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結腸癌および非小細胞肺癌における樹状細胞の不均一性 (TUM-DC)

2023年12月29日 更新者：University of Milano Bicocca

結腸癌および非小細胞肺癌における樹状細胞と骨髄系およびリンパ系由来の他の細胞の不均一性

生体サンプルを使用した前向き研究。 関与するセンターは、モンツァのサン ヘラルド病院の胸部外科と外科 1 ユニットです。

調査の概要

状態

募集

条件

介入・治療

詳細な説明

背景 適応免疫応答の活性化は、抗原提示と T 細胞の活性化に特化した自然免疫系の骨髄細胞である樹状細胞 (DC) とマクロファージに依存します。 骨髄細胞のこの特異性は、感染症だけでなくがんの状況においても基本的なものであり、食細胞ががん細胞に関連する抗原を拾い上げ、腫瘍微小環境または腫瘍流入リンパ節内のT細胞に提示して抗腫瘍反応を得るからです。 。

特に、DC の全体的な腫瘍含有量とさまざまな腫瘍を有するがん患者の生存との間には正の相関が観察され、免疫チェックポイント阻害剤 (ICB) の使用に基づく治療に対する反応性も良好でした。

最近、さまざまな樹状細胞サブタイプの存在と、腫瘍環境に対する各サブタイプの特異的な適応が明らかになりました。

腫瘍微小環境における DC、マクロファージ、および T 細胞の機能的不均一性がおそらく抗がん免疫療法の成功または失敗に関与する要因の 1 つであるため、これは重要な点です。 ICB ベースの治療は、黒色腫や肺がんなどのがん患者の治療に革命をもたらしましたが、現時点では少数の患者にしか有益ではありません。 腫瘍の免疫微小環境についての理解を深めることは、既存の治療法に対する臨床反応を予測し、場合によっては新しい免疫療法の開発を予測するための鍵となります。

根拠 樹状細胞やマクロファージなどの骨髄細胞は、さまざまな種類の腫瘍に浸潤し、T 細胞や NK 細胞を活性化することによって抗腫瘍機能を発揮したり、抗炎症性サイトカインや阻害分子を産生することによって前腫瘍活性を発揮したりできます。 腫瘍内にいくつかの従来型 DC サブタイプが存在することは、より良好な予後と関連している一方、CD14 + CD1c + DC などの従来型ではない DC については前腫瘍機能が提案されています。 マクロファージの存在は腫瘍促進作用と関連しています。

研究者らは、腫瘍微小環境内の骨髄細胞と T 細胞の機能的不均一性が、抗腫瘍免疫応答の成否を左右する要因の 1 つであると仮説を立てています。 骨髄細胞のサブタイプと腫瘍関連 T 細胞、それらの表現型、腫瘍内の分布、および機能的特徴を高解像度で定義することは、腫瘍微小環境の複雑さを理解するのに役立ちます。

研究設計 収集時に、各サンプルは識別され、一意の ID が付けられます。 病理学者は材料をサンプリングし、診断目的に必要なものをすべて採取した後、実験に使用できる組織を選択します。 研究サンプルは試験管に入れられ、氷上に保管されます。 その後、ミラノ大学ビコッカ研究所に送られます。 腫瘍は細かく切断され、標準プロトコールに従ってヒト腫瘍解離キットおよびgentleMACS ™ 解離器（Miltenyi Biotech）を使用して単一細胞懸濁液が調製されます。 次に、細胞懸濁液は密度勾配遠心分離によって分離されます。

研究者らは、免疫蛍光研究のために約60人の患者を分析し、単一細胞トランスクリプトーム分析（単一細胞RNA-seq）のために4人の患者を分析する予定です。 4人の患者によって行われた単一細胞分析は、免疫細胞の異なるサブタイプを特定するのに十分であることをすでに示しています。 免疫細胞は、骨髄細胞が豊富に含まれる細胞懸濁液を得るために処理されます。 これにより、DC、マクロファージ、CD4 + T 細胞の正確なサブタイプ分析が可能になり、選択されていないサンプルでは希釈により失われる可能性のある非常にまれな集団も同定できます。 事前選別戦略は、CD45 および MHC クラス II の発現と、CD3、CD19、CD56、Ly6G の発現の欠如に基づいて、T、B、NK、および好中球を除外します。

