Lucha contra la inmunosenescencia y promoción de la inmunidad mediante una dieta que imita el ayuno en ancianos.

Se realizará un estudio clínico aleatorizado de fase I/II para evaluar la viabilidad, seguridad y eficacia (mejora de la respuesta a la vacunación, pero también mejora o mantenimiento del estado funcional) de dos ciclos de fiebre aftosa (1 semana) administrados con 30 días de diferencia, antes vacunación antigripal en ancianos prefrágiles. El estudio inscribirá a 40 sujetos prefrágiles de entre 65 y 80 años. Los sujetos serán excluidos si tienen trastornos o medicamentos inmunosupresores conocidos o no han recibido la vacuna contra la influenza en los dos años anteriores. Los sujetos serán aleatorizados 1:1 al Grupo A (FMD) o al Grupo B (dieta normal). Los sujetos del grupo A recibirán la dieta de 5 días para la fiebre aftosa una vez al mes durante 2 meses (2 ciclos completados en 40 días: 5-30-5).

Esto se basa en el régimen adoptado en nuestro estudio en curso con sujetos más jóvenes, pero implica un ciclo menos para minimizar la pérdida de peso y otros posibles efectos secundarios en sujetos de edad avanzada. El criterio principal de valoración será la seguridad de la dieta: los efectos secundarios de la dieta se evaluarán mediante el cambio de peso, los dolores de cabeza, la presión arterial y mediante un control estricto de la composición corporal, es decir, la masa corporal magra, mediante mediciones de bioimpedancia, fuerza de prensión manual y exploraciones DEXA. Los criterios de valoración secundarios incluirán: i) el cumplimiento de la FMD; ii) la mejora de los parámetros de fragilidad y prevención de la discapacidad en pacientes de 65 a 80 años; iii) la mejora en los parámetros inmunológicos después de 2 ciclos de la dieta y se basará en medidas de respuesta mejorada de células T, inflamación reducida, proporciones linfoides/mieloides mejoradas y número de HSC/pre-HSC, números de células B mejorados y CSR; iv) la eficacia de la vacuna contra la influenza evaluada por niveles de títulos de anticuerpos más altos. Además, también documentaremos la cantidad de episodios de gripe durante el transcurso del ensayo. El ensayo se llevará a cabo durante un período de 3 años y todos los sujetos serán vacunados en el otoño de cada año con la preparación actual de la vacuna contra la influenza de virus inactivados (Fluzone® dosis alta, Sanofi Pasteur Inc.) en el Hospital San Martino. . Durante la temporada de gripe, cada participante recibirá recordatorios semanales para llamar e informar cualquier síntoma similar a la gripe. Estos incluirán síntomas respiratorios (tos, dolor de garganta, dificultad para respirar y congestión nasal) y síntomas sistémicos (dolor de cabeza, malestar general, fatiga, fiebre o febrilidad y dolores musculares). Las enfermedades similares a la gripe se documentarán con base en el informe de dos síntomas respiratorios o un síntoma respiratorio y uno sistémico cuando se sepa que la influenza está circulando en la comunidad local. Un diagnóstico de laboratorio de la enfermedad de la influenza se confirmará a partir de los resultados de los hisopados nasofaríngeos para el cultivo del virus y/o un aumento de 4 veces o más en el título de anticuerpos antes o después de la enfermedad. Se recogerán muestras de sangre al inicio del estudio, después de 2 ciclos de dieta antes de la vacunación y 4 semanas después de la vacunación. El período de estudio para este ensayo será ciclos de dieta de 2-5 días (5-30-5) seguidos de una sola vacunación contra la gripe por año. Cada ciclo de dieta constará de 5 días de FMD seguidos de 30 días de la dieta habitual de los sujetos más un suplemento diario de proteínas y grasas de origen vegetal (20 gramos de proteínas + 30 gramos de aceite de oliva y 30 gramos (total) de nueces, avellanas y almendras). Este suplemento diario sirve para minimizar la pérdida de peso causada por la fiebre aftosa de 5 días. En la primera visita, los sujetos se someterán a una evaluación física para evaluar el estado de salud y fragilidad, y se anotará el historial médico. Se recolectarán muestras de sangre para mediciones de referencia.

