通过模仿老年人的禁食饮食来对抗免疫衰老和提高免疫力。

将进行 I/II 期随机临床研究，以评估间隔 30 天进行的两个周期的 FMD（1 周）的可行性、安全性和有效性（疫苗接种反应的改善，以及功能状态的改善或维持）体弱前的老年人接种流感疫苗。 该研究将招募 40 名 65-80 岁的体弱前受试者。 如果受试者有已知的免疫抑制疾病或药物治疗或在过去两年内未接受流感疫苗接种，则受试者将被排除在外。 受试者将按 1:1 的比例随机分配至 A 组 (FMD) 或 B 组（常规饮食）。 A 组的受试者将每月接受一次为期 5 天的 FMD 饮食，持续 2 个月（40 天内完成 2 个周期：5-30-5）。

这是基于我们正在进行的针对年轻受试者的研究中采用的方案，但减少了一个周期以最大限度地减少体重减轻和老年受试者的其他潜在副作用。 主要终点将是饮食安全：饮食的副作用将通过体重变化、头痛、血压以及通过生物阻抗测量、握力和 DEXA 扫描密切监测身体成分（即瘦体重）来评估。 次要终点将包括：i) 对 FMD 的依从性； ii) 改善 65-80 岁患者的虚弱参数和预防残疾； iii) 2 个饮食周期后免疫参数的改善，将基于改善的 T 细胞反应、减少的炎症、改善的淋巴细胞/骨髓比率和 HSC/pre-HSC 数量、改善的 B 细胞数量和 CSR 的测量； iv) 通过较高抗体滴度水平测定的流感疫苗的功效。 此外，我们还将记录试验过程中的流感发作次数。 该试验将进行 3 年，所有受试者将在每年秋季在圣马蒂诺医院接种当前制备的灭活病毒流感疫苗（Fluzone® 高剂量，赛诺菲巴斯德公司）。 . 在流感季节期间，每个参与者每周都会收到提醒，要求他们打电话报告任何类似流感的症状。 这些将包括呼吸道症状（咳嗽、喉咙痛、呼吸急促和鼻塞）和全身症状（头痛、不适、疲劳、发烧或发烧和肌肉酸痛）。 当已知流感在当地社区传播时，将根据两种呼吸道症状或一种呼吸道和一种全身症状的报告记录流感样疾病。 流感疾病的实验室诊断将根据病毒培养的鼻咽拭子结果和/或疾病前后抗体滴度升高 4 倍或更高来确认。 将在基线、疫苗接种前 2 个饮食周期后和疫苗接种后 4 周收集血样。 该试验的研究期为 2-5 天的饮食周期 (5-30-5)，随后每年接种一次流感疫苗。 每个饮食周期将包括 5 天的口蹄疫，然后是 30 天的受试者常规饮食加上植物性每日蛋白质和脂肪补充剂（20 克蛋白质 + 30 克橄榄油和 30 克（总计）核桃，榛子和杏仁）。 这种每日补充剂可最大程度地减少 5 天口蹄疫引起的体重减轻。 在第一次就诊时，受试者将接受身体评估以评估健康和虚弱状况，并记录病史。 将收集血样用于基线测量。

FMD 组中的受试者将获得 2 个周期的饮食供应和说明。 在接受第二个 FMD 周期之前，患者将在热那亚大学的老年病科诊所接受第二次体检，其中包括评估身体成分，只有在没有减少的情况下才允许进行第二个 FMD 周期瘦体重（对比 基线）由 BIA、手柄强度和 DEXA 检测。 第二个饮食周期完成两周后，受试者将返回进行身体评估、血液采集和疫苗接种。 第三次也是最后一次访问将在疫苗接种后 4 周内进行，受试者将接受身体评估和身体成分评估，并采集血液样本。 在这次访问中，还将指示受试者致电研究协调员报告不适、不适、流感或呼吸道症状。 将通过电话进一步跟进以监测流感的发作。 如果可能，将在受试者报告流感症状后 72 小时内收集用于病毒培养和流感确认的鼻咽拭子。 饮食：在三个周期中的每一个周期中，将向随机分配到限制饮食组 (A) 的受试者提供所有食物。 饮食的确切成分将取决于在任务中获得的结果

1 但饮食预计将限制大约 30% 的卡路里和 50% 的蛋白质，但补充了 RDA 的 50% 的维生素和矿物质，还补充了在动物研究中确定有效的非必需和必需氨基酸。 氨基酸补充水平将取决于已发表的证明安全性的临床研究，并且不会超过建议的每日水平。 对照组中的受试者将按照主治医师的标准做法接受饮食建议。 这将包括咨询注册营养师。 主要重点将放在确保受试者不会减轻体重（除非基线肥胖）或失去瘦体重。 他们还将被要求保留消耗的食物和大概数量的日记。

