대장암과 비소세포폐암에서 수지상세포의 이질성 (TUM-DC)

적응 면역 반응의 활성화는 수지상 세포(DC) 및 대식세포, 항원 제시 및 T 세포 활성화에 특화된 선천성 면역계의 골수 세포에 의존한다. 골수 세포의 이러한 특이성은 감염성 질병뿐만 아니라 암과 관련하여 기본적입니다. 식세포는 암세포와 관련된 항원을 선택하여 종양 미세 환경 또는 종양 배수 림프절 내의 T 세포에 제시하여 항종양 반응을 얻습니다. .

특히, DC의 전체 종양 함량과 다른 종양을 가진 암 환자의 생존 사이에 양의 상관관계가 관찰되었으며, 면역관문억제제(ICB) 사용에 기초한 치료법에 대한 더 나은 반응성이 관찰되었습니다.

서로 다른 수지상 세포 아형의 존재와 종양 환경에 대한 각 아형의 특정 적응이 최근에 밝혀졌습니다.

이것은 종양 미세 환경에서 DC, 대식세포 및 T 세포의 기능적 이질성이 아마도 항암 면역 요법의 성공 또는 실패를 담당하는 요인 중 하나이기 때문에 중요한 포인트입니다. ICB 기반 치료법은 흑색종 및 폐암과 같은 암 환자의 치료에 혁명을 일으켰지만 현재는 소수의 환자에게만 유익합니다. 종양 면역 미세 환경에 대한 이해를 높이는 것은 기존 치료법에 대한 임상 반응을 예측하고 새로운 면역 치료법을 개발하는 데 핵심입니다.

근거 수지상 세포 및 대식세포와 같은 골수 세포는 다양한 유형의 종양에 침투하여 T 및 NK 세포를 활성화하여 항종양 기능을 발휘하거나 항염증성 사이토카인 및 억제 분자를 생성하여 전종양 활동을 수행할 수 있습니다. 몇 가지 기존의 DC 하위 유형의 종양 내 존재는 더 나은 예후와 관련이 있는 반면, CD14 + CD1c + DC와 같은 비전통적인 DC에 대해 프로-종양 기능이 제안되었습니다. 대식세포의 존재는 원종양 작용과 관련이 있습니다.

연구자들은 종양 미세 환경 내 골수 세포와 T 세포의 기능적 이질성이 항종양 면역 반응의 성공 또는 실패에 책임이 있는 요인 중 하나라는 가설을 세웠습니다. 골수 세포 아형 및 종양 관련 T 세포, 표현형, 종양 내 분포, 기능적 특성의 고해상도 정의는 종양 미세 환경의 복잡성을 이해하는 데 도움이 될 것입니다.

연구 설계 수집 시 각 샘플을 식별하고 고유 ID로 레이블을 지정합니다. 병리학자는 재료를 샘플링하고 진단 목적에 필요한 모든 것을 취한 후 실험에 사용할 수 있는 조직을 선택합니다. 연구 샘플은 시험관에 넣고 얼음에 보관합니다. 그런 다음 University of Milano-Bicocca 실험실로 보내집니다. 종양을 조각으로 자르고 단일 세포 현탁액을 표준 프로토콜에 따라 인간 종양 해리 키트 및 gentleMACS™ 해리기(Miltenyi Biotech)로 준비합니다. 세포 현탁액은 밀도 구배 원심 분리에 의해 분리됩니다.

조사관은 면역형광 연구를 위해 약 60명의 환자를 분석하고 단일 세포 전사체 분석(단일 세포 RNA-seq)을 위해 4명의 환자를 분석할 것입니다. 4명의 환자가 수행한 단일 세포 분석은 이미 면역 세포의 다른 아형을 식별하기에 충분한 것으로 나타났습니다. 면역 세포는 골수 세포가 풍부한 세포 현탁액을 얻기 위해 처리됩니다. 이를 통해 DC, 대식세포 및 CD4 + T 세포의 정확한 아형 분석이 가능하고 희석으로 인해 선택되지 않은 샘플에서 손실될 수 있는 매우 희귀한 집단도 식별할 수 있습니다. 사전 분류 전략은 T, B, NK 및 호중구를 제외하기 위해 CD45 및 MHC 클래스 II의 발현과 CD3, CD19, CD56, Ly6G의 발현 부재를 기반으로 합니다.

잔여 자료는 저장되지 않습니다. 5년 동안 환자를 등록하고 분석할 것으로 가정합니다.

5가지 다른 작업이 있습니다.

작업 1: 단일 세포 RNA-seq 라이브러리의 준비 및 시퀀싱 작업 2: 단일 세포 RNA-seq 생물 정보학 분석; 작업 3: 종양 미세 환경에 존재하는 DC 아형의 유세포 분석; 작업 4: 종양 미세환경에서 DC 아형의 공간적 분포 작업 5: 종양 미세환경에 존재하는 골수 세포의 아형과 생존 사이의 연관성 평가;

연구는 데이터의 생물 정보학 분석 및 유세포 분석을 통한 검증으로 끝납니다.