Zwalczanie immunosenescencji i promowanie odporności poprzez dietę naśladującą post w podeszłym wieku.

Przeprowadzone zostanie randomizowane badanie kliniczne fazy I/II w celu oceny wykonalności, bezpieczeństwa i skuteczności (poprawa odpowiedzi na szczepienie, ale także poprawa lub utrzymanie stanu funkcjonalnego) dwóch cykli pryszczycy (1 tydzień) podawanych w odstępie 30 dni, poprzedzających szczepienia przeciw grypie u osób w podeszłym wieku, które nie są jeszcze w pełni sprawne. Do badania zostanie włączonych 40 osób w wieku 65-80 lat. Pacjenci zostaną wykluczeni, jeśli mają znane zaburzenia immunosupresyjne lub leki lub nie otrzymali szczepionki przeciw grypie w ciągu ostatnich dwóch lat. Pacjenci zostaną losowo przydzieleni w stosunku 1:1 do Grupy A (FMD) lub Grupy B (regularna dieta). Pacjenci w Grupie A będą otrzymywać 5-dniową dietę FMD raz w miesiącu przez 2 miesiące (2 cykle ukończone w ciągu 40 dni: 5-30-5).

Opiera się to na schemacie przyjętym w naszym trwającym badaniu z udziałem młodszych pacjentów, ale obejmuje jeden cykl mniej, aby zminimalizować utratę masy ciała i inne potencjalne skutki uboczne u osób w podeszłym wieku. Pierwszorzędowym punktem końcowym będzie bezpieczeństwo diety: skutki uboczne diety zostaną ocenione na podstawie zmiany masy ciała, bólów głowy, ciśnienia krwi oraz ścisłego monitorowania składu ciała, tj. beztłuszczowej masy ciała, pomiarów bioimpedancji, siły uścisku dłoni i skanów DEXA. Drugorzędowe punkty końcowe będą obejmować: i) zgodność z dyrektywą pryszczycy; ii) poprawa parametrów osłabienia i profilaktyka niesprawności u pacjentów w wieku 65-80 lat; iii) poprawa parametrów immunologicznych po 2 cyklach diety i będzie oparta na pomiarach ulepszonej odpowiedzi komórek T, zmniejszonego stanu zapalnego, ulepszonych stosunków limfoidalnych/szpikowych i liczby HSC/pre-HSC, ulepszonej liczby limfocytów B i CSR; iv) skuteczność szczepionki przeciw grypie oceniana przez wyższe poziomy miana przeciwciał. Ponadto będziemy również dokumentować liczbę epizodów grypy w trakcie badania. Badanie będzie prowadzone przez okres 3 lat, a wszyscy uczestnicy zostaną zaszczepieni jesienią każdego roku aktualnym preparatem inaktywowanej szczepionki przeciw grypie (Fluzone® w wysokiej dawce, Sanofi Pasteur Inc.) w szpitalu San Martino . W sezonie grypowym każdy uczestnik otrzyma cotygodniowe przypomnienia, aby dzwonić i zgłaszać wszelkie objawy grypopodobne. Należą do nich objawy ze strony układu oddechowego (kaszel, ból gardła, duszność i zatkany nos) oraz objawy ogólnoustrojowe (ból głowy, złe samopoczucie, zmęczenie, gorączka lub gorączka i bóle mięśni). Choroby grypopodobne będą dokumentowane na podstawie zgłoszenia dwóch objawów ze strony układu oddechowego lub jednego ze strony układu oddechowego i jednego objawu ogólnoustrojowego, jeśli wiadomo, że grypa krąży w lokalnej społeczności. Laboratoryjne rozpoznanie grypy zostanie potwierdzone na podstawie wyników wymazów z jamy nosowo-gardłowej w celu posiewu wirusa i/lub 4-krotnego lub większego wzrostu miana przeciwciał przed lub po chorobie. Próbki krwi będą pobierane na początku badania, po 2 cyklach diety przed szczepieniem i 4 tygodnie po szczepieniu. Okres badania w tej próbie będzie obejmował 2-5 dniowe cykle diety (5-30-5), po których nastąpi jedno szczepienie przeciw grypie rocznie. Każdy cykl diety będzie się składał z 5 dni pryszczycy, po których nastąpi 30 dni zwykłej diety badanych plus codzienny dodatek białka i tłuszczu pochodzenia roślinnego (20 gramów białka + 30 gramów oliwy z oliwek i 30 gramów (łącznie) orzechów włoskich, orzechy laskowe i migdały). Ta codzienna suplementacja służy zminimalizowaniu utraty wagi spowodowanej 5-dniową pryszczycą. Podczas pierwszej wizyty pacjenci zostaną poddani ocenie fizycznej w celu oceny stanu zdrowia i osłabienia, a także zostanie odnotowana historia medyczna. Próbki krwi zostaną pobrane do podstawowych pomiarów.

