Boj proti imunosenescenci a podpora imunity pomocí stravy napodobující půst pro starší osoby.

Bude provedena randomizovaná klinická studie fáze I/II za účelem posouzení proveditelnosti, bezpečnosti a účinnosti (zlepšení odpovědi na vakcinaci, ale také zlepšení nebo udržení funkčního stavu) dvou cyklů slintavky a kulhavky (1 týden) podávaných s odstupem 30 dnů, předcházejících očkování proti chřipce u starších osob před oslabením. Do studie bude zapsáno 40 předkřehkých subjektů ve věku 65–80 let. Subjekty budou vyloučeny, pokud mají známé imunosupresivní poruchy nebo léky nebo nebyly v předchozích dvou letech očkovány proti chřipce. Subjekty budou randomizovány 1:1 do ramene A (FMD) nebo ramene B (běžná strava). Subjekty v rameni A budou dostávat 5denní dietu FMD jednou měsíčně po dobu 2 měsíců (2 cykly dokončené za 40 dní: 5-30-5).

To je založeno na režimu přijatém v naší probíhající studii s mladšími subjekty, ale zahrnuje o jeden cyklus méně, aby se minimalizoval úbytek hmotnosti a další potenciální vedlejší účinky u starších subjektů. Primárním koncovým bodem bude bezpečnost diety: vedlejší účinky diety budou posouzeny změnou hmotnosti, bolestmi hlavy, krevním tlakem a pečlivým sledováním tělesného složení, tj. beztukové tělesné hmoty, měřením bioimpedance, silou úchopu a skeny DEXA. Sekundární koncové body budou zahrnovat: i) soulad se směrnicí o FMD; ii) zlepšení parametrů křehkosti a prevence invalidity u pacientů ve věku 65-80 let; iii) zlepšení imunitních parametrů po 2 cyklech diety a bude založeno na měření zlepšené odpovědi T buněk, snížení zánětu, zlepšených poměrů lymfoidní/myeloidní a počtu HSC/pre-HSC, zlepšeného počtu B buněk a CSR; iv) účinnost vakcíny proti chřipce testovaná vyššími hladinami titru protilátek. Kromě toho budeme také dokumentovat počet chřipkových epizod v průběhu soudu. Zkouška bude probíhat po dobu 3 let a všechny subjekty budou na podzim každého roku očkovány současnou přípravou vakcíny proti chřipce s inaktivovaným virem (Fluzone® vysoká dávka, Sanofi Pasteur Inc.) v nemocnici San Martino . Během chřipkové sezóny bude každý účastník dostávat týdenní připomenutí, aby zavolal a nahlásil jakékoli příznaky podobné chřipce. Ty budou zahrnovat respirační příznaky (kašel, bolest v krku, dušnost a ucpaný nos) a systémové příznaky (bolesti hlavy, malátnost, únava, horečka nebo horečka a bolesti svalů). Choroby podobné chřipce budou dokumentovány na základě hlášení dvou respiračních symptomů nebo jednoho respiračního a jednoho systémového symptomu, pokud je známo, že chřipka cirkuluje v místní komunitě. Laboratorní diagnóza chřipkového onemocnění bude potvrzena z výsledků výtěrů z nosohltanu na kultivaci viru a/nebo čtyřnásobného nebo většího zvýšení titru protilátek před onemocněním a po něm. Vzorky krve budou odebírány na začátku, po 2 dietních cyklech před vakcinací a 4 týdny po vakcinaci. Období studie pro tuto studii bude 2-5 denní dietní cykly (5-30-5), po kterých bude následovat jedno očkování proti chřipce za rok. Každý dietní cyklus se bude skládat z 5 dnů slintavky a kulhavky následovaných 30 dny obvyklé stravy subjektů plus rostlinný denní doplněk bílkovin a tuků (20 gramů bílkovin + 30 gramů olivového oleje a 30 gramů (celkem) vlašských ořechů, lískové ořechy a mandle). Tento denní doplněk slouží k minimalizaci úbytku hmotnosti způsobeného 5denní slintavkou a kulhavkou. Při první návštěvě budou subjekty podrobeny fyzickému vyšetření za účelem posouzení zdravotního stavu a křehkého stavu a bude zaznamenána anamnéza. Pro základní měření budou odebrány vzorky krve.

