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结肠癌和非小细胞肺癌中树突状细胞的异质性 (TUM-DC)

2023年12月29日 更新者：University of Milano Bicocca

结肠癌和非小细胞肺癌中树突状细胞和其他髓样和淋巴样细胞的异质性

使用生物样本的前瞻性研究。 涉及的中心是蒙扎圣赫拉尔多医院的胸外科和外科 1 科。

研究概览

地位

招聘中

条件

干预/治疗

详细说明

背景适应性免疫应答的激活依赖于树突状细胞(DC)和巨噬细胞，先天免疫系统的骨髓细胞专门从事抗原呈递和T细胞的激活。 骨髓细胞的这种特性不仅在传染性疾病期间而且在癌症的背景下都是基本的，因为吞噬细胞拾取与癌细胞相关的抗原并将它们呈递给肿瘤微环境或肿瘤引流淋巴结中的 T 细胞以获得抗肿瘤反应.

特别是，在 DC 的总体肿瘤含量与不同肿瘤的癌症患者的生存之间观察到正相关，以及对基于使用免疫检查点抑制剂 (ICB) 的疗法的更好反应性。

最近揭示了不同树突细胞亚型的存在，以及每种亚型对肿瘤环境的特异性适应。

这是一个关键点，因为肿瘤微环境中 DC、巨噬细胞和 T 细胞的功能异质性可能是抗癌免疫疗法成功或失败的因素之一。 基于 ICB 的疗法彻底改变了黑色素瘤和肺癌等癌症患者的治疗方法，但目前仅对少数患者有益。 提高对肿瘤免疫微环境的理解是预测对现有疗法的临床反应以及可能开发新免疫疗法的关键。

基本原理 骨髓细胞，如树突细胞和巨噬细胞浸润许多不同类型的肿瘤，可以通过激活 T 细胞和 NK 细胞发挥抗肿瘤功能，或者它们可以通过产生抗炎细胞因子和抑制分子发挥促肿瘤活性。 几种常规 DC 亚型在肿瘤内的存在与更好的预后相关，而对于非常规 DC，例如 CD14 + CD1c + DC，已经提出了促肿瘤功能。 巨噬细胞的存在与促肿瘤作用有关。

研究人员假设，肿瘤微环境中骨髓细胞和 T 细胞的功能异质性是导致抗肿瘤免疫反应成功或失败的因素之一。 骨髓细胞亚型和肿瘤相关 T 细胞的高分辨率定义、它们的表型、肿瘤内的分布以及它们的功能特征将有助于了解肿瘤微环境的复杂性。

研究设计 收集后，每个样本都将被识别并标有唯一的 ID。 病理学家将对材料进行取样，并在采集了诊断所需的所有组织后选择可用于实验的组织。 研究样本将被放置在试管中并保存在冰上。 然后它将被送到米兰比可卡大学实验室。 将肿瘤切成碎片，并根据标准方案使用人肿瘤解离试剂盒和 gentleMACS ™ 解离器（Miltenyi Biotech）制备单细胞悬液。 然后通过密度梯度离心分离细胞悬液。

研究人员将对大约 60 名患者进行免疫荧光研究，对 4 名患者进行单细胞转录组学分析（单细胞 RNA-seq）。 由 4 名患者进行的单细胞分析已经证明足以识别不同的免疫细胞亚型。 将处理免疫细胞以获得富含骨髓细胞的细胞悬液。 这将允许对 DC、巨噬细胞和 CD4 + T 细胞进行准确的亚型分析，并识别甚至可能因稀释而在未选择的样本中丢失的非常罕见的细胞群。 预分类策略将基于 CD45 和 MHC II 类的表达以及 CD3、CD19、CD56、Ly6G 的表达缺失以排除 T、B、NK 和中性粒细胞。

不会存储剩余材料。 假设患者将在 5 年的时间内被纳入和分析。

有5个不同的任务：

Task1：单细胞RNA-seq文库的制备与测序；任务二：单细胞RNA-seq生物信息学分析；任务 3：肿瘤微环境中存在的 DC 亚型的流式细胞术分析；任务 4：肿瘤微环境中 DC 亚型的空间分布 任务 5：评估肿瘤微环境中存在的骨髓细胞亚型与生存之间的关联；

该研究将以数据的生物信息学分析结束，并通过流式细胞术分析对其进行验证

研究类型

观察性的

注册 (估计的)

64

联系人和位置

本节提供了进行研究的人员的详细联系信息，以及有关进行该研究的地点的信息。

学习联系方式

研究联系人备份

学习地点

  • 意大利
      • Monza、意大利
        • 尚未招聘
        • ASST Monza-C. CHIRURGIA GENERALE E D'URGENZA I
        • 接触：
          • Luca Nespoli
      • Monza、意大利
        • 招聘中
        • ASST Monza-Ospedale San Gerardo, S.C. Chirurgia Toracica
        • 接触：
          • Francesca Granucci
        • 接触：
          • Marco Scarci

参与标准

研究人员寻找符合特定描述的人，称为资格标准。这些标准的一些例子是一个人的一般健康状况或先前的治疗。

资格标准

适合学习的年龄

18年 及以上 (成人、年长者)