Los sujetos en el brazo de la fiebre aftosa recibirán un suministro de 2 ciclos de la dieta con instrucciones. Antes de recibir el segundo ciclo de FMD, los pacientes se someterán a un segundo examen físico en la Clínica de geriatría de la Universidad de Génova que incluirá la evaluación de la composición corporal y solo se permitirá la administración del segundo ciclo de FMD en ausencia de una disminución de masa corporal magra (vs. línea de base) según lo detectado por BIA, fuerza de agarre y por DEXA. Dos semanas después de completar el segundo ciclo de dieta, los sujetos regresarán para una evaluación física, extracción de sangre y vacunación. La tercera y última visita será 4 semanas después de la vacunación, los sujetos se someterán a una evaluación física y evaluación de la composición corporal y se recolectarán muestras de sangre. En esta visita, también se indicará a los sujetos que llamen al coordinador de investigación para informar malestar, malestar, influenza o síntomas respiratorios. Se realizará un seguimiento adicional por teléfono para monitorear el inicio de la influenza. Si es posible, se recolectarán hisopos nasofaríngeos para cultivo de virus y confirmación de influenza dentro de las 72 horas posteriores a que un sujeto informe síntomas de influenza. DIETA: Los sujetos asignados al azar al grupo de dieta restringida (A) recibirán todos los alimentos que deben consumir durante cada uno de los tres ciclos. Los componentes exactos de la dieta dependerán de los resultados obtenidos en la Tarea

1 pero se prevé que la dieta tenga aproximadamente un 30 % de restricción calórica y un 50 % de restricción proteica, pero complementada con un 50 % de la RDA en vitaminas y minerales y también complementada con aminoácidos esenciales y no esenciales identificados en estudios con animales como eficaces. Los niveles de suplementos de aminoácidos dependerán de los estudios clínicos publicados que demuestren la seguridad y no excederán los niveles diarios recomendados. Los sujetos del grupo de control recibirán asesoramiento dietético según la práctica habitual del médico tratante. Esto incluirá la consulta con un dietista registrado. Se pondrá un enfoque principal en asegurar que los sujetos no pierdan peso (a menos que sean obesos al inicio del estudio) ni pierdan masa corporal magra. También se les pedirá que lleven un diario de los alimentos consumidos y cantidades aproximadas.

VACUNACIÓN: Los sujetos serán vacunados con la dosis estándar de la vacuna de dosis alta Fluzone® de Sanofi Pasteur Inc. para cada año. Esta vacuna tiene cuatro veces el antígeno normal contenido en la vacuna regular contra la gripe y está especialmente diseñada para personas de 60 años o más.

Criterios para la eliminación del estudio:

Los sujetos serán retirados del estudio si no reciben la vacuna. Los sujetos serán retirados del estudio si tienen una toxicidad inaceptable relacionada con la dieta.

Los sujetos serán retirados del estudio si no pueden recuperar al menos el 95 % de su peso corporal después del primer ciclo y el 92 % después del segundo ciclo. Los sujetos serán retirados del estudio en presencia de una disminución en el ángulo de fase de bioimpedancia superior al 5% del valor de referencia o cuando el ángulo de fase caiga por debajo de 5°; o, alternativamente, en aquellos pacientes en los que las medidas de bioimpedancia no fueran fiables/inalcanzables, en presencia de una disminución de la fuerza de prensión manual o de la masa corporal magra detectada por DEXA >5% del valor basal. Los sujetos pueden retirarse voluntariamente del estudio en cualquier momento y por cualquier motivo. OBSERVACIONES DEL ESTUDIO Visita 1: Se documentará una historia clínica completa en la primera visita al Hospital San Martino (Prof.

