Combattere l'immunosenescenza e promuovere l'immunità con una dieta che imita il digiuno Anziani.

Verrà condotto uno studio clinico randomizzato di fase I/II per valutare la fattibilità, la sicurezza e l'efficacia (miglioramento della risposta alla vaccinazione, ma anche miglioramento o mantenimento dello stato funzionale) di due cicli di FMD (1 settimana) somministrati a 30 giorni di distanza, prima vaccinazione antinfluenzale in soggetti anziani pre-fragili. Lo studio arruolerà 40 soggetti pre-fragili di età compresa tra 65 e 80 anni. I soggetti saranno esclusi se hanno conosciuto disturbi o farmaci immunosoppressivi o non hanno ricevuto la vaccinazione antinfluenzale nei due anni precedenti. I soggetti saranno randomizzati 1:1 al braccio A (FMD) o al braccio B (dieta regolare). I soggetti nel braccio A riceveranno la dieta FMD di 5 giorni una volta al mese per 2 mesi (2 cicli completati in 40 giorni: 5-30-5).

Questo si basa sul regime adottato nel nostro studio in corso con soggetti più giovani, ma prevede un ciclo in meno per ridurre al minimo la perdita di peso e altri potenziali effetti collaterali nei soggetti anziani. L'endpoint primario sarà la sicurezza della dieta: gli effetti collaterali della dieta saranno valutati in base a variazione di peso, mal di testa, pressione sanguigna e monitorando attentamente la composizione corporea, ovvero la massa corporea magra, mediante misurazioni di bioimpedenza, forza di presa delle mani e scansioni DEXA. Gli endpoint secondari includeranno: i) la conformità con l'afta epizootica; ii) il miglioramento dei parametri di fragilità e la prevenzione della disabilità nei pazienti di 65-80 anni; iii) il miglioramento dei parametri immunitari dopo 2 cicli di dieta e sarà basato su misure di miglioramento della risposta delle cellule T, riduzione dell'infiammazione, miglioramento dei rapporti linfoidi/mieloidi e numero di HSC/pre-HSC, miglioramento del numero di cellule B e CSR; iv) l'efficacia del vaccino antinfluenzale dosata da livelli di titoli anticorpali più elevati. Inoltre, documenteremo anche il numero di episodi di influenza nel corso del processo. La sperimentazione si svolgerà per un periodo di 3 anni e tutti i soggetti saranno vaccinati nell'autunno di ogni anno con l'attuale preparazione del vaccino influenzale a virus inattivato (Fluzone® high dose, Sanofi Pasteur Inc.) presso l'Ospedale San Martino . Durante la stagione influenzale ogni partecipante riceverà promemoria settimanali per chiamare e segnalare eventuali sintomi simil-influenzali. Questi includeranno sintomi respiratori (tosse, mal di gola, mancanza di respiro e naso chiuso) e sintomi sistemici (mal di testa, malessere, affaticamento, febbre o febbre e dolori muscolari). Le malattie simil-influenzali saranno documentate sulla base della segnalazione di due sintomi respiratori o un sintomo respiratorio e uno sistemico quando è noto che l'influenza circola nella comunità locale. Una diagnosi di laboratorio di malattia influenzale sarà confermata dai risultati dei tamponi rinofaringei per la coltura virale e/o da un aumento del titolo anticorpale pre-post-malattia pari o superiore a 4 volte. I campioni di sangue verranno raccolti al basale, dopo 2 cicli dietetici prima della vaccinazione e 4 settimane dopo la vaccinazione. Il periodo di studio per questo studio sarà cicli dietetici di 2-5 giorni (5-30-5) seguiti da una singola vaccinazione antinfluenzale all'anno. Ogni ciclo dietetico sarà composto da 5 giorni di afta epizootica seguiti da 30 giorni della dieta abituale dei soggetti più un integratore giornaliero di proteine ​​e grassi a base vegetale (20 grammi di proteine ​​+ 30 grammi di olio d'oliva e 30 grammi (totale) di noci, nocciole e mandorle). Questo supplemento giornaliero serve a ridurre al minimo la perdita di peso causata dall'afta epizootica di 5 giorni. Alla prima visita, i soggetti saranno sottoposti a una valutazione fisica per valutare lo stato di salute e fragilità e verrà annotata la storia medica. Verranno raccolti campioni di sangue per le misurazioni di base.

