Heterogenitet av dendritiska celler i kolon och icke-småcellig lungcancer (TUM-DC)

BAKGRUND Aktiveringen av adaptiva immunsvar beror på dendritiska celler (DC) och makrofager, myeloidceller i det medfödda immunsystemet specialiserade på antigenpresentation och på aktivering av T-celler. Denna egenhet hos myeloidceller är grundläggande inte bara under infektionssjukdomar utan också i samband med cancer, eftersom fagocyter plockar upp antigener associerade med cancerceller och presenterar dem för T-celler i tumörens mikromiljö eller i tumördränerande lymfkörtlar för att få antitumörsvar. .

I synnerhet observerades en positiv korrelation mellan det totala tumörinnehållet i DC och överlevnaden för cancerpatienter med olika tumörer, samt en bättre reaktivitet mot terapier baserade på användning av immunocheckpoint-hämmare (ICB).

Förekomsten av olika dendritiska cellsubtyper har nyligen avslöjats, liksom en specifik anpassning av varje subtyp till tumörmiljön.

Detta är en kritisk punkt eftersom den funktionella heterogeniteten hos DCs, makrofager och T-celler i tumörmikromiljön förmodligen är en av de faktorer som är ansvariga för framgång eller misslyckande av anticancerimmunterapier. ICB-baserade terapier har revolutionerat behandlingen av patienter med cancer, såsom melanom och lungcancer, men är för närvarande bara fördelaktigt för en minoritet av patienterna. Att förbättra förståelsen av tumörens immunmikromiljö är nyckeln till att förutsäga kliniska svar på befintliga terapier och möjligen utvecklingen av nya immunterapier.

MOTIVERING Myeloidceller, såsom dendritiska celler och makrofager, infiltrerar många olika typer av tumörer och kan utöva en antitumörfunktion genom att aktivera T- och NK-celler, eller så kan de utföra en protumöraktivitet genom att producera antiinflammatoriska cytokiner och hämmande molekyler. Närvaron i tumören av flera konventionella DC-subtyper har associerats med en bättre prognos medan en protumörfunktion har föreslagits för okonventionella DC:er såsom CD14 + CD1c + DC. Närvaron av makrofager har associerats med en protumoral verkan.

Utredarna antar att den funktionella heterogeniteten hos myeloidceller och T-celler inom tumörmikromiljön är en av de faktorer som är ansvariga för framgång eller misslyckande av antitumörimmunsvar. Högupplöst definition av myeloida cellsubtyper och tumörassocierade T-celler, deras fenotyp, distribution inom tumören, såväl som deras funktionella egenskaper kommer att hjälpa till att förstå komplexiteten i tumörmikromiljön.

STUDIEDESIGN Vid insamling kommer varje prov att identifieras och märkas med ett unikt ID. Patologen kommer att prova materialet och välja ut den vävnad som kan användas för experimentet efter att ha tagit allt som behövs för diagnostiska ändamål. Forskningsprovet kommer att placeras i provrör och förvaras på is. Det kommer sedan att skickas till University of Milano-Bicocca laboratorium. Tumören kommer att skäras i bitar och encellssuspensioner kommer att beredas med humantumördissociationskit och gentleMACS™-dissociatorn (Miltenyi Biotech) enligt standardprotokollet. Cellsuspensioner kommer sedan att isoleras genom densitetsgradientcentrifugering.

Utredarna kommer att analysera cirka 60 patienter för immunofluorescensstudier och 4 patienter för transkriptomiska analyser av en cell (enkelcells-RNA-seq). Encellsanalys utförd av 4 patienter har redan visat sig vara tillräcklig för att identifiera olika subtyper av immunceller. Immunceller kommer att behandlas för att erhålla en cellsuspension berikad på myeloidceller. Detta kommer att möjliggöra noggrann subtypanalys av DC, makrofager och CD4+ T-celler och för att identifiera även mycket sällsynta populationer som kan gå förlorade i oselekterade prover på grund av utspädning. Försorteringsstrategin kommer att baseras på uttrycket av CD45 och MHC klass II och på frånvaron av uttryck av CD3, CD19, CD56, Ly6G för att utesluta T, B, NK och neutrofiler.

Restmaterial kommer inte att lagras. Det antas att patienterna kommer att inskrivas och analyseras under en 5-årsperiod.

Det finns 5 olika uppgifter:

Uppgift 1: Förberedelse och sekvensering av encells-RNA-seq-biblioteket; Uppgift 2: Encells RNA-seq bioinformatikanalys; Uppgift 3: Flödescytometrisk analys av DC-subtyper som finns i tumörmikromiljön; Uppgift 4: Spatial distribution av DC-subtyper i tumörmikromiljön Uppgift 5: Utvärdering av sambandet mellan subtyper av myeloidceller som finns i tumörmikromiljön och överlevnad;

Studien kommer att avslutas med bioinformatisk analys av data och validering av dem genom flödescytometriska analyser