Subjektům v rameni slintavky a kulhavky bude poskytnuta dvoucyklová dávka stravy s instrukcemi. Před přijetím druhého cyklu slintavky a kulhavky se pacienti podrobí druhému fyzikálnímu vyšetření na geriatrické klinice Univerzity v Janově, které bude zahrnovat posouzení tělesného složení a podání druhého cyklu slintavky a kulhavky bude povoleno pouze v případě, že nedojde ke snížení štíhlá tělesná hmota (vs. základní čára), jak bylo zjištěno pomocí BIA, síly úchopu a pomocí DEXA. Dva týdny po dokončení druhého dietního cyklu se subjekty vrátí na fyzické vyšetření, odběr krve a očkování. Třetí a poslední návštěva bude 4 týdny po očkování, subjekty podstoupí fyzické vyšetření a posouzení tělesného složení a budou odebrány vzorky krve. Při této návštěvě budou subjekty také instruovány, aby zavolaly koordinátorovi výzkumu a nahlásily malátnost, nepohodlí, chřipku nebo respirační příznaky. Další sledování bude probíhat po telefonu, aby bylo možné sledovat nástup chřipky. Výtěry z nosohltanu pro kultivaci viru a potvrzení chřipky se odeberou pokud možno do 72 hodin poté, co subjekt nahlásí příznaky chřipky. STRAVA: Subjektům randomizovaným do větve s omezenou dietou (A) bude poskytnuto veškeré jídlo ke konzumaci během každého ze tří cyklů. Přesné složky stravy budou záviset na výsledcích získaných v Task

1, ale předpokládá se, že dieta bude obsahovat přibližně 30 % kalorií a 50 % proteinů, ale bude doplněna 50 % doporučené denní dávky ve vitaminech a minerálech a také doplněna neesenciálními i esenciálními aminokyselinami, které byly ve studiích na zvířatech zjištěny jako účinné. Hladiny suplementace aminokyselin budou záviset na publikovaných klinických studiích prokazujících bezpečnost a nepřekročí doporučené denní hladiny. Subjekty v kontrolní větvi obdrží dietní doporučení podle standardní praxe ošetřujícího lékaře. To bude zahrnovat konzultaci s registrovaným dietologem. Hlavní důraz bude kladen na zajištění toho, aby subjekty nezhubly (pokud nejsou obézní na začátku) ani neztratily svalovou hmotu. Budou také požádáni, aby si vedli deník spotřebovaného jídla a přibližného množství.

OČKOVÁNÍ: Subjekty budou každý rok očkovány standardní dávkou vakcíny Fluzone® s vysokou dávkou od Sanofi Pasteur Inc. Tato vakcína má čtyřnásobek normálního antigenu obsaženého v běžné vakcíně proti chřipce a je speciálně navržena pro osoby starší 60 let.

Kritéria pro vyřazení ze studie:

Subjekty budou vyřazeny ze studie, pokud nedostanou očkování. Subjekty budou vyřazeny ze studie, pokud mají nepřijatelnou toxicitu související s dietou.

Subjekty budou vyřazeny ze studie, pokud nejsou schopny znovu získat alespoň 95 % své tělesné hmotnosti po prvním cyklu a 92 % po druhém cyklu. Subjekty budou vyřazeny ze studie v případě poklesu bioimpedančního fázového úhlu přesahujícího 5 % základní hodnoty nebo kdykoli fázový úhel klesne pod 5°; nebo alternativně u těch pacientů, u kterých byla měření bioimpedance nespolehlivá/nedosažitelná, v přítomnosti poklesu síly úchopu nebo netukové tělesné hmoty detekované pomocí DEXA >5 % výchozí hodnoty. Subjekty mohou ze studie kdykoli a z jakéhokoli důvodu dobrovolně odstoupit. POZOROVÁNÍ STUDIE Návštěva 1: Kompletní lékařská anamnéza bude zdokumentována při první návštěvě v nemocnici San Martino (Prof.