Ai soggetti nel braccio FMD verrà fornita una fornitura di 2 cicli della dieta con le istruzioni. Prima di ricevere il secondo ciclo di FMD, i pazienti saranno sottoposti a un secondo esame obiettivo presso la Clinica Geriatria dell'Università di Genova che comprenderà la valutazione della composizione corporea e la somministrazione del secondo ciclo di FMD sarà consentita solo in assenza di diminuzione della massa magra (vs. basale) come rilevato da BIA, forza di presa e da DEXA. Due settimane dopo il completamento del secondo ciclo dietetico, i soggetti torneranno per valutazione fisica, prelievo di sangue e vaccinazione. La terza e ultima visita sarà 4 settimane dopo la vaccinazione, i soggetti saranno sottoposti a una valutazione fisica e valutazione della composizione corporea e verranno raccolti campioni di sangue. In questa visita, i soggetti saranno anche istruiti a chiamare il coordinatore della ricerca per segnalare malessere, disagio, influenza o sintomi respiratori. Ulteriori follow-up saranno al telefono per monitorare l'insorgenza dell'influenza. I tamponi nasofaringei per la coltura del virus e la conferma dell'influenza saranno raccolti se possibile entro 72 ore da un soggetto che riferisce sintomi di influenza. DIETA: ai soggetti randomizzati nel braccio con dieta ristretta (A) verrà fornito tutto il cibo da consumare durante ciascuno dei tre cicli. I componenti esatti della dieta dipenderanno dai risultati ottenuti in Task

1 ma si prevede che la dieta sia limitata per circa il 30% di calorie e per il 50% di proteine, ma integrata con il 50% della RDA in vitamine e minerali e anche integrata con aminoacidi sia non essenziali che essenziali identificati negli studi sugli animali per essere efficaci. I livelli di integrazione di aminoacidi dipenderanno da studi clinici pubblicati che ne dimostrino la sicurezza e non supereranno i livelli giornalieri raccomandati. I soggetti nel braccio di controllo riceveranno consigli dietetici secondo la pratica standard del medico curante. Ciò includerà la consultazione con un dietista registrato. Un'attenzione particolare sarà rivolta a garantire che i soggetti non perdano peso (a meno che non siano obesi al basale) né perdano massa corporea magra. Verrà inoltre chiesto loro di tenere un diario del cibo consumato e delle quantità approssimative.

VACCINAZIONE: I soggetti saranno vaccinati con la dose standard del vaccino ad alte dosi Fluzone® di Sanofi Pasteur Inc. per ogni anno. Questo vaccino ha quattro volte il normale antigene contenuto nel normale vaccino antinfluenzale ed è appositamente progettato per individui di età pari o superiore a 60 anni.

Criteri per la rimozione dallo studio:

I soggetti verranno rimossi dallo studio se non ricevono la vaccinazione I soggetti verranno rimossi dallo studio se presentano una tossicità inaccettabile correlata alla dieta.

I soggetti verranno rimossi dallo studio se non saranno in grado di recuperare almeno il 95% del loro peso corporeo dopo il primo e il 92% dopo il secondo ciclo. I soggetti verranno rimossi dallo studio in presenza di una diminuzione dell'angolo di fase della bioimpedenza superiore al 5% del valore basale o ogni volta che l'angolo di fase scenderà al di sotto di 5°; o, in alternativa, in quei pazienti in cui le misurazioni della bioimpedenza erano inaffidabili/irraggiungibili, in presenza di una diminuzione della forza di presa delle mani o della massa corporea magra rilevata da DEXA >5% del valore basale. I soggetti possono ritirarsi volontariamente dallo studio in qualsiasi momento, per qualsiasi motivo. OSSERVAZIONI DELLO STUDIO Visita 1: Alla prima visita presso l'Ospedale San Martino (Prof.