Osoby z grupy FMD otrzymają 2-cyklową porcję diety wraz z instrukcją. Przed otrzymaniem drugiego cyklu FMD pacjenci zostaną poddani drugiemu badaniu przedmiotowemu w Klinice Geriatrii Uniwersytetu w Genui, które będzie obejmowało ocenę składu ciała, a podanie drugiego cyklu FMD będzie dozwolone tylko w przypadku braku spadku beztłuszczowa masa ciała (por. linia bazowa) wykryta przez BIA, siłę chwytu i DEXA. Dwa tygodnie po zakończeniu drugiego cyklu diety pacjenci wrócą na ocenę fizykalną, pobranie krwi i szczepienie. Trzecia i ostatnia wizyta odbędzie się 4 tygodnie po szczepieniu, osoby zostaną poddane ocenie fizykalnej i ocenie składu ciała oraz zostaną pobrane próbki krwi. Podczas tej wizyty osoby badane zostaną również poinstruowane, aby zadzwonić do koordynatora badań w celu zgłoszenia złego samopoczucia, dyskomfortu, grypy lub objawów ze strony układu oddechowego. Dalsza obserwacja będzie prowadzona przez telefon, aby monitorować początek grypy. Wymazy z jamy nosowo-gardłowej do hodowli wirusa i potwierdzenia grypy zostaną pobrane, jeśli to możliwe, w ciągu 72 godzin od zgłoszenia przez pacjenta objawów grypy. DIETA: Osobnicy przydzieleni losowo do ramienia z ograniczoną dietą (A) otrzymają całe pożywienie do spożycia podczas każdego z trzech cykli. Dokładne składniki diety będą uzależnione od wyników uzyskanych w zadaniu

1, ale przewiduje się, że dieta będzie miała w przybliżeniu 30% ograniczenia kalorii i 50% białka, ale uzupełniona o 50% RDA w witaminach i minerałach, a także uzupełniona zarówno nieistotnymi, jak i niezbędnymi aminokwasami, które zostały uznane za skuteczne w badaniach na zwierzętach. Poziomy suplementacji aminokwasów będą zależeć od opublikowanych badań klinicznych wykazujących bezpieczeństwo i nie przekroczą zalecanych dziennych poziomów. Pacjenci w grupie kontrolnej otrzymają poradę dietetyczną zgodnie ze standardową praktyką lekarza prowadzącego. Obejmuje to konsultację z zarejestrowanym dietetykiem. Główny nacisk zostanie położony na zapewnienie, aby badani nie stracili na wadze (chyba że byli otyli na początku badania) ani nie stracili beztłuszczowej masy ciała. Zostaną również poproszeni o prowadzenie dziennika spożywanych pokarmów i przybliżonych ilości.

SZCZEPIENIE: Osobnicy zostaną zaszczepieni standardową dawką szczepionki wysokiej dawki Fluzone® firmy Sanofi Pasteur Inc. na każdy rok. Ta szczepionka ma cztery razy więcej normalnego antygenu zawartego w zwykłej szczepionce przeciw grypie i jest specjalnie zaprojektowana dla osób w wieku 60 lat i starszych.

Kryteria usunięcia ze studiów:

Uczestnicy zostaną usunięci z badania, jeśli nie otrzymają szczepienia. Uczestnicy zostaną usunięci z badania, jeśli wystąpi u nich niedopuszczalna toksyczność związana z dietą.

Pacjenci zostaną usunięci z badania, jeśli nie będą w stanie odzyskać co najmniej 95% swojej masy ciała po pierwszym i 92% po drugim cyklu. Uczestnicy zostaną usunięci z badania w przypadku spadku kąta fazowego bioimpedancji przekraczającego 5% wartości wyjściowej lub kiedykolwiek kąt fazowy spadnie poniżej 5°; lub alternatywnie u tych pacjentów, u których pomiary bioimpedancji były niewiarygodne/nieosiągalne, w obecności spadku siły uścisku dłoni lub beztłuszczowej masy ciała wykrytej przez DEXA >5% wartości wyjściowej. Uczestnicy mogą dobrowolnie wycofać się z badania w dowolnym momencie, z dowolnego powodu. OBSERWACJE Z BADANIA Wizyta 1: Pełna historia medyczna zostanie udokumentowana podczas pierwszej wizyty w szpitalu San Martino (prof.