P. Odetti, MD, prof. A. Nencioni). To bude zahrnovat dokumentaci chronických onemocnění a všech onemocnění, která by mohla zvýšit riziko chřipky, včetně městnavého srdečního selhání, ischemické choroby srdeční, chronického onemocnění plic, cukrovky, selhání ledvin, neoplastických poruch a imunitní dysfunkce, hmotnost a výkonnost. Všechny léky budou zaznamenány. Provede se fyzikální vyšetření a určí se index tělesné hmotnosti (BMI) a složení těla, které musí být v rámci parametrů zařazení. Pre-křehkost bude u účastníka diagnostikována, zda bude přítomno jedno nebo dvě Friedova modifikovaná kritéria pro křehkost. Bude proveden odběr krve. Základní laboratorní měření budou zahrnovat CBC, glukózu, ketolátky, inzulín, IGF-I, IGFBP-1, panel cytokinů, poměr lymfoidní/myeloidní, poměr CD4+/CD8+, poměr naivních/paměťových T buněk a CD8+CD28+ T buněk. Pro posouzení humorální imunity budou hodnoceny procenta a absolutní počty CD19+ B buněk, naivních, IgM paměťových a switch paměťových B buněk. Stručně řečeno, PBMC izolované z plné krve budou obohaceny o CD19+ B buňky pomocí anti-CD19 Microbeads (Miltenyi Biotech). K izolaci naivních, paměťových a přepínacích paměťových buněk budou buňky CD19 tříděny pomocí průtokového cytometru po obarvení PE-konjugovaným anti-CD27, biotinem-SP-konjugovaným ChromPure humánním IgG a 20 μl biotinem-SP konjugovaným ChromPure humánním IgA. Pro detekci CSR in vitro se CD19 B buňky kultivují s anti CD40 a IL-4 po dobu 6-7 dnů. Exprese AID ve stimulovaných B buňkách bude měřena pomocí RT-PCR. Exprese E47 bude měřena pomocí Western blotu. Návštěva 2: Subjekty se vrátí na kliniku po dokončení jednoho cyklu diety. Účastníci budou podrobeni novému lékařskému vyšetření, které zhodnotí jejich fyzickou aktivitu, neuropsychologické a určí index křehkosti. Kromě toho podstoupí také posouzení tělesného složení měřením bioimpedance, skenováním DEXA a silou úchopu. Bude proveden odběr krve.

Laboratorní hodnoty budou zahrnovat všechna výše uvedená měření pro posouzení změn po dietě ve všech výše popsaných parametrech. Návštěva 3 (dva týdny po druhém cyklu slintavky a kulhavky): stejné jako při návštěvě 2. Kromě toho všichni jedinci dostanou jednu injekci očkování proti chřipce. Návštěva 4: Subjekty se vrátí 4 týdny po vakcinaci, kdy se očekává maximální titr protilátek. U účastníků provedeme klinická vyšetření a posouzení tělesného složení provedené při předchozích návštěvách. Laboratorní měření budou jako výše. Navíc titry protilátek v séru budou měřeny testem inhibice hemaglutinace. Hemaglutinin pro každý virový kmen bude získán ze zásobního CDC. Budou použita dvojnásobná ředění séra od 1/10 do 1/1024. Chronická ztráta svalové hmoty související s věkem postihuje > 30 % jedinců starších 60 let a > 50 % jedinců starších 80 let. Nedostatečný příjem bílkovin u starších osob může podporovat ztrátu svalové hmoty tím, že brání syntéze svalových bílkovin. Proto budou provedena bioimpedanční měření a celotělové DEXA skeny, aby bylo zajištěno, že dieta nezpůsobí ztrátu svalové hmoty. Sledování: Subjekty zařazené do studie budou každé tři měsíce po čtvrté návštěvě (viz výše) vyzvány, aby podstoupily fyzické a psychologické vyšetření za účelem vyhodnocení účinnosti slintavky a kulhavky v prevenci křehkosti, posílení imunitního systému a zvýšení účinnosti chřipky vakcína. Během předpokládané chřipkové sezóny v místní oblasti budou subjekty dostávat týdenní telefonáty od koordinátora pokusu, aby zdokumentovali jakékoli příznaky a připomněli jim, aby zavolali a nahlásili příznaky. Pokud je to možné, NP výtěry budou odebrány do 72 hodin od nahlášení příznaků tím, že RN doputuje do domovů subjektů. Motivací pro účastníky k včasnému hlášení příznaků bude přístup k bezplatné diagnóze a doporučení primárnímu lékaři k léčbě chřipkového onemocnění. Nesoulad bude definován jako konzumace < 50 % předepsané diety a/nebo konzumace nepředepsané potravy > 150 kcal v kterýkoli den slintavky a kulhavky. Budou analyzovány výsledky pro subjekty s méně než 50% snížením IGF-I a 40% snížením glukózy ve srovnání s výchozí hodnotou (za účelem léčby), ale může být provedena sekundární analýza vylučující tyto pacienty (podezřelé z nevyhovujících podmínek). provedeno.