P. Odetti, MD, Prof. A. Nencioni). Ciò includerà la documentazione delle malattie croniche e di qualsiasi malattia che potrebbe aumentare il rischio di influenza, tra cui insufficienza cardiaca congestizia, cardiopatia ischemica, malattia polmonare cronica, diabete, insufficienza renale, disturbi neoplastici e disfunzione immunitaria peso e stato delle prestazioni. Tutti i farmaci saranno registrati. Verrà eseguito un esame fisico e verranno determinati l'indice di massa corporea (BMI) e la composizione corporea che devono rientrare nei parametri di inclusione. La pre-fragilità verrà diagnosticata nel partecipante se saranno presenti uno o due dei criteri Fried modificati per la fragilità. Verrà eseguito un prelievo di sangue. Le misurazioni di laboratorio di base includeranno emocromo, glucosio, corpi chetonici, insulina, IGF-I, IGFBP-1, pannello di citochine, rapporto linfoide/mieloide, rapporto CD4+/CD8+, rapporto cellule T naïve/memoria e cellule T CD8+CD28+. Per valutare l'immunità umorale, saranno valutate percentuali e numeri assoluti di linfociti B CD19+, naïve, IgM memory e switch memory B. In breve, le PBMC isolate dal sangue intero saranno arricchite per le cellule B CD19+ utilizzando microsfere anti-CD19 (Miltenyi Biotech). Per isolare cellule di memoria naïve, di memoria e di commutazione, le cellule CD19 saranno selezionate utilizzando un citometro a flusso dopo colorazione con anti-CD27 coniugato PE, IgG umana ChromPure coniugata con biotina-SP e 20 μl di IgA umana ChromPure coniugata con biotina-SP. Per rilevare la CSR in vitro, cellule B CD19 saranno coltivate con anti CD40 e IL-4 per 6-7 giorni. L'espressione di AID nelle cellule B stimolate sarà misurata mediante RT-PCR. L'espressione di E47 sarà misurata mediante western blot. Visita 2: i soggetti torneranno alla clinica al completamento di un ciclo della dieta. I partecipanti saranno sottoposti a una nuova visita medica per valutare la loro attività fisica, neuropsicologica e per determinare l'indice di fragilità. Inoltre, saranno sottoposti anche a valutazione della composizione corporea mediante misurazione della bioimpedenza, scansione DEXA e forza di presa della mano. Verrà eseguito un prelievo di sangue.

I valori di laboratorio includeranno tutte le misurazioni come sopra per valutare i cambiamenti post-dieta in tutti i parametri sopra descritti. Visita 3 (due settimane dopo il secondo ciclo di afta epizootica): come nella visita 2. Inoltre, tutti i soggetti riceveranno una singola iniezione di vaccinazione antinfluenzale. Visita 4: i soggetti torneranno 4 settimane dopo la vaccinazione, quando si prevede che i titoli anticorpali raggiungano il picco. Sui partecipanti eseguiremo gli esami clinici e le valutazioni della composizione corporea effettuate nelle visite precedenti. Le misure di laboratorio saranno come sopra. Inoltre, i titoli anticorpali nel siero saranno misurati mediante il saggio di inibizione dell'emoagglutinazione. L'emoagglutinina per ciascun ceppo virale sarà ottenuta dallo stock CDC. Verranno utilizzate diluizioni 2 volte del siero da 1/10 a 1/1024. La perdita muscolare cronica legata all'età colpisce >30% degli individui sopra i 60 anni e >50% degli individui sopra gli 80 anni. Un'assunzione insufficiente di proteine ​​negli anziani può favorire la perdita di massa muscolare impedendo la sintesi proteica muscolare. Pertanto, verranno condotte misurazioni della bioimpedenza e scansioni DEXA di tutto il corpo per garantire che la dieta non causi perdita di massa muscolare. Follow-up: i soggetti arruolati nello studio saranno chiamati ogni tre mesi dopo la quarta visita (vedi sopra) per sottoporsi a esami fisici e psicologici al fine di valutare l'efficacia dell'afta epizootica nel prevenire la fragilità, rafforzare il sistema immunitario e aumentare l'efficacia dell'influenza vaccino. Durante la stagione influenzale prevista nell'area locale, i soggetti riceveranno telefonate settimanali dal coordinatore della sperimentazione per documentare eventuali sintomi e per ricordare loro di chiamare per segnalare i sintomi. Se possibile, i tamponi NP saranno raccolti entro 72 ore dalla segnalazione dei sintomi facendo recare l'RN alle case dei soggetti. L'incentivo per i partecipanti a segnalare i sintomi in anticipo sarà l'accesso alla diagnosi gratuita e il rinvio al medico di base per il trattamento della malattia influenzale. La non conformità sarà definita come consumo di <50% della dieta prescritta e/o consumo di alimenti non prescritti >150 kcal in uno qualsiasi dei giorni dell'afta epizootica. Saranno analizzati i risultati per i soggetti con una riduzione inferiore al 50% di IGF-I e una riduzione del 40% della glicemia rispetto al basale (intention-to-treat), ma un'analisi secondaria che escluda questi pazienti (sospettati non conformi) può essere eseguita.