疫苗接种：受试者每年将接种来自 Sanofi Pasteur Inc. 的标准剂量的 Fluzone® 高剂量疫苗。 这种疫苗的抗原是普通流感疫苗中正常抗原的四倍，专为 60 岁及以上的人设计。

从研究中移除的标准：

如果受试者未接受疫苗接种，则受试者将从研究中移除 如果受试者具有与饮食相关的不可接受的毒性，则受试者将从研究中移除。

如果受试者在第一个周期后不能恢复至少 95% 的体重，在第二个周期后不能恢复至少 92% 的体重，则受试者将从研究中移除。 如果生物阻抗相角下降超过基线值的 5%，或者当相角下降到 5° 以下时，受试者将从研究中移除；或者，对于那些生物阻抗测量值不可靠/无法获得的患者，存在握力下降或 DEXA 检测到的瘦体重 > 5% 的基线值。 受试者可以出于任何原因随时自愿退出研究。 研究观察 第 1 次访问：在圣马蒂诺医院的第一次访问中将记录完整的病史（Prof.

P. Odetti，医学博士，A. Nencioni 教授）。 这将包括慢性病和任何可能增加流感风险的疾病的文件，包括充血性心力衰竭、缺血性心脏病、慢性肺病、糖尿病、肾衰竭、肿瘤性疾病和免疫功能障碍体重和体能状态。 所有的药物都会被记录下来。 将进行身体检查，确定身体质量指数 (BMI) 和身体成分，并且必须在包含参数范围内。 无论是否存在 Fried 修正的虚弱标准中的一项或两项，参与者都将被诊断为虚弱前期。 将进行抽血。 基线实验室测量将包括 CBC、葡萄糖、酮体、胰岛素、IGF-I、IGFBP-1、细胞因子组、淋巴/骨髓比率、CD4+/CD8+ 比率、幼稚/记忆 T 细胞比率和 CD8+CD28+ T 细胞。 为评估体液免疫，将评估 CD19+ B 细胞、幼稚、IgM 记忆和开关记忆 B 细胞的百分比和绝对数量。 简而言之，将从全血中分离的 PBMC 使用抗 CD19 微珠（Miltenyi Biotech）富集 CD19+ B 细胞。 为分离原始细胞、记忆细胞和开关记忆细胞，CD19 细胞将在用 PE 偶联的抗 CD27、生物素-SP 偶联的 ChromPure 人 IgG 和 20 μl 生物素-SP 偶联的 ChromPure 人 IgA 染色后使用流式细胞仪进行分选。 为了在体外检测 CSR，CD19 B 细胞将与抗 CD40 和 IL-4 一起培养 6-7 天。 受刺激的 B 细胞中的 AID 表达将通过 RT-PCR 测量。 E47 表达将通过蛋白质印迹测量。 访问 2：受试者将在完成一个饮食周期后返回诊所。 参与者将接受新的体检，以评估他们的身体活动、神经心理学并确定虚弱指数。 此外，他们还将通过生物阻抗测量、DEXA 扫描和握力进行身体成分评估。 将进行抽血。

实验室值将包括上述所有测量值，以评估上述所有参数的饮食后变化。 第 3 次访问（第二个 FMD 周期后两周）：与第 2 次访问相同。此外，所有受试者将接受单次流感疫苗注射。 第 4 次访问：受试者将在接种疫苗后 4 周返回，届时抗体滴度预计将达到峰值。 我们将对参与者进行临床检查和身体成分评估。 实验室测量将如上所述。 此外，血清中的抗体滴度将通过血凝抑制测定来测量。 每种病毒株的血凝素将从 CDC 库存中获得。将使用从 1/10 到 1/1024 的 2 倍稀释血清。 慢性年龄相关的肌肉损失影响 >30% 的 60 岁以上的人和 >50% 的 80 岁以上的人。老年人蛋白质摄入不足可能通过阻止肌肉蛋白质合成来促进肌肉质量的损失。 因此，将进行生物阻抗测量和全身 DEXA 扫描，以确保饮食不会导致肌肉质量损失。 跟进：参加研究的受试者将在第四次就诊（见上文）后每三个月被召集一次，以进行身体和心理检查，以评估口蹄疫在预防虚弱、增强免疫系统和增加流感疗效方面的疗效疫苗。 在当地预计的流感季节期间，受试者将每周接到试验协调员的电话，以记录任何症状并提醒他们打电话报告症状。 如果可能，将在症状报告后 72 小时内通过让注册护士前往受试者家中收集 NP 拭子。 参与者及早报告症状的动机将是获得免费诊断和转诊给主治医生以治疗流感疾病。 不合规将被定义为在 FMD 的任何一天消耗 < 50% 的规定饮食和/或消耗 >150 kcal 非处方食物。 将分析与基线相比 IGF-I 减少不到 50% 和葡萄糖减少不到 40% 的受试者的结果（意向治疗），但排除这些患者（怀疑不合规）的二次分析可能是执行。