P. Odetti, MD, prof. A. Nencioni). Obejmuje to dokumentację chorób przewlekłych i wszelkich chorób, które mogą zwiększać ryzyko zachorowania na grypę, w tym zastoinową niewydolność serca, chorobę niedokrwienną serca, przewlekłą chorobę płuc, cukrzycę, niewydolność nerek, choroby nowotworowe i dysfunkcję układu odpornościowego, wagę i stan sprawności. Wszystkie leki będą rejestrowane. Zostanie przeprowadzone badanie fizyczne i zostanie określony wskaźnik masy ciała (BMI) oraz skład ciała, które muszą mieścić się w parametrach włączenia. Stan przedsłabości zostanie zdiagnozowany u uczestnika, niezależnie od tego, czy będzie obecne jedno lub dwa zmodyfikowane przez Frieda kryteria słabości. Zostanie przeprowadzone pobranie krwi. Wyjściowe pomiary laboratoryjne będą obejmować CBC, glukozę, ciała ketonowe, insulinę, IGF-I, IGFBP-1, panel cytokin, stosunek komórek limfoidalnych do mieloidalnych, stosunek CD4+/CD8+, stosunek limfocytów T naiwnych/mających pamięć i limfocyty T CD8+CD28+. Aby ocenić odporność humoralną, zostaną ocenione wartości procentowe i liczby bezwzględne limfocytów B CD19+, naiwnych, komórek pamięci IgM i limfocytów B pamięci przełącznej. Pokrótce, PBMC wyizolowane z krwi pełnej zostaną wzbogacone w komórki B CD19+ przy użyciu mikrokulek anty-CD19 (Miltenyi Biotech). Aby wyizolować komórki naiwne, komórki pamięci i komórki pamięci przełącznej, komórki CD19 zostaną posortowane za pomocą cytometru przepływowego po wybarwieniu anty-CD27 skoniugowanym z PE, ludzką IgG ChromPure skoniugowaną z biotyną-SP i 20 μl ludzką IgA ChromPure skoniugowaną z biotyną-SP. W celu wykrycia CSR in vitro, komórki B CD19 będą hodowane z anty-CD40 i IL-4 przez 6-7 dni. Ekspresja AID w stymulowanych komórkach B będzie mierzona metodą RT-PCR. Ekspresja E47 będzie mierzona metodą Western blot. Wizyta 2: Pacjenci wrócą do kliniki po zakończeniu jednego cyklu diety. Uczestnicy zostaną poddani nowym badaniom lekarskim oceniającym ich aktywność fizyczną, neuropsychologicznym oraz określeniu wskaźnika kruchości. Dodatkowo zostaną poddani ocenie składu ciała poprzez pomiar bioimpedancji, skan DEXA oraz siłę chwytu dłoni. Zostanie przeprowadzone pobranie krwi.

Wartości laboratoryjne będą obejmować wszystkie pomiary jak powyżej, aby ocenić zmiany po diecie we wszystkich parametrach opisanych powyżej. Wizyta 3 (dwa tygodnie po drugim cyklu pryszczycy): taka sama jak podczas wizyty 2. Ponadto wszyscy pacjenci otrzymają pojedynczą dawkę szczepionki przeciw grypie. Wizyta 4: Pacjenci wrócą 4 tygodnie po szczepieniu, kiedy oczekuje się, że miana przeciwciał osiągną szczyt. Wykonamy u uczestników badania kliniczne oraz ocenę składu ciała na poprzednich wizytach. Pomiary laboratoryjne będą jak wyżej. Ponadto miana przeciwciał w surowicy będą mierzone za pomocą testu hamowania hemaglutynacji. Hemaglutynina dla każdego szczepu wirusa zostanie uzyskana z zapasów CDC. Stosowane będą 2-krotne rozcieńczenia surowicy od 1/10 do 1/1024. Przewlekła utrata masy mięśniowej związana z wiekiem dotyka >30% osób powyżej 60 roku życia i >50% osób powyżej 80 roku życia. Niewystarczające spożycie białka u osób starszych może sprzyjać utracie masy mięśniowej poprzez zapobieganie syntezie białek mięśniowych. Zostaną więc przeprowadzone pomiary bioimpedancji oraz skany DEXA całego ciała, aby upewnić się, że dieta nie powoduje utraty masy mięśniowej. Kontynuacja: Osoby włączone do badania będą wzywane co trzy miesiące po czwartej wizycie (patrz wyżej) na badania fizykalne i psychologiczne w celu oceny skuteczności pryszczycy w zapobieganiu osłabieniu, wzmacnianiu układu odpornościowego i zwiększaniu skuteczności grypy szczepionka. Podczas przewidywanego sezonu grypowego w okolicy uczestnicy będą otrzymywać cotygodniowe telefony od koordynatora badania w celu udokumentowania wszelkich objawów i przypomnienia o konieczności zgłoszenia objawów. Jeśli to możliwe, wymazy NP zostaną pobrane w ciągu 72 godzin od zgłoszenia objawów poprzez podróż RN do domów pacjentów. Zachętą dla uczestników do wczesnego zgłaszania objawów będzie dostęp do bezpłatnej diagnozy i skierowania do lekarza pierwszego kontaktu w celu leczenia grypy. Niezgodność zostanie zdefiniowana jako spożycie <50% zalecanej diety i/lub spożycie >150 kcal nieprzepisanej żywności w dowolnym dniu pryszczycy. Przeanalizowane zostaną wyniki pacjentów z mniejszym niż 50% zmniejszeniem stężenia IGF-I i 40% zmniejszeniem stężenia glukozy w porównaniu z wartościami wyjściowymi (zgodnie z zamiarem leczenia), ale może być przeprowadzona analiza wtórna wykluczająca tych pacjentów (podejrzewanych o nieprzestrzeganie zaleceń) wykonane.