残材は保管されません。 患者が登録され、5 年間にわたって分析されることが想定されています。

5 つの異なるタスクがあります。

タスク 1: 単一細胞 RNA-seq ライブラリーの調製と配列決定。タスク 2: 単一細胞 RNA-seq バイオインフォマティクス分析。タスク 3: 腫瘍微小環境に存在する DC サブタイプのフローサイトメトリー分析。タスク 4: 腫瘍微小環境における DC サブタイプの空間分布 タスク 5: 腫瘍微小環境に存在する骨髄細胞のサブタイプと生存との関連性の評価。

この研究は、データのバイオインフォマティクス分析とフローサイトメトリー分析によるデータの検証で終了します。

研究の種類

観察的

入学 (推定)

64

連絡先と場所

このセクションには、調査を実施する担当者の連絡先の詳細と、この調査が実施されている場所に関する情報が記載されています。

研究連絡先

研究連絡先のバックアップ

研究場所

  • イタリア
      • Monza、イタリア
        • まだ募集していません
        • ASST Monza-C. CHIRURGIA GENERALE E D'URGENZA I
        • コンタクト：
          • Luca Nespoli
      • Monza、イタリア
        • 募集
        • ASST Monza-Ospedale San Gerardo, S.C. Chirurgia Toracica
        • コンタクト：
          • Francesca Granucci
        • コンタクト：
          • Marco Scarci

参加基準

研究者は、適格基準と呼ばれる特定の説明に適合する人を探します。これらの基準のいくつかの例は、人の一般的な健康状態または以前の治療です。

適格基準

就学可能な年齢

18年歳以上 (大人、高齢者)

健康ボランティアの受け入れ

いいえ

サンプリング方法

非確率サンプル

調査対象母集団

NSCLC（原発腫瘍、隣接する健康な組織、血液）または結腸がん（原発腫瘍、隣接する正常組織、血液）の患者

説明

包含基準:

  • 18歳以上の男性と女性。
  • 結腸がんまたは肺がんの存在を確立するための一般的な検査によって確認された臨床診断。
  • 病変＞1cm。
  • ICH / EU GCP および国 / 地方の規制に従ってインフォームド・コンセントを与える法的能力。

除外基準:

  • 妊娠;
  • 推定妊娠。
  • 既知の凝固欠陥。
  • アルコールまたは薬物乱用

研究計画

このセクションでは、研究がどのように設計され、研究が何を測定しているかなど、研究計画の詳細を提供します。

研究はどのように設計されていますか？

デザインの詳細

  • 観測モデル：コホート
  • 時間の展望：見込みのある

コホートと介入

グループ/コホート
介入・治療
NSCLCまたは結腸がんの患者

対象は結腸がんまたは肺がんを患っている18歳以上の男性または女性です。傷は1cm以上あります。 インフォームド・コンセントを与えることもできます。

病理学者は材料をサンプリングし、診断目的に必要なものをすべて採取した後、実験に使用できる組織を選択します。 研究サンプルは試験管に入れられ、氷上に保管されます。

その後、ミラノ大学ビコッカ研究所に送られ、そこで免疫蛍光研究のために約60人の患者、単一細胞トランスクリプトーム分析のために4人の患者が分析されます。
生物学的：単一細胞トランスクリプトミクスデータのバイオインフォマティクス分析
  1. サンプル収集: 骨髄細胞精製 + 単一細胞シーケンシング
  2. 一次分析: QC シーケンスデータ + リードアラインメント + UMI 定量化
  3. バイオインフォマティクス分析: 品質管理 (遺伝子数、UMI 含量、ミトコンドリア遺伝子 %、リボタンパク質遺伝子 %、低品質細胞のフィルタリング) + 正規化およびスケーリング (正規化、不要な変動源の除去、HVG 検出) + PCA クラスタリング マーカー (PCA および PC)選択、クラスタリング、t-SNE、マーカー同定のための発現差)
  4. 検証: FACS 分析 + 免疫組織化学