Dr. P. Odetti, Prof. A. Necioni). Esto incluirá la documentación de enfermedades crónicas y cualquier enfermedad que pueda aumentar el riesgo de influenza, incluida la insuficiencia cardíaca congestiva, la cardiopatía isquémica, la enfermedad pulmonar crónica, la diabetes, la insuficiencia renal, los trastornos neoplásicos y la disfunción inmunitaria, el peso y el estado funcional. Todos los medicamentos serán registrados. Se realizará un examen físico y se determinará el índice de masa corporal (IMC) y la composición corporal, que deben estar dentro de los parámetros de inclusión. La fragilidad previa se diagnosticará en el participante ya sea que estén presentes uno o dos de los criterios de fragilidad modificados por Fried. Se realizará una extracción de sangre. Las mediciones de laboratorio de referencia incluirán un CBC, glucosa, cuerpos cetónicos, insulina, IGF-I, IGFBP-1, panel de citocinas, relación linfoide/mieloide, relación CD4+/CD8+, relación de células T ingenuas/de memoria y células T CD8+CD28+. Para evaluar la inmunidad humoral, se evaluarán los porcentajes y números absolutos de células B CD19+, células B naïve, memoria IgM y memoria switch. Brevemente, las PBMC aisladas de sangre total se enriquecerán con células B CD19+ utilizando microesferas anti-CD19 (Miltenyi Biotech). Para aislar las células ingenuas, de memoria y de memoria conmutada, las células CD19 se clasificarán con un citómetro de flujo después de teñirlas con anti-CD27 conjugado con PE, IgG humana ChromPure conjugada con biotina-SP y 20 μl de IgA humana ChromPure conjugada con biotina-SP. Para detectar CSR in vitro, se cultivarán células B CD19 con anti CD40 e IL-4 durante 6-7 días. La expresión de AID en las células B estimuladas se medirá mediante RT-PCR. La expresión de E47 se medirá por western blot. Visita 2: Los sujetos regresarán a la clínica al completar un ciclo de la dieta. Los participantes serán sometidos a un nuevo reconocimiento médico para evaluar su actividad física, neuropsicológica y determinar el índice de fragilidad. Además, también se someterán a una evaluación de la composición corporal mediante medición de bioimpedancia, escáner DEXA y fuerza de agarre. Se realizará una extracción de sangre.

Los valores de laboratorio incluirán todas las mediciones anteriores para evaluar los cambios posteriores a la dieta en todos los parámetros descritos anteriormente. Visita 3 (dos semanas después del segundo ciclo de fiebre aftosa): igual que en la visita 2. Además, todos los sujetos recibirán una única inyección de vacunación antigripal. Visita 4: los sujetos regresarán 4 semanas después de la vacunación, cuando se espera que los títulos de anticuerpos alcancen su punto máximo. Realizaremos a los participantes los exámenes clínicos y las valoraciones de composición corporal realizadas en visitas anteriores. Las mediciones de laboratorio serán como se indica arriba. Además, los títulos de anticuerpos en suero se medirán mediante el ensayo de inhibición de la hemaglutinación. La hemaglutinina para cada cepa de virus se obtendrá de la reserva de los CDC. Se utilizarán diluciones de 2 veces de suero de 1/10 a 1/1024. La pérdida muscular crónica relacionada con la edad afecta >30% de las personas mayores de 60 años y >50% de las personas mayores de 80 años. La ingesta insuficiente de proteínas en los ancianos puede promover la pérdida de masa muscular al impedir la síntesis de proteínas musculares. Por lo tanto, se realizarán mediciones de bioimpedancia y escaneos DEXA de todo el cuerpo para garantizar que la dieta no provoque pérdida de masa muscular. Seguimiento: Los sujetos inscritos en el estudio serán llamados cada tres meses después de la cuarta visita (ver arriba) para someterse a exámenes físicos y psicológicos con el fin de evaluar la eficacia de la fiebre aftosa en la prevención de la fragilidad, el refuerzo del sistema inmunológico y el aumento de la eficacia de la gripe. vacuna. Durante la temporada de influenza prevista en el área local, los sujetos recibirán llamadas telefónicas semanales del coordinador del ensayo para documentar cualquier síntoma y recordarles que llamen para informar los síntomas. Si es posible, se recolectarán hisopos NP dentro de las 72 horas posteriores a la notificación de los síntomas haciendo que el RN viaje a los hogares de los sujetos. El incentivo para que los participantes informen los síntomas de manera temprana será el acceso a un diagnóstico gratuito y la remisión al médico de atención primaria para el tratamiento de la influenza. Se considerará incumplimiento el consumo de <50% de la dieta prescrita y/o el consumo de >150 kcal de alimentos no prescritos en cualquiera de los días de la fiebre aftosa. Se analizarán los resultados de los sujetos con una reducción de menos del 50 % en IGF-I y una reducción del 40 % en la glucosa en comparación con el valor inicial (intención de tratar), pero se puede realizar un análisis secundario que excluya a estos pacientes (con sospecha de incumplimiento). realizado.