemmat olivat ulkomaalaisia. Päinvastoin, henkilöä pidettiin kreikkalaisena, jos he ja molemmat vanhemmat olivat syntyneet Kreikassa.

Poissulkemiskriteereitä ovat sepelvaltimotaudin (CAD), ääreisvaltimotaudin (PAD), sydämen vajaatoiminnan (HF), aivohalvauksen, maksan tai munuaisten vajaatoiminnan, aktiivisen neoplasian ja huonosti hallitun DM:n, määriteltynä Hba1C>7%.

ENDOTEELIGLYKOKALYKSIN ARVIOINTI Määritämme sublingvaalisen mikroverisuonten perfusoidun raja-alueen (PBR, mitattuna μm) käyttämällä Sideview Darkfield Imaging -kuvausta (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, UT, USA). Lyhyesti sanottuna SDF-kamera käyttää vihreää heijastuvaa valoa emittoivaa diodivaloa (LED) (540 nm) hemoglobiinimolekyyleistä kuvaamaan punasolujen radiaaliset siirtymät mikrosuonissa. Kamera asetetaan kielen alle ja se tallentaa yli 3000 verisuonten segmenttiä, joiden halkaisija on 5 μm - 25 μm. Glycocheck - ohjelmisto hankkii kuvat automaattisesti . Sen jälkeen järjestelmä tarkistaa tallenteiden laadun ja valitsee kelvolliset kehykset (kontrastikorostus yli 60 %), joita analysoidaan edelleen. Ohjelmisto arvioi suurella tarkkuudella RBC-kolonnin leveyden sekä mikrosuonten kokonaishalkaisijan. Sitten PBR lasketaan kaavalla [Perfuusiohalkaisija-RBC kolonnin leveys]/2. Ohjelmisto tarjoaa myös PBR:n verisuonista, joiden halkaisija on 5-9 μm, 10-19 μm, 20-25 μm ja keskiarvo 5-25 μm. Tämän seurauksena PBR ilmaisee verisuonten luumenin ulkoalueen, joka on alttiina punasolujen tunkeutumiselle ja on yhdenmukainen glykokalyksikerroksen eheyden kanssa. Siten korkeita PBR-arvoja pidetään vaurioituneen endoteelin glykokalyksin indikaattorina, jolla on vaikuttaneet esteominaisuudet, mikä mahdollistaa punasolujen korkean spatio-temporaalisen jakautumisen. Toisaalta alhaiset PBR-arvot liittyvät vahvaan paksuun glykokaliksikerrokseen. Koko toimenpide kestää noin 3 minuuttia, ei vaadi suurta asiantuntemusta, on käyttäjästä riippumaton, sen toistettavuus on tyydyttävä, joten se on erittäin suositeltavaa validoituna tekniikana endoteelin glykokalyksin toiminnan arvioinnissa. PBR-mittaukset ovat riippumattomia verisuonisegmenttien punasolujen täyttymisestä (hematokriitti), koska ohjelmisto sisältää vain verisuonisegmentit, joiden täyttöprosentti on yli 50 %. Tästä syystä suonen segmentit valitaan vain, kun vähintään 11:llä 21-linjaisesta markkerista on positiivinen signaali erytrosyytin esiintymisestä. Siten PBR-arvot ovat riippumattomia hematokriitistä, mikä kuvastaa vaurioitunutta glykokaliksia, joka on helpommin saatavilla kiertäville punasoluille.

Tutkimuksessamme PBR:n arviointi tapahtuu klo 9.00-11.00, 8 tunnin paaston ja alkoholin ja tupakoinnin pidättäytymisen sekä lääkkeiden väliaikaisen lopettamisen jälkeen myös 48 tuntia ennen tutkimusta.

SEURANTA Suoritamme tutkimuskohorttimme seurannan 6 vuotta rekrytoinnin jälkeen puhelimitse ja suunnitellun ajan poliklinikalla. Lyhyesti sanottuna uudelleenarvioinnissa osallistujilta tai heidän laillisilta edustajiltaan - työkyvyttömyyden tai kuolemantapauksessa - kysytään merkittävien sydän- ja verisuonitapahtumien esiintyvyyttä tai mistä tahansa syystä johtuvaa kuolemaa. Suurten haittatapahtumien ensisijainen yhdistelmätulos koostuu kuolemasta, sydäninfarktista (ICD-10: DI20-22), aivohalvauksesta (ICD-10: DI60-68; DG45) ja sairaalahoidosta sydämen vajaatoiminnan vuoksi (ICD-10: DI50-51; DI42; DI11). Jokainen nimetty tapahtuma dokumentoidaan sairaalan potilaskertomusten tai lääkäreiden kirjeillä ja vahvistetaan kansallisen turvallisuuden sähköisillä tietueilla käyttäen asianmukaista ICD10:tä.

TILASTOLLINEN ANALYYSI

Tilastollisen analyysin suorittaa SPSS-versio 25 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL) ja Stata-versio 16 (StataCorp LP, College Station, TX). Asteikkomuuttujat esitetään normaalijakauman tapauksessa keskiarvona ±SD, joka on määritetty normaalijakauman Kolmogorov-Smirnov-testillä ja Shapiro-Wilk-testillä, tai mediaaneina ja interkvartiilialueina, jos kyseessä on normaalijakauma. Nimelliset muuttujat ilmaistaan ​​frekvensseinä ja prosentteina. Asteikkomuuttujia verrataan käyttämällä riippumattomia näytteitä Studentin t-testeillä tai Mann-Whitney-testeillä, kuten on osoitettu, kun taas kategorisia muuttujia verrataan käyttämällä Chi-neliötestejä tai Fisherin eksakteja testejä, tapauksen mukaan. Lisäksi potilaat jaetaan dikotomisoimalla PBR:n keskiarvojen perusteella sublingvaalisen mikrosuonen halkaisijan 5–25 μm, 5–9 μm, 10–19 μm ja 20–25 μm osalta. Cox-suhteelliset vaaramallit rakennetaan kullekin muuttujalle sen päättämiseksi, voiko jokin yllä olevien PBR-kategorioiden keskiarvoista toimia itsenäisenä ennustajana merkittäville kardiovaskulaarisille tapahtumille tai kuolemalle merkitsevyystasolla p-arvo <0,05. Kumulatiiviset tapahtumatiheydet lasketaan käyttämällä Kaplan-Meierin eloonjäämisanalyysiä koehenkilöille, joilla on pienempi tai korkeampi keskimääräinen PBR-arvo. Näiden kahden ryhmän vertailuun käytetään log-rank-testiä tapahtumien kokonaismäärään liittyville ajalle tapahtuville tiedoille. Coxin suhteelliset vaaramallit rakennetaan jokaiselle mahdolliselle riskitekijälle suhteessa tutkimuksen päätepisteisiin. Arvioidut vaarasuhteet ja niitä vastaavat 95 %:n luottamusvälit saadaan. P-arvoa < 0,05 pidetään merkitsevänä. Monimuuttuja-analyysi sisältää tekijöitä, joiden kliininen arvo on todistettu tai p-arvo ≤0,1 yksimuuttujaanalyysissä. Lisäksi vertaamme monimuuttujamallien khi-neliöarvoja ennen ja jälkeen PBR:n säätämisen. Chi-neliön muutos p-arvolla <0,05 katsotaan merkitseväksi. Lisäksi laskemme nettouudelleenluokitusindeksin (NRI) ja Harrellin C:n arvioidaksemme riskin ennusteen paranemista PBR:n perusteella ja p-arvoa <0,05 pidetään merkittävänä.