Dendrites sejtek heterogenitása vastagbél- és nem-kissejtes tüdőrákban (TUM-DC)

HÁTTÉR Az adaptív immunválaszok aktiválódása a dendritikus sejtektől (DC-k) és makrofágoktól függ, amelyek a veleszületett immunrendszer mieloid sejtjei, amelyek antigénprezentációra és T-sejtek aktiválására specializálódtak. A mieloid sejtek ezen sajátossága nemcsak fertőző betegségek, hanem rák összefüggésében is alapvető fontosságú, mivel a fagociták felveszik a rákos sejtekhez kapcsolódó antigéneket, és bemutatják azokat a T-sejteknek a tumor mikrokörnyezetében vagy a daganatelvezető nyirokcsomókban, hogy daganatellenes választ kapjanak. .

Pozitív korrelációt figyeltek meg különösen a DC teljes daganattartalma és a különböző daganatokban szenvedő rákos betegek túlélése között, valamint az immunellenőrzési pont inhibitorok (ICB) alkalmazásán alapuló terápiákkal szembeni jobb reaktivitást.

A közelmúltban feltárták a különböző dendritesejt-altípusok jelenlétét, valamint az egyes altípusok specifikus alkalmazkodását a tumor környezetéhez.

Ez kritikus pont, mivel a DC-k, makrofágok és T-sejtek funkcionális heterogenitása a tumor mikrokörnyezetében valószínűleg az egyik tényező, amely felelős a rákellenes immunterápiák sikeréért vagy kudarcáért. Az ICB-alapú terápiák forradalmasították a rákos megbetegedések, például a melanóma és a tüdőrák kezelését, de jelenleg csak a betegek kisebb része számára előnyösek. A daganatos immunrendszer mikrokörnyezetének jobb megértése a kulcsa a meglévő terápiákra adott klinikai válaszok előrejelzésének és esetleg új immunterápiák kifejlesztésének.

INDOKOLÁS A mieloid sejtek, mint például a dendritikus sejtek és a makrofágok számos különböző típusú daganatba beszűrődnek, és tumorellenes funkciót fejthetnek ki a T és NK sejtek aktiválásával, vagy pro-tumor aktivitást fejthetnek ki gyulladásgátló citokinek és gátló molekulák termelésével. Számos hagyományos DC-altípus jelenléte a daganatban jobb prognózissal jár, míg a nem hagyományos DC-k esetében, mint például a CD14 + CD1c + DC, tumor-elősegítő funkciót javasoltak. A makrofágok jelenlétét protumorális hatáshoz hozzák összefüggésbe.

A kutatók azt feltételezik, hogy a mieloid sejtek és T-sejtek funkcionális heterogenitása a tumor mikrokörnyezetében az egyik olyan tényező, amely felelős a daganatellenes immunválasz sikeréért vagy kudarcáért. A mieloid sejtaltípusok és a daganathoz kötődő T-sejtek nagy felbontású meghatározása, fenotípusa, daganaton belüli eloszlása, valamint funkcionális jellemzői segítenek megérteni a tumor mikrokörnyezetének összetettségét.

A VIZSGÁLAT TERVEZÉSE A begyűjtéskor minden mintát azonosítanak és egyedi azonosítóval látnak el. A patológus mintát vesz az anyagból, és kiválasztja a kísérlethez felhasználható szövetet, miután minden diagnosztikai célból szükséges. A kutatási mintát kémcsövekbe helyezik és jégen tartják. Ezt követően elküldik a Milano-Bicocca Egyetem laboratóriumába. A daganatot darabokra vágják, és egysejt-szuszpenziókat készítenek a humán tumor disszociációs készlettel és a gentleMACS™ disszociátorral (Miltenyi Biotech) a szabványos protokoll szerint. A sejtszuszpenziókat ezután sűrűséggradiens centrifugálással izoláljuk.

A kutatók hozzávetőleg 60 beteget fognak elemezni immunfluoreszcenciás vizsgálatokhoz és 4 beteget egysejt-transzkriptomikai analízishez (egysejtes RNS-szekvencia). A 4 beteg által végzett egysejtes elemzés már elegendőnek bizonyult az immunsejtek különböző altípusainak azonosításához. Az immunsejteket úgy kezeljük, hogy mieloid sejtekben dúsított sejtszuszpenziót kapjunk. Ez lehetővé teszi a DC, a makrofágok és a CD4 + T-sejtek pontos altípus-elemzését, és még a nagyon ritka populációk azonosítását is, amelyek a hígítás miatt elveszhetnek a nem kiválasztott mintákban. Az előválogatási stratégia a CD45 és a II. osztályú MHC expresszióján, valamint a CD3, CD19, CD56, Ly6G expressziójának hiányán fog alapulni a T, B, NK és neutrofilek kizárása érdekében.

A maradék anyagot nem tároljuk. Feltételezhető, hogy a betegek felvétele és elemzése 5 éven keresztül történik.

5 különböző feladat van:

1. feladat: Az egysejtű RNS-seq könyvtár elkészítése és szekvenálása; 2. feladat: Egysejtes RNS-seq bioinformatikai elemzés; 3. feladat: A tumor mikrokörnyezetében jelenlévő DC altípusok áramlási citometriás elemzése; 4. feladat: A DC altípusok térbeli eloszlása ​​a tumor mikrokörnyezetében 5. feladat: A daganat mikrokörnyezetében jelenlévő myeloid sejtek altípusai és a túlélés közötti összefüggés értékelése;

A tanulmány az adatok bioinformatikai elemzésével és áramlási citometriás elemzésekkel történő validálásával zárul.