接受健康志愿者

不

取样方法

非概率样本

研究人群

NSCLC（原发肿瘤、邻近健康组织、血液）或结肠癌（原发肿瘤、邻近正常组织、血液）患者

描述

纳入标准：

  • ≥18岁的男性和女性；
  • 通过共同调查确认的临床诊断，以确定是否存在结肠癌或肺癌；
  • 病灶> 1 cm；
  • 根据 ICH / EU GCP 和国家/地方法规给予知情同意的法律能力。

排除标准：

  • 怀孕;
  • 推测怀孕；
  • 已知的凝血缺陷；
  • 酒精或药物滥用

学习计划

本节提供研究计划的详细信息，包括研究的设计方式和研究的衡量标准。

研究是如何设计的？

设计细节

  • 观测模型：队列
  • 时间观点：预期

队列和干预

团体/队列
干预/治疗
NSCLC 或结肠癌患者

对象为18岁以上患有结肠癌或肺癌的男性或女性；病变超过1厘米。 他们也能够给予知情同意。

病理学家将对材料进行取样，并在采集了诊断所需的所有组织后选择可用于实验的组织。 研究样本将被放置在试管中并保存在冰上。

然后它将被送到米兰比可卡大学实验室，在那里它将分析大约 60 名患者进行免疫荧光研究和 4 名患者进行单细胞转录组学分析
生物：单细胞转录组学数据的生物信息学分析
  1. 样品采集：骨髓细胞纯化+单细胞测序
  2. 初步分析：QC测序数据+Reads比对+UMI量化
  3. 生物信息学分析：质量控制（基因数量、UMI含量、%线粒体基因、%核糖蛋白基因、过滤低质量细胞）+归一化和缩放（归一化、去除不需要的变异源、HVG检测）+PCA聚类标记（PCA和PC选择、聚类、t-SNE、标记识别的差异表达）
  4. 验证：FACS 分析 + 免疫组化

研究衡量的是什么？

主要结果指标

结果测量
措施说明
大体时间
单细胞生物信息学分析 RNA-seq
大体时间：直到研究结束（大约 5 年）。
对于单细胞 RNA-seq 数据的分析，我们将利用 10x Genomics 和自定义 R/Python 脚本提供的最新方法来执行细胞子集的识别和表征。
直到研究结束（大约 5 年）。
单细胞 RNA-seq 文库制备和测序。
大体时间：直到研究结束（大约 5 年）。
每个样本的 10,000 个细胞将加载到称为 Chromium 10X（10x 基因组学）的仪器上。
直到研究结束（大约 5 年）。

次要结果测量

结果测量
措施说明
大体时间
DC亚型在肿瘤微环境中的空间分布
大体时间：直到研究结束（大约 5 年）。

Shapiro-Wilks 检验将用于检查连续变量是否服从正态分布。

当比较两个以上的组时，将使用 t 检验或方差分析 (ANOVA) 进行组间比较。

如果拒绝方差分析检验的零假设，将使用 Tukey 方法进行成对比较，以在存在多个非正交比较的情况下检查 α 误差。 如果变量不是正态分布的，将应用相应的非参数检验（Wilcoxon Mann Whitney 和 Kruskal-Wallis 检验）。

鉴于进行了大量测试，将应用阳性错误发现率 (pFDR) 方法来考虑多重性问题。
直到研究结束（大约 5 年）。
肿瘤微环境中骨髓细胞亚型与生存的相关性
大体时间：直到研究结束（大约 5 年）。
一个用于总体生存和无病生存的多变量 Cox 模型，包括在每个模型中所有基因联合使用“最小绝对收缩和选择算子”（LASSO）方法来选择与生存相关的实际基因并估计风险比（ HR) 和相应的 95% CI。
直到研究结束（大约 5 年）。

合作者和调查者

在这里您可以找到参与这项研究的人员和组织。

赞助

University of Milano Bicocca

出版物和有用的链接

负责输入研究信息的人员自愿提供这些出版物。这些可能与研究有关。

一般刊物

研究记录日期

这些日期跟踪向 ClinicalTrials.gov 提交研究记录和摘要结果的进度。研究记录和报告的结果由国家医学图书馆 (NLM) 审查，以确保它们在发布到公共网站之前符合特定的质量控制标准。

研究主要日期

学习开始 (实际的)

2021年2月9日

初级完成 (估计的)

2026年2月9日

研究完成 (估计的)

2026年2月9日

研究注册日期

首次提交

2021年2月17日

首先提交符合 QC 标准的

2021年3月4日

首次发布 (实际的)

2021年3月9日

研究记录更新

最后更新发布 (估计的)

2024年1月1日

上次提交的符合 QC 标准的更新

2023年12月29日

最后验证

2023年12月1日

更多信息

与本研究相关的术语

关键字

其他相关的 MeSH 术语

其他研究编号

  • TUM-DC

计划个人参与者数据 (IPD)

计划共享个人参与者数据 (IPD)？

不

药物和器械信息、研究文件

研究美国 FDA 监管的药品

不

研究美国 FDA 监管的设备产品

不

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