この研究は何を測定していますか？

主要な結果の測定

結果測定
メジャーの説明
時間枠
単一細胞バイオインフォマティクス解析 RNA-seq
時間枠：研究終了まで（約5年間）。
単一細胞の RNA-seq データの分析では、10x Genomics とカスタム R/Python スクリプトの両方によって提供される最新の方法論を利用して、細胞サブセットの同定と特性評価を実行します。
研究終了まで（約5年間）。
単一細胞 RNA-seq ライブラリーの調製とシーケンス。
時間枠：研究終了まで（約5年間）。
各サンプルの 10,000 個の細胞が、Chromium 10X (10x genomics) と呼ばれる装置にロードされます。
研究終了まで（約5年間）。

二次結果の測定

結果測定
メジャーの説明
時間枠
腫瘍微小環境における DC サブタイプの空間分布
時間枠：研究終了まで（約5年間）。

Shapiro-Wilks 検定は、連続変数が正規分布に従うかどうかを確認するために使用されます。

2 つ以上のグループを比較する場合、グループ間の比較は t 検定または分散分析 (ANOVA) を使用して実行されます。

ANOVA 検定で帰無仮説が棄却された場合、複数の非直交比較が存在する場合の α 誤差をチェックするために Tukey 法を使用してペアごとの比較が行われます。 変数が正規分布していない場合は、対応するノンパラメトリック テスト (Wilcoxon Mann Whitney および Kruskal-Wallis テスト) が適用されます。

実行されるテストの数が多いことを考慮して、多重度の問題を考慮するために陽性偽発見率 (pFDR) 法が適用されます。
研究終了まで（約5年間）。
腫瘍微小環境に存在する骨髄細胞のサブタイプと生存との相関
時間枠：研究終了まで（約5年間）。
全生存期間と無病生存期間の多変量 Cox モデル。生存に関連する実際の遺伝子を選択し、ハザード比を推定するために、「最小絶対収縮および選択演算子」(LASSO) 法を共同で使用する各モデルにすべての遺伝子が含まれています ( HR) および対応する 95% CI。
研究終了まで（約5年間）。

協力者と研究者

ここでは、この調査に関係する人々や組織を見つけることができます。

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University of Milano Bicocca

出版物と役立つリンク

研究に関する情報を入力する責任者は、自発的にこれらの出版物を提供します。これらは、研究に関連するあらゆるものに関するものである可能性があります。

一般刊行物

研究記録日

これらの日付は、ClinicalTrials.gov への研究記録と要約結果の提出の進捗状況を追跡します。研究記録と報告された結果は、国立医学図書館 (NLM) によって審査され、公開 Web サイトに掲載される前に、特定の品質管理基準を満たしていることが確認されます。

主要日程の研究

研究開始 (実際)

2021年2月9日

一次修了 (推定)

2026年2月9日

研究の完了 (推定)

2026年2月9日

試験登録日

最初に提出

2021年2月17日

QC基準を満たした最初の提出物

2021年3月4日

最初の投稿 (実際)

2021年3月9日

学習記録の更新

投稿された最後の更新 (推定)

2024年1月1日

QC基準を満たした最後の更新が送信されました

2023年12月29日

最終確認日

2023年12月1日

詳しくは

本研究に関する用語

キーワード

追加の関連 MeSH 用語

その他の研究ID番号

  • TUM-DC

個々の参加者データ (IPD) の計画

個々の参加者データ (IPD) を共有する予定はありますか?

いいえ

医薬品およびデバイス情報、研究文書

米国FDA規制医薬品の研究

いいえ

米国FDA規制機器製品の研究

いいえ

この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。

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